核桃不同品種（系）對細菌性黑斑病的抗性鑒定

孫俊

摘要：選取遼寧地區12個核桃（Juglans regia）主栽品種（系）的兩年生嫁接苗，采用5種方法分別接種核桃細菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）進行抗病鑒定，并比較各品種（系）苗期抗性差異，同時比較及篩選接種方法。

關鍵詞：核桃（Juglans regia）；抗性；細菌性黑斑病病菌（Xanthomonas campestris）

中圖分類號：S664.1；S436.612.14 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）05-1058-03

胡桃（Juglans regial） 原產中亞，又叫核桃、羌桃、合桃等。是胡桃科（Juglandaceae）胡桃屬（Juglans）多年生落葉喬木。中國的核桃栽培歷史悠久，種質資源豐富。核桃仁中含有豐富的脂肪、蛋白質、碳水化合物及微量元素，具有較高的營養價值。中醫認為核桃性溫、味甘、無毒，有健胃、補血、潤肺、養神等功效[1]。20世紀90年代以來，各國科學家通過營養學和病理學研究認為，核桃對于心血管疾病、Ⅱ型糖尿病、癌癥和神經系統疾病有一定的康復治療和預防效果。隨核桃的種植面積擴大，核桃病害發生越來越嚴重，核桃細菌性黑斑病的發生最為嚴重，尤其是在遼寧地區，造成大量的落葉、落果，引起巨大的經濟損失。藥劑試驗證明用鋅銅波爾多液和細菌靈防治效果較好。

本研究對我國核桃黑斑病的研究現狀進行了分析，選取遼寧地區12個核桃主栽品種（系），采用5種接種方法，系統地測定了不同核桃品種（系）對細菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）的抗性差異，從而為核桃的抗病育種及科學防治提供一定的理論基礎。

核桃在幼果期受害后，果面上出現黑色小斑點，病斑擴大，呈不規則下陷斑，并深入果肉，果實黑腐早落。成熟果實發病后，外果皮變黑，果仁呈現不同程度的干癟和黑斑，出油率和食用價值大大降低。葉片受害后，在葉脈處形成多角形病斑，嚴重時病斑相互融合，病葉皺縮畸形。嫩梢受害后，病斑長條形、褐色稍凹陷，病斑包圍枝條一圈時，病斑以上枝條枯死[2]。

病菌在病枝、芽內及病斑內越冬，翌年春季核桃展葉期借雨水和昆蟲活動進行傳播。先感染葉片，病芽初展開時嫩葉極易受害，然后由葉片傳播到果實和枝條上。花序也易受侵染而產生水漬狀斑。雄花受侵染時，花粉也可以傳病。蚜蟲、蜜蜂、壁虱、螞蟻和舉肢蛾也能傳播病害。氣溫在4～30 ℃時對葉片感病，5～27 ℃對果實能感病、潛育期10～15 d，侵入的細菌主要破壞柔膜組織。發病的輕重與雨水有關。溫度高濕度大的雨季發病高峰期一般在核桃展葉期至開花期 [3]。

陳善義等[4]采用針刺法接種健康核桃枝條和葉片進行致病性測定，并通過對病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析，確定其病原菌分類地位，分析證明該病原細菌為Xanthomonas campestris。

1 材料與方法

1.1 栽培品種（系）

核桃品種（系）遼寧1號、遼寧4號、遼寧5號、遼寧6號、遼寧7號、禮品1號、禮品2號、寒豐、薄殼香、“30301”、“19-12”、“19-21”共計12個，均為兩年生嫁接苗，由遼寧省經濟林研究所核桃研究室提供。其中“30301”、“19-12”、“19-21”為選育的優系；遼寧5號、“30301”、“19-12”以核桃楸為砧木，其他品種（系）是以核桃為砧木。4月定植于溫室大棚中，5月底進行接種試驗。

1.2 菌株準備

采用常規分離法進行病原菌分離和純化[5]。在肉汁胨培養基平板上劃線并于28 ℃下培養。分離純化后所得菌株于斜面中4 ℃保存。挑取單菌落用肉汁胨培養基擴大培養，4 d后接種，菌體懸浮液接種，濃度為108 CFU/mL。

