基質金屬蛋白酶 -9、白細胞介素-9、轉錄因子1、細絲蛋白A及腫瘤浸潤性樹突狀細胞在降結腸癌組織中的表達及臨床意義

王治偉 姚書鵬 高王軍

結腸癌是世界范圍內高發病率和死亡率的惡性腫瘤[1-2]。隨著治療手段的提高，結腸癌病人的總生存率有所提高，但該病仍然是男性和女性癌癥相關死亡率的第三大原因[3]。有研究表明，基質金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)、白細胞介素-9(interleukin-9，IL-9)、Ets轉錄因子1(etsTranscription factor 1，Ets-1)、細絲蛋白A(filament protein A，FLNa)及腫瘤浸潤性樹突狀細胞(tumor infiltrating dendritic cells，TIDC)在結腸癌病人中表達異常[4-6]。本研究觀察上述生物學因子在結腸癌組織中的變化及其與臨床病理因素的相關性。

對象與方法

一、 對象

2017年1月30日～2018年3月30日我院收治的降結腸癌病人60例。年齡42～78歲，平均年齡(54.2±5.8)歲，男36例，女24例，中低分化33例，高分化27例;TNM分期Ⅰ期20例，Ⅱ期25例，Ⅲ期15例。淋巴結轉移23例，無淋巴結轉移37例。納入標準：術后切除病理確診為降結腸腺癌；第7版ACJJ TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期；接受降結腸腺癌根治術，可獲得組織標本；術前排除遠處轉移；依從性可；術前未接受其他抗腫瘤治療。排除標準：復發或轉移結腸癌；意識障礙；合并嚴重腦心肝臟等基礎疾病、其他惡性腫瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病；其他胃腸道疾病如克羅恩病。

二、方法

1.檢測方法：采集降結腸腺癌組織、癌旁組織(癌旁5 cm外組織)、正常結腸組織為研究標本(1 cm×1 cm×1 cm)。將樣本加入400 μl 裂解液中，混勻。將裂解液在12 000 r/min離心機上離心，離心5分鐘，取上清液。MMP-9、FLNa的檢測均使用 ELISA法。總RNA采用Trizol法提取，Ets-1、IL-9的表達水平使用ABI 7500實時熒光定量 PCR 儀檢測，以2-△△Ct值>2為差異有統計學意義。進行免疫組化染色，采用PBS為陰性對照，400倍鏡下隨機取10個視野中的TIDC平均值為組織中TIDC密度。

2.觀察指標：比較3種組織中MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa及TIDC密度差異，分析復發轉移、腫瘤最大直徑、腫瘤分化程度、TNM分期等與MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa及TIDC密度相關性。分析MMP-9與IL-9、Ets-1、FLNa、TIDC相關性。

三、統計學處理

結 果

1.不同組織中MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa水平及TIDC密度見表1。結果顯示，3種組織中MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa水平及TIDC密度比較差異有統計學意義(P<0.05)，癌組織中MMP-9、Ets-1高于癌旁組織、正常結腸組織，癌旁組織MMP-9、Ets-1高于正常結腸組織。癌組織中IL-9、FLNa、TIDC低于癌旁組織、正常結腸組織，癌旁組織IL-9、FLNa、TIDC低于正常結腸組織，差異均有統計學意義(P<0.05)。

表1 不同組織中MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa水平及TIDC密度比較

注：與正常結腸組織比較，aP<0.05；與癌旁組織比較，bP<0.05

2.臨床病理因素與MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa及TIDC密度相關性分析見表2。結果表明，MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa及TIDC密度與復發轉移、TNM分期、腫瘤分化程度均具有相關性(P<0.05)。MMP-9、Ets-1、FLNa與腫瘤直徑有相關性(P<0.05)。MMP-9、Ets-1高水平病人復發轉移率、TNM Ⅲ期比例、腫瘤直徑>5 cm、中低分化腫瘤比例高。IL-9、FLNa水平及TIDC密度低病人復發轉移率、TNM Ⅲ期比例、中低分化腫瘤比例高。FLNa低水平病人腫瘤直徑>5 cm比例高。

