白耙齒菌菌絲培養環境條件的研究

于 萍，隋飛飛，陳艷秋，冉麗萍

(延邊大學農學院，吉林 延吉 133002)

白耙齒菌菌絲培養環境條件的研究

于 萍，隋飛飛，陳艷秋，冉麗萍*

(延邊大學農學院，吉林 延吉 133002)

以菌絲干重和菌絲生長速度為考核指標，通過單因素試驗，對白耙齒菌菌絲生長的培養基配方、溫度、pH值及通氣條件進行篩選。試驗結果表明，最適培養基為YPAD培養基，最適溫度為32℃，最適pH值為7.0，在正常通氣培養條件下有利于菌絲生長和干重積累。

白耙齒菌；菌絲；培養環境條件

白耙齒菌Irpexlacteus(Fr.) Fr.，又名白囊孔菌、白囊耙齒菌，分類學上隸屬于擔子菌亞門(Basidiomycetes)、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、耙齒菌屬(IrpexFr.)[1]。白耙齒菌子實體為一年生擔子果，形態結構多變，菌蓋表面乳白色至淺黃色，子實層體奶油色至淡黃色，幼時孔狀，成熟后撕裂成耙齒狀[2]。

在國外，白耙齒菌的應用主要集中在脫色合成染料[3，4]和降解土壤中各種頑固有機污染物[5]。在我國白耙齒菌主要用作藥物制劑，目前已開發出多種藥劑產品，如腎炎康、益腎康膠囊等[6]。白耙齒菌含有多種藥用成分[7-9]，具有很高的藥用價值以及市場開發潛力。目前對白耙齒菌的研究主要集中在化學成分及藥理作用上，人工培養研究較少，因此本試驗在篩選其最佳培養基配方的基礎上對其環境條件進行研究，為人工馴化栽培奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株子實體由課題組成員于2010年采自長白山林區，經吉林農業大學圖力古爾教授鑒定為白耙齒菌。將子實體帶回實驗室進行組織分離，在PDA培養基上純化獲得供試菌株。菌種由延邊大學農學院應用真菌實驗室保存。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同培養基對白耙齒菌菌絲生長的影響

培養基分別采用PDA培養基、CPDA培養基、YPAD培養基、PGY培養基、TY培養基、SEM培養基、1號培養基(葡萄糖 10 g·L-1、酵母膏 10 g·L-1、淀粉 10 g·L-1、NaCl 5 g·L-1、CaCO33 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1)。每個處理重復5次，采用平板培養法，每個培養皿中裝培養基35 mL，高溫高壓滅菌后，接直徑為0.5 cm的菌塊于培養皿中央，在25℃恒溫箱中進行暗培養。待菌塊發菌后，利用十字交叉法測定菌落直徑，定時觀察并記錄菌絲生長速度、菌絲長勢及菌落邊緣整齊度等特征。待菌絲長滿后刮取菌絲，于45℃恒溫箱中烘干后，采用電子天平(余姚市金諾天平儀器有限公司，精確度為萬分之一)稱量并記錄菌絲干重。數據采用SPSS 11.5軟件中的Duncan檢驗進行差異顯著性分析(顯著水平為p<0.05)。

1.2.2 不同溫度對白耙齒菌菌絲生長的影響

利用獲得的最佳培養基作為基礎培養基，分別設置20℃、23℃、26℃、29℃、32℃、35℃六個處理。其它試驗方法、步驟、測定項目同1.2.1。

1.2.3 不同pH值對白耙齒菌菌絲生長的影響

利用獲得的最佳培養基作為基礎培養基，分別設置pH 4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0八個處理。其它試驗方法、步驟、測定項目同1.2.1。

1.2.4 不同通氣條件對白耙齒菌菌絲生長的影響

利用獲得的最佳培養基作為基礎培養基，分別設置單層牛皮紙包扎(A)、單層聚乙烯塑料薄膜包扎(B)2個處理，以不包扎(C)作為對照。其它試驗方法、步驟、測定項目同1.2.1。

2 結果與分析

2.1 不同培養基對白耙齒菌菌絲生長的影響

不同培養基對白耙齒菌菌絲生長的影響見表1。

表1 不同培養基對白耙齒菌菌絲生長的影響

注：+表示生長稀疏；++表示生長較致密；+++表示生長致密；小寫字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。下同。

從表1中可以看出，白耙齒菌菌絲可以利用多種培養基，但不同培養基對白耙齒菌菌絲生長的影響明顯不同。在CPDA培養基上菌絲生長速度最快，但菌絲長勢弱；在YPAD培養基上培養的白耙齒菌菌絲粗壯，潔白，邊緣整齊，菌絲干重顯著高于其他處理。因此，白耙齒菌菌絲生長的最適培養基為YPAD培養基。

2.2 不同溫度對白耙齒菌菌絲生長的影響

不同溫度對白耙齒菌菌絲生長的影響明顯不同，結果見表2。

表2 不同溫度對白耙齒菌菌絲生長的影響

如表2所示，白耙齒菌菌絲在20℃～35℃范圍內均能生長，但不同溫度下長勢明顯不同。在20℃～32℃范圍內，菌絲的日均生長速度和菌絲干重隨溫度的升高而增加，隨后菌絲干重隨溫度的升高而減少。32℃時菌絲粗壯，濃密，邊緣整齊，干重最大，為 187.18 mg 。因此，白耙齒菌菌絲生長的最適生長溫度為32℃。

