牛耳楓主要病害的初步鑒定及其田間藥劑防治試驗

劉威等

摘要：通過野外及種植基地的調查，對牛耳楓上發生的主要病害進行了調查和初步鑒定，共發現2種危害較嚴重的病害，分別鑒定為牛耳楓枯梢病致病菌鐮刀菌屬（Fusarium sp.）、炭疽病病原菌刺盤孢屬（Colletotrichum sp.）。針對這2種病害做了田間藥劑防治試驗，篩選出對枯梢病防治效果較好的化學藥劑為1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑，對炭疽病防治效果較好的化學藥劑為25%丙環唑乳油、10%苯醚甲環唑乳油。

關鍵詞：牛耳楓；病害；化學藥劑；防治效果

中圖分類號： S435.671 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0111-03

收稿日期：2013-08-15

基金項目：廣西省科學研究與技術開發計劃（編號：桂科攻1099063-13）。

作者簡介：劉威（1982—），女，廣西北流人，助理工程師，從事藥用植物病蟲害研究。E-mail：liuwei98@126.com。

通信作者：黃雪彥，碩士，副研究員。E-mail：xueyan-h@163.com。牛耳楓（Daphniphyllum calycinum Benth.）為虎皮楠科植物，其果實、枝葉、根均可入藥，具有祛風止痛、解毒消腫、止痢等功效，主治外感發熱、咳嗽、咽喉腫痛、脅下痞塊、風濕骨痛、跌打損傷、毒蛇咬傷、瘡瘍腫毒等，在廣西，廣東、海南、云南、福建、江西等地均有分布[1]。牛耳楓是海南的道地藥材[2]，也是黎族常用的中草藥[3]，植物中主要含蕓香苷、槲皮素等黃酮類成分及生物堿類成分，其中蕓香苷在牛耳楓藥材中的含量較高，是治療高血壓、心血管疾病、糖尿病等多種疾病的良藥[4]。牛耳楓的葉及種子中含有的生物堿具有抗腫瘤作用[5]。牛耳楓的種子及種仁含油量較高，含油量達30%～40%，可作為制作油漆、肥皂、潤滑油等的原料[6-7]，牛耳楓也是適用于生物柴油資源開發利用的油料樹種。隨著牛耳楓市場需求量的增加，牛耳楓的野生資源已經遠不能滿足市場的要求，需要進行人工栽培方能解決資源匱乏的問題。近幾年來，海南、廣西等地相繼推廣人工牛耳楓的種植，2010—2013年，在廣西南寧市西鄉塘區石埠鄉的牛耳楓種植基地及廣西藥用植物園的種質資源苗圃中均發現了一些重要病害，發生率達50%～70%，嚴重影響了牛耳楓的產量和品質。目前國內對牛耳楓的研究主要集中在化學成分及藥理活性方面，尚無關于其病蟲害研究的報道。本研究通過對牛耳楓生長發育期的觀察，對其上發生的主要病害種類進行調查和鑒定，并初步掌握其發生發展的規律，同時開展了田間藥劑防治對比試驗，以期為牛耳楓病害的有效防治打下基礎。

1材料與方法

1.1試驗材料

染病的牛耳楓植株來源于廣西南寧市西鄉塘區石埠鄉牛耳楓種植基地；藥劑防治試驗也選擇在該種植基地進行。

1.2病害癥狀描述

對不同生長期的牛耳楓病害進行調查，觀察病害在田間的發病情況并記錄病害癥狀。采集具有典型癥狀的病株用于室內病原菌的分離鑒定。

1.3病原鑒定

參考方中達的方法[8]對病原物進行常規組織分離培養和致病性測定。根據病害癥狀、病原菌的培養性狀及形態特征，參照相關文獻資料進行病原菌的種類鑒定。

1.3.1病原菌的分離與純化病原菌采用常規的組織分離法分離。選取初發病的牛耳楓梢部、葉片病健交界處的病組織，剪成0.5 cm×0.5 cm大小組織塊，先用75%乙醇浸泡30 s、01%氯化汞消毒3min，再用滅菌水漂洗3次后置于PDA培養基（配制方法同普通微生物培養試驗）上，于26 ℃條件培養；待長出菌絲后，挑取菌落邊緣進行純化，將純化后的菌落通過單孢分離而獲得純培養分離物。

