腫瘤微環(huán)境對(duì)乳腺癌干細(xì)胞樣微球體培養(yǎng)鑒定的影響*

朱玉芬 任美敬 谷 峰 付 麗

·基礎(chǔ)研究·

腫瘤微環(huán)境對(duì)乳腺癌干細(xì)胞樣微球體培養(yǎng)鑒定的影響*

朱玉芬 任美敬 谷 峰 付 麗

目的：探討腫瘤微環(huán)境在乳腺癌干細(xì)胞（breast cancer stem cells，BCSCs）培養(yǎng)鑒定及分化過(guò)程中的影響及意義。方法：采用無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2及成纖維細(xì)胞上清液對(duì)乳腺癌細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)。觀察乳腺癌細(xì)胞微球體形成狀況，MTT比色法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞的增殖能力，免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)記物及上皮間質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá)，并通過(guò)RT-PCR進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的原代細(xì)胞微球體的直徑大于成纖維細(xì)胞上清液的培養(yǎng)（t=4.996，P= 0.002），且原代細(xì)胞中ALDH1（aldehyde dehydrogenase 1）的表達(dá)率高于后者。成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)速度較無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2快，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004）。RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的原代細(xì)胞中ALDH1表達(dá)上調(diào)，E-cadherin、Vimentin表達(dá)下調(diào)。結(jié)論：在乳腺癌原代細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞中可以采用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)方法富集BCSCs樣微球體，成纖維細(xì)胞上清液能夠促進(jìn)BCSCs樣微球體的增殖與分化。提示乳腺腫瘤微環(huán)境在乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖過(guò)程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。

乳腺癌 乳腺癌干細(xì)胞 腫瘤微環(huán)境 無(wú)血清培養(yǎng) 微球體

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，具有高度的異質(zhì)性和獨(dú)特的組織學(xué)形態(tài)及高度轉(zhuǎn)移的惡性生物學(xué)行為與對(duì)治療的耐受性和抵抗性［1］。乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的根本原因可能是乳腺癌內(nèi)存在著極少數(shù)具有自我更新和多向分化潛能的乳腺癌干細(xì)胞（breast cancer stem cells，BCSCs）。隨著越來(lái)越多研究者對(duì)BCSCs的深入探究，CD44+CD24-/low、ALDH1（aldehyde dehydrogenase 1）已經(jīng)被公認(rèn)為BCSCs可靠的標(biāo)志物［2-3］。腫瘤的轉(zhuǎn)移除了依賴于原發(fā)腫瘤細(xì)胞自身的增殖外，在很大程度上也依賴于腫瘤細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞相互作用形成的局部微環(huán)境。目前腫瘤的研究重點(diǎn)是破譯腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程。腫瘤微環(huán)境、細(xì)胞因子與趨化因子的相互作用、腫瘤的血管生成、免疫逃逸機(jī)制及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）等會(huì)影響腫瘤的轉(zhuǎn)移［4-6］。本研究旨在利用能夠模擬體內(nèi)微環(huán)境的成纖維細(xì)胞上清液及無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞，初步探究乳腺腫瘤微環(huán)境如何影響B(tài)CSCs的增殖與分化。

1 材料與方法

1.1 材料

1例天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院乳腺外科收治的原發(fā)性女性乳腺癌患者，經(jīng)病理確診為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，未經(jīng)化療和放療，在無(wú)菌條件下獲取組織進(jìn)行原代培養(yǎng)（經(jīng)患者及其家屬知情同意）。人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞購(gòu)于中科院上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫(kù)。細(xì)胞培養(yǎng)及研究所用的DMEM/F12購(gòu)自上海立菲生物技術(shù)有限公司，無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2（primary culture medium-2）購(gòu)自日本新田明膠公司，HBSS（Hank's balanced salt solution）液購(gòu)自天津百若克醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司，二甲基亞砜（DMSO）、MTT試劑購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，TECAN酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀購(gòu)自美國(guó)Quant公司，ALDH1（ab23375）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，E-cadherin鼠抗人單克隆抗體（ZM-0092）、Vimentin鼠抗人單克隆抗體（ZM-0260）均購(gòu)自北京中杉金橋生物公司，Trizol試劑與miRNA反轉(zhuǎn)錄引物均購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，Bio-Rad 2000 RT-PCR儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司，QuantiTect SYBR Green PCR Kit購(gòu)自德國(guó)QLAGEN公司。

1.2 方法

1.2.1 乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng) 在清潔條件下獲取標(biāo)本3～5 g，使用含抗生素的生理鹽水沖洗3遍，剪去脂肪組織。剪碎后，使用少量HBSS液涮洗培養(yǎng)皿，移入50 mL離心管，加HBSS液至40 mL，3 000 r/min，離心3 min。棄上清，加HBSS液18 mL、消化酶2 mL，37℃震蕩消化1～3 h。加DMEM/F12終止消化，追加HBSS液至30 mL，吹打，使用308 μm濾網(wǎng)過(guò)濾，3 000 r/ min，離心3 min。棄上清，加含有10%血清的培養(yǎng)液，37℃、5%CO2飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。2～3 d換液1次，當(dāng)細(xì)胞密度近90%時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。將第3～5代內(nèi)細(xì)胞給以無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2及成纖維細(xì)胞上清液進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。