1.3 接種方法

采用5種方法進行接種。（A）噴霧接種葉片。接種前24 h噴霧保濕，以保證葉片氣孔張開，每棵植株隨機選取20片葉片做好標記并用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共60片）；（B）針刺噴霧接種葉片。每棵植株隨機選取10片葉片做好標記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共30片）；（C）針刺涂抹接種葉片。每棵植株隨機選取10片葉片做好標記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復3次（共30片）；（D）針刺噴霧接種新梢。每棵植株上隨機選取5個新梢做好標記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共15枝）；（E）針刺涂抹接種新梢。每棵植株上隨機選取5個新梢做好標記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復3次（共計15枝）。以上每種處理以不接種病原菌為對照。接種后48 h內控制濕度90%，接種后15～17 d調查各處理的發病率。

發病率=■×100%

2 結果與分析

不同核桃品種（系）對核桃細菌性黑斑病菌抗性鑒定結果見表1。由表1可知，12個品種（系）的核桃苗接種后感病情況差異較大。由于A、B兩種方法最接近田間自然發病條件，因此苗期核桃抗性以方法A和B的平均值作為主要參考。其中遼寧7號發病率最低，抗性最好；其次是禮品1號和遼寧4號也表現出較高的抗性。而“30301”發病率高達74.17%，抗性最低，其次是遼寧1號，發病率為55.00%。新梢發病率也有差異，其中接種后遼寧7號和寒豐未發現病斑，而薄殼香新梢發病率較高。

各品種（系）的發病癥狀見圖1，其中遼寧7號癥狀最輕，在葉片上僅表現出輕微的退綠斑，禮品1號的病斑也極小，表現為針尖狀褐色斑點；最嚴重為“30301”，病斑最多且逐漸融合，遼寧1號病斑較大。

3 小結與討論

國內外關于核桃細菌性黑斑病的病原、發病規律等均已有較系統的研究，而關于病害的防治中多為藥劑防治的篩選等，關于品種（系）抗病性的研究較少。鑒于此，本研究就遼寧省核桃苗期主栽品種（系）對細菌性黑斑病的抗性做了初步試驗，并對接種方法做了比較，結果顯示，人工接種條件下不同栽培品種（系）表現明顯的抗性差異，其中遼寧7號、禮品1號和遼寧4號抗性較強； “30301”、遼寧1號和“19-21”抗性較弱。

本試驗存在一定的局限性，接種材料為兩年生的嫁接苗，與成株期相比樹勢、樹體各方面均存在較大的差異；試驗在溫室大棚中進行并且人工接種，與露地自然發病條件相比有較大差異。但試驗結論能對抗病育種起到一定的指導作用。

參考文獻：

[1] 李時珍.本草綱目（下冊）[M].北京：人民衛生出版社，1982.

[2] 張永強，朱惠英，馮 強，等.核桃黑斑病病原研究與防治試驗初

報[J].甘肅林業科技，2004，29（2）：41-42.

[3] 李海菊，郝新科，牛 卿，等.核桃黑斑病發生與防治[J].河北果樹，2004（5）：44-45.

[4] 陳善義，陶萬強，王 合，等.北京地區核桃黑斑病病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析[J].果樹學報，2011， 28（3）：469-473.

[5] 方中達.植病研究方法[M].北京：中國農業出版社，1998.193-194.

摘要：選取遼寧地區12個核桃（Juglans regia）主栽品種（系）的兩年生嫁接苗，采用5種方法分別接種核桃細菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）進行抗病鑒定，并比較各品種（系）苗期抗性差異，同時比較及篩選接種方法。

關鍵詞：核桃（Juglans regia）；抗性；細菌性黑斑病病菌（Xanthomonas campestris）

中圖分類號：S664.1；S436.612.14 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）05-1058-03

胡桃（Juglans regial） 原產中亞，又叫核桃、羌桃、合桃等。是胡桃科（Juglandaceae）胡桃屬（Juglans）多年生落葉喬木。中國的核桃栽培歷史悠久，種質資源豐富。核桃仁中含有豐富的脂肪、蛋白質、碳水化合物及微量元素，具有較高的營養價值。中醫認為核桃性溫、味甘、無毒，有健胃、補血、潤肺、養神等功效[1]。20世紀90年代以來，各國科學家通過營養學和病理學研究認為，核桃對于心血管疾病、Ⅱ型糖尿病、癌癥和神經系統疾病有一定的康復治療和預防效果。隨核桃的種植面積擴大，核桃病害發生越來越嚴重，核桃細菌性黑斑病的發生最為嚴重，尤其是在遼寧地區，造成大量的落葉、落果，引起巨大的經濟損失。藥劑試驗證明用鋅銅波爾多液和細菌靈防治效果較好。