1.3.2病原菌的致病性測定選取健康的牛耳楓植株，用滅菌蒸餾水沖洗干凈后晾干表面的水分，采用針刺接種的方法將純培養的病原菌菌絲塊接種到牛耳楓的健康梢部、葉片上，以不接種的病原菌組織為對照，每處理設3次重復。接種后置于25～30 ℃自然條件下培養，定期觀察各組織的發病情況。適時對接種發病的組織進行病原菌再分離，觀察分離得到的病原菌是否與接種菌株相同。

1.3.3病原菌的形態學鑒定將有致病性的病原菌菌株接種于PDA培養基平板上，觀察病原菌的培養性狀。在光學顯微鏡下觀察并描述病原菌的菌絲體、產孢結構及孢子的形態，隨機測量100個病原菌分生孢子的大小并拍照，對病原菌種類進行鑒定。

1.4田間防治試驗

1.4.1枯梢病防治試驗

1.4.1.1供試藥劑1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑（西安嘉科農化有限公司）；5%利刃水溶劑[主要成分：雙（烷基氫基）氫基乙酸鹽，西安嘉科農化有限公司]；45%甲霜·惡霉靈可濕性粉劑（山東化聯作物有限公司）。

1.4.1.2試驗設計試驗采用隨機區組設計，每處理設3次重復，每個小區處理面積30 m2，田間隨機排列。以不同的藥劑作為不同的處理，以噴施清水作為空白對照。共施藥3次，期間間隔7 d，以手動背負式噴霧器對全株進行噴霧。首次施藥前將牛耳楓枯梢病病株數及相對應的病情基數做好記錄及標記，第2、3次施藥前及第3次施藥后7 d分別調查1次防效，每個重復調查5點，每點30株，記錄病株率，并按照病情分級進行統計，計算病情指數及防治效果。使用SPSS13.0統計軟件進行測量數據的統計分析。

枯梢病病情分級標準[9-10]如下：0級：全株無??；3級：梢部1/3以下發病；5級：梢部1/3～2/3發??；7級：梢部2/3以上發病；9級：整個梢部發病，梢部以上葉片萎蔫。病情指數、相對防效的計算公式如下。

1.4.2炭疽病防治試驗

1.4.2.1供試藥劑10%苯醚甲環唑乳油（瑞士諾華有限公司）；25%丙環唑乳油（海南博士威農用化學有限公司）；25%咪鮮胺乳油（浙江興農生物化工有限公司）。

1.4.2.2試驗設計試驗以不同的藥劑作為不同的處理，每處理設3次重復，每小區20 m2；以噴施清水作為空白對照。共施藥3次，期間間隔7 d，以手動背負式噴霧器對全株葉片進行噴霧。首次施藥前將牛耳楓的炭疽病總葉數、病葉片數及相對應的各病情基數分別做好記錄，第2、3次施藥前及第3次施藥后7 d分別調查1次防效。每個重復調查5點，每點20株，記錄發病病葉數及相對應的病情級數，按照病害分級進行統計，計算病情指數及防治效果。使用SPSS 13.0統計軟件進行測量數據的統計分析。

牛耳楓炭疽病病葉分級標準[11]如下：0級：全葉無?。?級：病斑面積占葉片面積的6%以下；3級：病斑面積占葉片面積的6%～15%；5級：病斑面積占葉片面積的16%～25%；7級：病斑面積占葉片面積的26%～50%；9級：病斑面積占整個葉片面積的50%以上。病情指數及相對防效的計算公式與枯梢病相同。

2結果與分析

2.1牛耳楓枯梢病

2.1.1病害癥狀牛耳楓枯梢病是苗期發生的主要病害之一，該病主要危害枝干嫩梢頸部，也可危害葉片、葉柄。受害莖稈初期產生水浸狀病斑，然后迅速向上、向下擴大并環繞莖稈，病部凹陷，病莖以上的莖葉呈萎蔫狀，而后由凹陷處下折，最后變褐色并干枯而死。受害葉柄呈水漬狀，病斑沒有明顯的界限，可向上蔓延至葉片，受害后葉片似開水燙過，后期整個梢部易從病部折斷。牛耳楓的枯梢病病害在苗期易發，發生率可達50%～60%，病害的發生與氣溫和雨量關系密切。春、秋陰涼天氣及雨季的發病情況較為嚴重，苗期種植密度過大也會成為該病發生的主要原因。