表2 臨床病理因素與MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa及TIDC密度相關性

注：同一指標組內比較，差異有統計學意義，cP<0.05

3.MMP-9與IL-9、Ets-1、FLNa及TIDC密度相關性：在腫瘤組織中，MMP-9與Ets-1呈正相關(r=0.35，P<0.05)，與IL-9、FLNa及TIDC密度呈負相關(r=-0.31、-0.36、-0.41，P<0.05)。Ets-1與IL-9及TIDC呈負相關(r=-0.32、-0.35，P<0.05)，與FLNa無相關性。FLNa與IL-9、TIDC無相關性。IL-9與TIDC呈正相關性(r=0.42，P<0.05)。

討 論

MMPs通過調節細胞外基質的降解參與癌細胞的侵襲和轉移。有研究證實，MMPs對細胞外基質選擇性降解是腫瘤細胞遷移和侵襲的必要步驟[7]，根據其底物的特異性MMPs分為間質膠原酶、明膠酶、溶基質素、基質溶素、膜型MMPs等。MMP-9是明膠酶的重要成員，也被稱為明膠酶B，參與多種人類惡性腫瘤的發展，可促進腫瘤進展，包括侵襲、轉移、生長和血管生成[8]。本研究證實，結腸癌組織中MMP-9表達水平高于癌旁組織和正常結腸組織，且升高的MMP-9與結腸癌較大腫瘤直徑、較高TNM分期、較高復發轉移率及較低腫瘤分化程度相關。Yang等[9]研究觀察了結腸癌組織中MMP-9的表達情況，發現癌組織中MMP-9顯著高于正常組織，且高水平MMP-9表達與淋巴結轉移、Dukes分期及較短的存活時間相關，與本研究結果相符。

免疫調節在腫瘤生長和轉移中意義重大。IL-9屬于常見γ鏈細胞因子家族成員，通過與IL-9受體結合發揮其功能，其細胞來源多樣，包括T輔助細胞亞群、調節性T細胞、肥大細胞和自然殺傷T細胞。IL-9在腫瘤免疫中功能仍不清楚。大量研究證實，IL-9過表達與淋巴瘤和白血病的進展相關[10]。樹突狀細胞屬于功能強大的抗原呈遞細胞，通過激活細胞毒性T細胞殺傷腫瘤細胞，目前關于TIDC和IL-9在結直腸癌中研究較少，本研究證實，結腸癌組織中IL-9、TIDC下降，且與較高復發轉移率、TNM Ⅲ期比例、中低分化腫瘤相關，提示IL-9、TIDC可能在結腸癌發生中發揮重要作用，可能用于預測腫瘤預后。薩仁高娃等[5]研究也證實TIDC在結直腸癌中密度下降，且低密度與高復發率相關，與本研究結果相符。

本研究還證實結腸癌組織中FLNa表達水平下降，Ets-1表達水平升高。Ets-1屬于原癌基因，研究證實Ets-1通常與MMP-9同時存在，Ets-1可通過促進MMP表達增強腫瘤細胞侵襲性[11]。在本研究中Ets-1表達水平升高病人預后更差，其水平與病人病理因素相關，且Ets-1與MMP-9呈正相關性，證實了上述研究結果。FLNa屬于大分子胞質蛋白，體外研究證實其能夠阻斷MMP-9表達信號通路，降低細胞侵襲力[12]。周昱[4]研究也證實結腸癌組織中FLNa表達水平下降，Ets-1表達水平升高，與本研究結果相符。

綜上所述，降結腸癌組織中MMP-9、Ets-1水平升高，IL-9、Ets-1、TIDC水平降低，且與病人復發轉移及病理因素相關。