本研究對我國核桃黑斑病的研究現狀進行了分析，選取遼寧地區12個核桃主栽品種（系），采用5種接種方法，系統地測定了不同核桃品種（系）對細菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）的抗性差異，從而為核桃的抗病育種及科學防治提供一定的理論基礎。

核桃在幼果期受害后，果面上出現黑色小斑點，病斑擴大，呈不規則下陷斑，并深入果肉，果實黑腐早落。成熟果實發病后，外果皮變黑，果仁呈現不同程度的干癟和黑斑，出油率和食用價值大大降低。葉片受害后，在葉脈處形成多角形病斑，嚴重時病斑相互融合，病葉皺縮畸形。嫩梢受害后，病斑長條形、褐色稍凹陷，病斑包圍枝條一圈時，病斑以上枝條枯死[2]。

病菌在病枝、芽內及病斑內越冬，翌年春季核桃展葉期借雨水和昆蟲活動進行傳播。先感染葉片，病芽初展開時嫩葉極易受害，然后由葉片傳播到果實和枝條上?；ㄐ蛞惨资芮秩径a生水漬狀斑。雄花受侵染時，花粉也可以傳病。蚜蟲、蜜蜂、壁虱、螞蟻和舉肢蛾也能傳播病害。氣溫在4～30 ℃時對葉片感病，5～27 ℃對果實能感病、潛育期10～15 d，侵入的細菌主要破壞柔膜組織。發病的輕重與雨水有關。溫度高濕度大的雨季發病高峰期一般在核桃展葉期至開花期 [3]。

陳善義等[4]采用針刺法接種健康核桃枝條和葉片進行致病性測定，并通過對病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析，確定其病原菌分類地位，分析證明該病原細菌為Xanthomonas campestris。

1 材料與方法

1.1 栽培品種（系）

核桃品種（系）遼寧1號、遼寧4號、遼寧5號、遼寧6號、遼寧7號、禮品1號、禮品2號、寒豐、薄殼香、“30301”、“19-12”、“19-21”共計12個，均為兩年生嫁接苗，由遼寧省經濟林研究所核桃研究室提供。其中“30301”、“19-12”、“19-21”為選育的優系；遼寧5號、“30301”、“19-12”以核桃楸為砧木，其他品種（系）是以核桃為砧木。4月定植于溫室大棚中，5月底進行接種試驗。

1.2 菌株準備

采用常規分離法進行病原菌分離和純化[5]。在肉汁胨培養基平板上劃線并于28 ℃下培養。分離純化后所得菌株于斜面中4 ℃保存。挑取單菌落用肉汁胨培養基擴大培養，4 d后接種，菌體懸浮液接種，濃度為108 CFU/mL。

1.3 接種方法

采用5種方法進行接種。（A）噴霧接種葉片。接種前24 h噴霧保濕，以保證葉片氣孔張開，每棵植株隨機選取20片葉片做好標記并用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共60片）；（B）針刺噴霧接種葉片。每棵植株隨機選取10片葉片做好標記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共30片）；（C）針刺涂抹接種葉片。每棵植株隨機選取10片葉片做好標記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復3次（共30片）；（D）針刺噴霧接種新梢。每棵植株上隨機選取5個新梢做好標記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共15枝）；（E）針刺涂抹接種新梢。每棵植株上隨機選取5個新梢做好標記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復3次（共計15枝）。以上每種處理以不接種病原菌為對照。接種后48 h內控制濕度90%，接種后15～17 d調查各處理的發病率。

發病率=■×100%

2 結果與分析

不同核桃品種（系）對核桃細菌性黑斑病菌抗性鑒定結果見表1。由表1可知，12個品種（系）的核桃苗接種后感病情況差異較大。由于A、B兩種方法最接近田間自然發病條件，因此苗期核桃抗性以方法A和B的平均值作為主要參考。其中遼寧7號發病率最低，抗性最好；其次是禮品1號和遼寧4號也表現出較高的抗性。而“30301”發病率高達74.17%，抗性最低，其次是遼寧1號，發病率為55.00%。新梢發病率也有差異，其中接種后遼寧7號和寒豐未發現病斑，而薄殼香新梢發病率較高。

各品種（系）的發病癥狀見圖1，其中遼寧7號癥狀最輕，在葉片上僅表現出輕微的退綠斑，禮品1號的病斑也極小，表現為針尖狀褐色斑點；最嚴重為“30301”，病斑最多且逐漸融合，遼寧1號病斑較大。

