高效液相色譜法測定清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸的含量

沈秀玲

高效液相色譜法測定清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸的含量

沈秀玲

目的對高效液相色譜法檢測清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸含量的效果進行分析探討，為今后的藥學研究工作提供可靠的參考依據。方法固定相為C18硅膠柱，流動相為甲醇-0.4%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1.0ml/min，波長為323nm。結果綠原酸的線性范圍4.251～105.900μg/ml，r=0.9998，黃芩苷的線性范圍9.223～203.700μg/ml，r=0.9999。實驗的重現性、精密度良好，樣品穩定性理想。結論經高效液相色譜法對清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸含量進行檢測具有操作簡單、快速、結果準確可靠、精密度與重現性理想，在清開靈注射液質量控制中具有重要作用，值得關注。

清開靈注射液；黃芩苷；綠原酸；含量測定；高效液相色譜法

本次研究出于對清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸含量進行檢測的目的，采取高效液相色譜法對清開靈注射液的有效成分黃芩苷和綠原酸展開了含量測定，現匯報結果如下。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器 所用儀器為KNAUER高效液相色譜儀，包括有K-501HPLC泵、分析型動態混合器、K-2600UV Detector、7725i手動進樣閥、Eero-chrom 2000 Basic Edition色譜工作站軟件V2、O5和T3000柱溫箱，除以上儀器外還需用到KQ-400BD型數控超生波清洗器、U-1900型紫外分光光度計、賽多利斯BP211D電子分析天平、離心機等。

1.2 試劑與試藥 實驗中所用試劑包括甲醇、磷酸均為分析純，中蒸餾水。所用試藥包括清開靈注射液，批號為 MP1231、MP1232、MP1233。綠原酸對照品、黃芩苷對照品均購自中國藥品生物制品檢定所。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為 C18硅膠柱，規格為150.0mm×4.6mm，5μm，流動相為：分析甲醇-濃度為 0.4%的磷酸水溶液，梯度洗脫，流速控制在1.0ml/min，柱溫為30℃，檢測波長為323nm，進樣量為20μl[1]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱定5.31mg的綠原酸對照品和11.53mg的黃芩苷對照品，分別放置在25ml的棕色容量瓶中，綠原酸經甲醇-水=1:1溶解后定容，黃芩苷首先經純甲醇溶解，而后經甲醇-水=1:1定容。制成濃度為0.2124mg/ml的綠原酸對照品溶液和濃度為0.4612mg/ml的黃芩苷對照品溶液，冰箱內低溫保存。

2.2.2 供試品溶液制備 準確吸取1.0ml的清開靈注射液，放置在10ml的容量瓶中，經甲醇-水=1:1溶液定容至刻度，取1.0ml溶液放置在10ml的容量瓶中，甲醇-水=1:1定容至刻度。制成供試品溶液備用[2]。

2.3 線性關系考察 精密量取綠原酸、黃芩苷對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別放置在 5ml的棕色容量瓶中，經甲醇-水=1:1定容至刻度，搖勻后經0.45微孔濾膜過濾，以2.1所示色譜條件進樣檢測，將標準物的峰面積作為縱坐標，將標準物的濃度作為橫坐標，繪制標準曲線。經計算發現，綠原酸與黃芩苷的線性回歸方程分別為：Y綠原酸=891.82C－0.6113，r=0.9998，證實綠原酸濃度范圍在 4.251～105.900μg/ml之間存在良好線性關系；Y黃芩苷=671.02C－0.9891，r=0.9999，證實黃芩苷濃度范圍在9.223～203.700μg/ml之間存在良好的線性關系。

2.4 精密度實驗 精密量取線性關系下濃度的綠原酸、黃芩苷對照品溶液各0.8ml，經2.1色譜條件分別連續進樣6次，測定綠原酸與黃芩苷的峰面積，計算RSD值。結果發現，綠原酸峰面積的RSD值為0.76%，黃芩苷峰面積的RSD值為1.82%，證實儀器具有良好的精密度。

2.5 重現性實驗 取同一批次的清開靈注射液，經2.2所示條件制成供試品溶液，在2.1所示色譜條件下對綠原酸、黃芩苷的峰面積分別進行測定，計算RSD值。結果發現，綠原酸峰面積的 RSD值為1.98%，黃芩苷峰面積的RSD值為2.67%，證實重現性理想。

2.6 穩定性實驗 精密量取0.1ml清開靈注射液，經2.2所示制成供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12h內以2.1所示色譜條件進樣檢測，計算RSD值，結果發現綠原酸峰面積的RSD值為1.7%，黃芩苷峰面積的RSD值為0.51%，證實清開靈注射液在12h內可保持足夠穩定性。

2.7 加樣回收實驗 精密量取0.1ml樣品，共3份，放置在 50ml棕色容量瓶中，分別加入綠原酸對照品0.4、0.6、0.8ml，黃芩苷對照品0.5、1.0、1.5ml，而后經甲醇-水=1:1溶解并定容，經2.1色譜條件進樣檢測。計算回收率，結果發現，綠原酸平均回收率為102.00%，黃芩苷的平均回收率為100.42%，見表1。

2.8 樣品中綠原酸與黃芩苷含量測定 取3個批次的清開靈注射液，經2.2所示方法制成供試品溶液，在2.1所示色譜條件下進樣檢測，測定綠原酸與黃芩苷的峰面積，以線性回歸方程計算二者的含量。結果發現，各批次樣品中綠原酸與黃芩苷含量無明顯差異，分別為（0.2246±0.0123）%、（4.2198± 0.2141）%。

表1 加樣回收實驗結果統計(%)

3 討論

目前在臨床上清開靈注射液具有良好的退燒、抗炎作用，其是由黃芩和金銀花組成的一種復方中藥注射劑，現代藥理研究結果顯示，清開靈注射液的主要有效成分為黃芩苷、綠原酸等，現階段在清開靈注射液質量控制中，一般以這兩種成分作為質控標準[3]。本次實驗發現，經高效液相色譜法對清開靈注射液中綠原酸、黃芩苷進行測定時具有良好的精密度、重現性，結果準確可靠，操作簡單迅速，值得關注。

[1] 唐奇.HPLC法測定復方金銀花顆粒中綠原酸的含量[J].中國現代藥物應用,2010,4(19):133-134.

[2] 李昌海,譚忠軍.高效液相色譜法測定麻杏止咳合劑中綠原酸含量[J].中國藥業,2010,19(19):21-22.

[3] 劉放,陳冰冰,吳小平,等.HPLC法測定菊花中綠原酸的含量[J].西北藥學雜志,2010.25(05):350-352.

R927.2

A

1673-5846(2014)02-0030-02

吉林省集安益盛藥業，吉林通化 134200