2.3 不同pH值對白耙齒菌菌絲生長的影響

不同pH值對白耙齒菌菌絲生長速度和干重的影響明顯不同，結果見表3。

表3 不同pH值對白耙齒菌菌絲生長的影響

由表3可見，pH值在4.5～8.0之間菌絲均能生長。pH值在4.5～7.0范圍內時，菌絲干重隨pH值的增大而增大，pH值在7.0～8.0范圍內時，菌絲干重和日均生長速度隨pH值的增大而減小。pH值為7.0時，菌絲濃密，粗壯，邊緣整齊，菌絲干重最大，為 251.31 mg。因此，白耙齒菌菌絲生長的最適宜pH值為7.0。

2.4 不同通氣條件對白耙齒菌菌絲生長的影響

不同通氣條件對菌絲生長沒有明顯影響，結果見表4。

表4 不同通氣條件對白耙齒菌菌絲生長的影響。

由表4可見，3種處理下菌絲生長速度沒有明顯差異，但不包扎處理(C)時菌絲干重最大，為 113.43 mg，其次是牛皮紙包扎(A)，二者差異不顯著。采用單層聚乙烯塑料薄膜(B)包扎時，菌絲長勢較弱，說明在正常通氣培養條件下有利于白耙齒菌菌絲生長和干重積累。

3 小結

試驗證明，白耙齒菌菌絲生長的最佳培養基配方為YPAD培養基(酵母膏 10 g·L-1、蛋白胨 20 g·L-1、葡萄糖 20 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1)；29℃～32℃范圍內有利于白耙齒菌生長，最適培養溫度為32℃；pH在6.5～7.5范圍內適合白耙齒菌菌絲生長，以pH7.0為最佳；正常通氣培養條件下有利于白耙齒菌菌絲生長和干重積累。大多數食(藥)用菌的最適溫度為25℃左右，白耙齒菌最適溫度為32℃，較大多數食(藥)用菌偏高，但與有柄靈芝[10]和香味全緣孔菌[11]相差不大。白耙齒菌液體培養及出菇試驗還有待于進一步研究。

[1]圖力古爾，戴玉成. 長白山主要食藥用木腐真菌多樣性及其保育[J]. 菌物研究，2004，2(2)：26.

[2]戴玉成，圖力古爾. 中國東北野生食藥用真菌圖志[M]. 北京：科學出版社，2007：100.

[4]Duraisamy Kalpana, Natarajan Velmurugan, Jae Hong Shim,et al. Biodecolorization and biodegradation of reactive Levafix Blue E-RA granulate dye by the white rot fungusIrpexlacteus[J]. Journal of Environmental Management, 2012, 111(30): 142-149.

[5]Eduard Borràs, Gloria Caminal, Montserrat Sarrà, et al. Effect of soil bactera on the ability of polycyclic aromatic hydrocarbonsb (PAHs) removal byTrametesversicolorandIrpexlacteusfrom contaminated soil[J]. Soil Biology and Biochemistry, 2010, 42(12): 2087-2093.

[6]戴玉成，圖力古爾. 中國東北野生食藥用真菌圖志[M]. 北京：科學出版社，2007：100.

[7]楊真威，姜瑞芝，陳英紅，等. 耙齒菌糖蛋白的提取分離、理化性質及抗炎活性[J]. 天然產物研究與開 發，2005，17(3)：280-282.

[8]石陶圣，吳凌，趙興紅，等. 響應面法優化白囊耙齒菌胞內多糖提取條件[J]. 中國醫藥工業雜志，2009，40(10)：743-746.

[9]張蒙，杜琳娜，張野，等. 響應面法結合滿意度函數優化白囊耙齒菌發酵培養基[J]. 中國醫藥工業雜志，2011，42(1)：17-20.

[10]梁志群，陳子武. 有柄靈芝菌絲生物學特性研究[J]. 中國農學通報，2011(18)：164-167.

[11]魏玉蓮，周寶祥. 香味全緣孔菌培養條件的研究[J]. 林業科學研究，2005(4)：451-454.

Research on Culture Conditions ofIrpexlacteusMycelia

YU Ping, SUI Fei-fei, CHEN Yan-qiu, RAN Li-ping

(Agricultural College of Yanbian University, YanjiJilin133002)

Take mycelium dry weight and growth rate as evaluation indexes, the best conditions forIrpexlacteuscultivation were screened through one-way analysis of variance. The results showed that the YPAD mycelium was most suitable for mycelial growth, and the optimal temperature and pH were 32℃ and 7.0 respectively. This study also indicated that the normal ventilation conditions was good for mycelial growth and accumulation of dry weight.

Irpexlacteus; Mycelial growth; Culture condition

于萍(1990-)，女，在讀碩士研究生，研究方向為特種植物資源與生物技術。

*通信作者： 冉麗萍，女，主要從事地方種質資源開發與利用的研究。E-mail: cyq326@126.com

2014-07-25

S646.9

A

1003-8310(2014)05-0035-02