3 小結與討論

國內外關于核桃細菌性黑斑病的病原、發病規律等均已有較系統的研究，而關于病害的防治中多為藥劑防治的篩選等，關于品種（系）抗病性的研究較少。鑒于此，本研究就遼寧省核桃苗期主栽品種（系）對細菌性黑斑病的抗性做了初步試驗，并對接種方法做了比較，結果顯示，人工接種條件下不同栽培品種（系）表現明顯的抗性差異，其中遼寧7號、禮品1號和遼寧4號抗性較強； “30301”、遼寧1號和“19-21”抗性較弱。

本試驗存在一定的局限性，接種材料為兩年生的嫁接苗，與成株期相比樹勢、樹體各方面均存在較大的差異；試驗在溫室大棚中進行并且人工接種，與露地自然發病條件相比有較大差異。但試驗結論能對抗病育種起到一定的指導作用。

參考文獻：

[1] 李時珍.本草綱目（下冊）[M].北京：人民衛生出版社，1982.

[2] 張永強，朱惠英，馮 強，等.核桃黑斑病病原研究與防治試驗初

報[J].甘肅林業科技，2004，29（2）：41-42.

[3] 李海菊，郝新科，牛 卿，等.核桃黑斑病發生與防治[J].河北果樹，2004（5）：44-45.

[4] 陳善義，陶萬強，王 合，等.北京地區核桃黑斑病病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析[J].果樹學報，2011， 28（3）：469-473.

[5] 方中達.植病研究方法[M].北京：中國農業出版社，1998.193-194.

摘要：選取遼寧地區12個核桃（Juglans regia）主栽品種（系）的兩年生嫁接苗，采用5種方法分別接種核桃細菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）進行抗病鑒定，并比較各品種（系）苗期抗性差異，同時比較及篩選接種方法。

關鍵詞：核桃（Juglans regia）；抗性；細菌性黑斑病病菌（Xanthomonas campestris）

中圖分類號：S664.1；S436.612.14 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）05-1058-03

胡桃（Juglans regial） 原產中亞，又叫核桃、羌桃、合桃等。是胡桃科（Juglandaceae）胡桃屬（Juglans）多年生落葉喬木。中國的核桃栽培歷史悠久，種質資源豐富。核桃仁中含有豐富的脂肪、蛋白質、碳水化合物及微量元素，具有較高的營養價值。中醫認為核桃性溫、味甘、無毒，有健胃、補血、潤肺、養神等功效[1]。20世紀90年代以來，各國科學家通過營養學和病理學研究認為，核桃對于心血管疾病、Ⅱ型糖尿病、癌癥和神經系統疾病有一定的康復治療和預防效果。隨核桃的種植面積擴大，核桃病害發生越來越嚴重，核桃細菌性黑斑病的發生最為嚴重，尤其是在遼寧地區，造成大量的落葉、落果，引起巨大的經濟損失。藥劑試驗證明用鋅銅波爾多液和細菌靈防治效果較好。

本研究對我國核桃黑斑病的研究現狀進行了分析，選取遼寧地區12個核桃主栽品種（系），采用5種接種方法，系統地測定了不同核桃品種（系）對細菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）的抗性差異，從而為核桃的抗病育種及科學防治提供一定的理論基礎。

核桃在幼果期受害后，果面上出現黑色小斑點，病斑擴大，呈不規則下陷斑，并深入果肉，果實黑腐早落。成熟果實發病后，外果皮變黑，果仁呈現不同程度的干癟和黑斑，出油率和食用價值大大降低。葉片受害后，在葉脈處形成多角形病斑，嚴重時病斑相互融合，病葉皺縮畸形。嫩梢受害后，病斑長條形、褐色稍凹陷，病斑包圍枝條一圈時，病斑以上枝條枯死[2]。

病菌在病枝、芽內及病斑內越冬，翌年春季核桃展葉期借雨水和昆蟲活動進行傳播。先感染葉片，病芽初展開時嫩葉極易受害，然后由葉片傳播到果實和枝條上?；ㄐ蛞惨资芮秩径a生水漬狀斑。雄花受侵染時，花粉也可以傳病。蚜蟲、蜜蜂、壁虱、螞蟻和舉肢蛾也能傳播病害。氣溫在4～30 ℃時對葉片感病，5～27 ℃對果實能感病、潛育期10～15 d，侵入的細菌主要破壞柔膜組織。發病的輕重與雨水有關。溫度高濕度大的雨季發病高峰期一般在核桃展葉期至開花期 [3]。