2.1.2病原菌的致病性測定對牛耳楓用針刺法接種枯梢病病原菌6 d后，牛耳楓開始發病，且發病植株的癥狀與田間的發病癥狀基本一致。重新對接種發病的病健交界處進行分離發現，病原菌形態與原分離物一致。

2.1.3病原菌的鑒定結果將病原菌在PDA平板上培養發現，菌落為圓形或近圓形，邊緣整齊，有絮狀突起，氣生菌絲白色質密。菌落粉白色、淺粉色至肉色，略帶有紫色，由于大量孢子生成而呈粉質。菌落高3～5 mm，分生孢子鐮刀形，上端略彎曲，無色，多胞，兩端細胞稍尖，大?。?4.6～62.4） μm×（5.5～7.9） μm。分生孢子座為紫色小點，直徑100～200 μm，由許多聚集成墊狀的、很短的分生孢子梗形成，頂端著生分生孢子。牛耳楓枯梢病的癥狀及病原形態見圖1。根據以上對病原菌的描述，同時參照《中國真菌總匯》[12]和布斯描述的鐮刀菌形態學特征[13]，將本病原菌初步鑒定為半知菌亞門鐮刀菌屬（Fusarium sp.）。

3結論與討論

本研究對牛耳楓生長過程中主要發生的病害進行調查，通過病害的發病癥狀、病原菌形態特征初步鑒定出牛耳楓枯梢病病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp.），炭疽病病原菌為刺盤孢屬（Colletotrichum sp.），但具體的種名尚未明確，還有待于進一步鑒定?？萆也?、炭疽病這2種病害在田間的發生較為嚴重，且環境條件適宜時極易造成流行發生，因此在防治上應抓住最佳時期用藥，做到早發現早防治。此外還可以結合清除病葉、落葉，及時追肥，選擇適宜的種植密度，雨后及時排水等農業方法進行有效防治。

除對牛耳楓的主要病害種類進行調查外，本研究還在牛耳楓種植基地的發病區對枯梢病、炭疽病進行了田間藥劑對比試驗，篩選出防治枯梢病、炭疽病較好的藥劑，分別為18%辛菌胺醋酸鹽水溶劑、25%丙環唑乳油和10%苯醚甲環唑乳油，為牛耳楓生產上發生這2種病害的化學防治提供了科學依據。

枯梢病及炭疽病是牛耳楓生產過程中極易發生的病害，且病情逐年加重，為了更有效地對這2種病害進行防治控制，還需要進一步對病害的發病條件、病原菌的侵染循環、生物學特性等方面進行更深入的研究，從而促進牛耳楓生產的持續穩定發展。

參考文獻：

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會. 中華本草：第四冊[M]. 上海：上?？茖W技術出版社，1999：865-866.

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[10]沈伯葵，姚景德，張明海，等. 松梢枯病防治技術的研究[J]. 林業科學研究，1993，6（4）：409-413.

[11]姚紅燕，邱宏良，陳若霞，等. 幾種藥劑對草霉炭疽病的效果[J]. 植物保護，2010，36（6）：162-164.

[12]戴芳瀾. 中國真菌總匯[M]. 北京：科學出版社，1979.

[13]布斯. 鐮刀菌屬[M]//陳其煐，譯. 北京：農業出版社，1988.

[14]魏景超. 真菌鑒定手冊[M]. 上海：上海科學技術出版社，1979：468-475.

1.4.2.2試驗設計試驗以不同的藥劑作為不同的處理，每處理設3次重復，每小區20 m2；以噴施清水作為空白對照。共施藥3次，期間間隔7 d，以手動背負式噴霧器對全株葉片進行噴霧。首次施藥前將牛耳楓的炭疽病總葉數、病葉片數及相對應的各病情基數分別做好記錄，第2、3次施藥前及第3次施藥后7 d分別調查1次防效。每個重復調查5點，每點20株，記錄發病病葉數及相對應的病情級數，按照病害分級進行統計，計算病情指數及防治效果。使用SPSS 13.0統計軟件進行測量數據的統計分析。