陳善義等[4]采用針刺法接種健康核桃枝條和葉片進行致病性測定，并通過對病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析，確定其病原菌分類地位，分析證明該病原細菌為Xanthomonas campestris。

1 材料與方法

1.1 栽培品種（系）

核桃品種（系）遼寧1號、遼寧4號、遼寧5號、遼寧6號、遼寧7號、禮品1號、禮品2號、寒豐、薄殼香、“30301”、“19-12”、“19-21”共計12個，均為兩年生嫁接苗，由遼寧省經濟林研究所核桃研究室提供。其中“30301”、“19-12”、“19-21”為選育的優系；遼寧5號、“30301”、“19-12”以核桃楸為砧木，其他品種（系）是以核桃為砧木。4月定植于溫室大棚中，5月底進行接種試驗。

1.2 菌株準備

采用常規分離法進行病原菌分離和純化[5]。在肉汁胨培養基平板上劃線并于28 ℃下培養。分離純化后所得菌株于斜面中4 ℃保存。挑取單菌落用肉汁胨培養基擴大培養，4 d后接種，菌體懸浮液接種，濃度為108 CFU/mL。

1.3 接種方法

采用5種方法進行接種。（A）噴霧接種葉片。接種前24 h噴霧保濕，以保證葉片氣孔張開，每棵植株隨機選取20片葉片做好標記并用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共60片）；（B）針刺噴霧接種葉片。每棵植株隨機選取10片葉片做好標記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共30片）；（C）針刺涂抹接種葉片。每棵植株隨機選取10片葉片做好標記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復3次（共30片）；（D）針刺噴霧接種新梢。每棵植株上隨機選取5個新梢做好標記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復3次（共15枝）；（E）針刺涂抹接種新梢。每棵植株上隨機選取5個新梢做好標記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復3次（共計15枝）。以上每種處理以不接種病原菌為對照。接種后48 h內控制濕度90%，接種后15～17 d調查各處理的發病率。

發病率=■×100%

2 結果與分析

不同核桃品種（系）對核桃細菌性黑斑病菌抗性鑒定結果見表1。由表1可知，12個品種（系）的核桃苗接種后感病情況差異較大。由于A、B兩種方法最接近田間自然發病條件，因此苗期核桃抗性以方法A和B的平均值作為主要參考。其中遼寧7號發病率最低，抗性最好；其次是禮品1號和遼寧4號也表現出較高的抗性。而“30301”發病率高達74.17%，抗性最低，其次是遼寧1號，發病率為55.00%。新梢發病率也有差異，其中接種后遼寧7號和寒豐未發現病斑，而薄殼香新梢發病率較高。

各品種（系）的發病癥狀見圖1，其中遼寧7號癥狀最輕，在葉片上僅表現出輕微的退綠斑，禮品1號的病斑也極小，表現為針尖狀褐色斑點；最嚴重為“30301”，病斑最多且逐漸融合，遼寧1號病斑較大。

3 小結與討論

國內外關于核桃細菌性黑斑病的病原、發病規律等均已有較系統的研究，而關于病害的防治中多為藥劑防治的篩選等，關于品種（系）抗病性的研究較少。鑒于此，本研究就遼寧省核桃苗期主栽品種（系）對細菌性黑斑病的抗性做了初步試驗，并對接種方法做了比較，結果顯示，人工接種條件下不同栽培品種（系）表現明顯的抗性差異，其中遼寧7號、禮品1號和遼寧4號抗性較強； “30301”、遼寧1號和“19-21”抗性較弱。

本試驗存在一定的局限性，接種材料為兩年生的嫁接苗，與成株期相比樹勢、樹體各方面均存在較大的差異；試驗在溫室大棚中進行并且人工接種，與露地自然發病條件相比有較大差異。但試驗結論能對抗病育種起到一定的指導作用。

參考文獻：

[1] 李時珍.本草綱目（下冊）[M].北京：人民衛生出版社，1982.

[2] 張永強，朱惠英，馮 強，等.核桃黑斑病病原研究與防治試驗初

報[J].甘肅林業科技，2004，29（2）：41-42.

[3] 李海菊，郝新科，牛 卿，等.核桃黑斑病發生與防治[J].河北果樹，2004（5）：44-45.

[4] 陳善義，陶萬強，王 合，等.北京地區核桃黑斑病病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析[J].果樹學報，2011， 28（3）：469-473.

[5] 方中達.植病研究方法[M].北京：中國農業出版社，1998.193-194.