牛耳楓炭疽病病葉分級標準[11]如下：0級：全葉無??；1級：病斑面積占葉片面積的6%以下；3級：病斑面積占葉片面積的6%～15%；5級：病斑面積占葉片面積的16%～25%；7級：病斑面積占葉片面積的26%～50%；9級：病斑面積占整個葉片面積的50%以上。病情指數及相對防效的計算公式與枯梢病相同。

2結果與分析

2.1牛耳楓枯梢病

2.1.1病害癥狀牛耳楓枯梢病是苗期發生的主要病害之一，該病主要危害枝干嫩梢頸部，也可危害葉片、葉柄。受害莖稈初期產生水浸狀病斑，然后迅速向上、向下擴大并環繞莖稈，病部凹陷，病莖以上的莖葉呈萎蔫狀，而后由凹陷處下折，最后變褐色并干枯而死。受害葉柄呈水漬狀，病斑沒有明顯的界限，可向上蔓延至葉片，受害后葉片似開水燙過，后期整個梢部易從病部折斷。牛耳楓的枯梢病病害在苗期易發，發生率可達50%～60%，病害的發生與氣溫和雨量關系密切。春、秋陰涼天氣及雨季的發病情況較為嚴重，苗期種植密度過大也會成為該病發生的主要原因。

2.1.2病原菌的致病性測定對牛耳楓用針刺法接種枯梢病病原菌6 d后，牛耳楓開始發病，且發病植株的癥狀與田間的發病癥狀基本一致。重新對接種發病的病健交界處進行分離發現，病原菌形態與原分離物一致。

2.1.3病原菌的鑒定結果將病原菌在PDA平板上培養發現，菌落為圓形或近圓形，邊緣整齊，有絮狀突起，氣生菌絲白色質密。菌落粉白色、淺粉色至肉色，略帶有紫色，由于大量孢子生成而呈粉質。菌落高3～5 mm，分生孢子鐮刀形，上端略彎曲，無色，多胞，兩端細胞稍尖，大?。?4.6～62.4） μm×（5.5～7.9） μm。分生孢子座為紫色小點，直徑100～200 μm，由許多聚集成墊狀的、很短的分生孢子梗形成，頂端著生分生孢子。牛耳楓枯梢病的癥狀及病原形態見圖1。根據以上對病原菌的描述，同時參照《中國真菌總匯》[12]和布斯描述的鐮刀菌形態學特征[13]，將本病原菌初步鑒定為半知菌亞門鐮刀菌屬（Fusarium sp.）。

3結論與討論

本研究對牛耳楓生長過程中主要發生的病害進行調查，通過病害的發病癥狀、病原菌形態特征初步鑒定出牛耳楓枯梢病病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp.），炭疽病病原菌為刺盤孢屬（Colletotrichum sp.），但具體的種名尚未明確，還有待于進一步鑒定?？萆也　⑻烤也∵@2種病害在田間的發生較為嚴重，且環境條件適宜時極易造成流行發生，因此在防治上應抓住最佳時期用藥，做到早發現早防治。此外還可以結合清除病葉、落葉，及時追肥，選擇適宜的種植密度，雨后及時排水等農業方法進行有效防治。

除對牛耳楓的主要病害種類進行調查外，本研究還在牛耳楓種植基地的發病區對枯梢病、炭疽病進行了田間藥劑對比試驗，篩選出防治枯梢病、炭疽病較好的藥劑，分別為18%辛菌胺醋酸鹽水溶劑、25%丙環唑乳油和10%苯醚甲環唑乳油，為牛耳楓生產上發生這2種病害的化學防治提供了科學依據。

枯梢病及炭疽病是牛耳楓生產過程中極易發生的病害，且病情逐年加重，為了更有效地對這2種病害進行防治控制，還需要進一步對病害的發病條件、病原菌的侵染循環、生物學特性等方面進行更深入的研究，從而促進牛耳楓生產的持續穩定發展。

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[13]布斯. 鐮刀菌屬[M]//陳其煐，譯. 北京：農業出版社，1988.

[14]魏景超. 真菌鑒定手冊[M]. 上海：上海科學技術出版社，1979：468-475.

1.4.2.2試驗設計試驗以不同的藥劑作為不同的處理，每處理設3次重復，每小區20 m2；以噴施清水作為空白對照。共施藥3次，期間間隔7 d，以手動背負式噴霧器對全株葉片進行噴霧。首次施藥前將牛耳楓的炭疽病總葉數、病葉片數及相對應的各病情基數分別做好記錄，第2、3次施藥前及第3次施藥后7 d分別調查1次防效。每個重復調查5點，每點20株，記錄發病病葉數及相對應的病情級數，按照病害分級進行統計，計算病情指數及防治效果。使用SPSS 13.0統計軟件進行測量數據的統計分析。

牛耳楓炭疽病病葉分級標準[11]如下：0級：全葉無病；1級：病斑面積占葉片面積的6%以下；3級：病斑面積占葉片面積的6%～15%；5級：病斑面積占葉片面積的16%～25%；7級：病斑面積占葉片面積的26%～50%；9級：病斑面積占整個葉片面積的50%以上。病情指數及相對防效的計算公式與枯梢病相同。

2結果與分析

2.1牛耳楓枯梢病

2.1.1病害癥狀牛耳楓枯梢病是苗期發生的主要病害之一，該病主要危害枝干嫩梢頸部，也可危害葉片、葉柄。受害莖稈初期產生水浸狀病斑，然后迅速向上、向下擴大并環繞莖稈，病部凹陷，病莖以上的莖葉呈萎蔫狀，而后由凹陷處下折，最后變褐色并干枯而死。受害葉柄呈水漬狀，病斑沒有明顯的界限，可向上蔓延至葉片，受害后葉片似開水燙過，后期整個梢部易從病部折斷。牛耳楓的枯梢病病害在苗期易發，發生率可達50%～60%，病害的發生與氣溫和雨量關系密切。春、秋陰涼天氣及雨季的發病情況較為嚴重，苗期種植密度過大也會成為該病發生的主要原因。

2.1.2病原菌的致病性測定對牛耳楓用針刺法接種枯梢病病原菌6 d后，牛耳楓開始發病，且發病植株的癥狀與田間的發病癥狀基本一致。重新對接種發病的病健交界處進行分離發現，病原菌形態與原分離物一致。

2.1.3病原菌的鑒定結果將病原菌在PDA平板上培養發現，菌落為圓形或近圓形，邊緣整齊，有絮狀突起，氣生菌絲白色質密。菌落粉白色、淺粉色至肉色，略帶有紫色，由于大量孢子生成而呈粉質。菌落高3～5 mm，分生孢子鐮刀形，上端略彎曲，無色，多胞，兩端細胞稍尖，大?。?4.6～62.4） μm×（5.5～7.9） μm。分生孢子座為紫色小點，直徑100～200 μm，由許多聚集成墊狀的、很短的分生孢子梗形成，頂端著生分生孢子。牛耳楓枯梢病的癥狀及病原形態見圖1。根據以上對病原菌的描述，同時參照《中國真菌總匯》[12]和布斯描述的鐮刀菌形態學特征[13]，將本病原菌初步鑒定為半知菌亞門鐮刀菌屬（Fusarium sp.）。

3結論與討論

本研究對牛耳楓生長過程中主要發生的病害進行調查，通過病害的發病癥狀、病原菌形態特征初步鑒定出牛耳楓枯梢病病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp.），炭疽病病原菌為刺盤孢屬（Colletotrichum sp.），但具體的種名尚未明確，還有待于進一步鑒定。枯梢病、炭疽病這2種病害在田間的發生較為嚴重，且環境條件適宜時極易造成流行發生，因此在防治上應抓住最佳時期用藥，做到早發現早防治。此外還可以結合清除病葉、落葉，及時追肥，選擇適宜的種植密度，雨后及時排水等農業方法進行有效防治。

除對牛耳楓的主要病害種類進行調查外，本研究還在牛耳楓種植基地的發病區對枯梢病、炭疽病進行了田間藥劑對比試驗，篩選出防治枯梢病、炭疽病較好的藥劑，分別為18%辛菌胺醋酸鹽水溶劑、25%丙環唑乳油和10%苯醚甲環唑乳油，為牛耳楓生產上發生這2種病害的化學防治提供了科學依據。

枯梢病及炭疽病是牛耳楓生產過程中極易發生的病害，且病情逐年加重，為了更有效地對這2種病害進行防治控制，還需要進一步對病害的發病條件、病原菌的侵染循環、生物學特性等方面進行更深入的研究，從而促進牛耳楓生產的持續穩定發展。

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