1.2.2 MTT比色法 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞消化、離心，制備單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加入1×105/mL細(xì)胞，另設(shè)空白對(duì)照孔，培養(yǎng)12 h，細(xì)胞貼壁。分別于培養(yǎng)24、48、72、96、120 h后，加入20 μL/孔MTT（5 mg/mL），設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，小心吸去培養(yǎng)液，再加入200 μL DMSO，振蕩10 min。TECAN酶聯(lián)檢測(cè)儀以570 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，630 nm為參比波長(zhǎng)，測(cè)定各孔光吸收值。

1.2.3 免疫細(xì)胞化學(xué) 將無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2及成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的原代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞爬片，在4孔板的蓋玻片上接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，待細(xì)胞均勻覆蓋后棄培養(yǎng)液。PBS沖洗，4%多聚甲醛室溫固定30 min，PBS沖洗，自然晾干。0.3%過(guò)氧化酶阻斷溶液封閉30 min，正常血清封閉30 min，吸棄。滴加一抗，4℃過(guò)夜，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，采用三步免疫組織化學(xué)方法分別在細(xì)胞貼壁第1、3及5天時(shí)檢測(cè)ALDH1、E-cadherin、Vimentin染色情況。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，顯微鏡觀察。

1.2.4 RT-PCR 利用Trizol法提取RNA并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系為20 μL。RT-PCR擴(kuò)增miRNA，測(cè)定ALDH1、E-cadherin、Oct-4、Vimentin等基因表達(dá)，以GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性15 min；95℃變性15 s、56℃退火30 s、68℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)；每個(gè)反應(yīng)設(shè)置2個(gè)復(fù)孔。miRNA表達(dá)水平的計(jì)算公式：ΔCt=目的基因Ct-內(nèi)參基因Ct。引物序列見表1。

表1 RT-PCR相關(guān)引物序列表Table 1 The sequence of relative primers in real-time reverse transcription polymerase chain reaction

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 微球體形成狀況

在倒置相差顯微鏡下觀察2種培養(yǎng)液培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)狀況：無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的原代細(xì)胞3～5 d出現(xiàn)微球體形成，且隨著天數(shù)的增加，微球體的直徑越來(lái)越大，數(shù)目逐漸減少；而成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)者，細(xì)胞逐漸伸展為長(zhǎng)梭形，胞質(zhì)豐富。無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的原代細(xì)胞微球體直徑大于成纖維細(xì)胞上清液的培養(yǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1）。2種培養(yǎng)液培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況同原代細(xì)胞具有相似的結(jié)果。

2.2 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

MTT比色法測(cè)定無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2及成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的原代細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)兩者均處于持續(xù)生長(zhǎng)的狀態(tài)，但成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)速度快于無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果

免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的原代細(xì)胞中ALDH1表達(dá)率第1天較高于第3天及第5天，且第3天原代細(xì)胞中ALDH1表達(dá)率于無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)（46.40%±5.580%）高于成纖維細(xì)胞上清液的培養(yǎng)（19.03%±1.363%）。推測(cè)成纖維細(xì)胞上清液中成纖維細(xì)胞分泌的一些生長(zhǎng)因子或趨化因子促進(jìn)了BCSCs樣微球體的增殖與分化（圖2、3）。

2.4 RT-PCR檢測(cè)

與無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)相比，成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的原代細(xì)胞中ALDH1表達(dá)下調(diào)，上皮間質(zhì)標(biāo)記物E-cadherin、Vimentin表達(dá)上調(diào)；同樣成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞中，乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)記物ALDH1、Oct-4表達(dá)下調(diào)，E-cadherin、Vimentin表達(dá)上調(diào)（圖4）。

圖1 無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2及成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的原代細(xì)胞微球體的形成狀況（倒置相差顯微鏡×200）Figure 1 Status of microspheres formed in two different culture mediums（IPCM×200）

圖2 無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的原代細(xì)胞中ALDH1表達(dá)（SP×200）Figure 2 Expression of ALDH1 in primary breast cancer cells（SP×200）

圖3 無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2及成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的原代細(xì)胞中ALDH1表達(dá)（SP×200）Figure 3 Expression of ALDH1 in primary breast cancer cells in PCM-2 and the supernatant of cultured fibroblasts（SP×200）

圖4 無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2及成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞第3天時(shí)干細(xì)胞及上皮間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)Figure 4 Expression of stem cells and epithelial-mesenchymal markers in MCF-7 and primary breast cancer cells cultured in PCM-2 and in the supernatant of cultured fibroblasts for 3 d

3 討論

乳腺癌是一種具有高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，臨床治療一定程度上能夠抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，但仍發(fā)生侵襲及轉(zhuǎn)移，這可能與乳腺癌內(nèi)存在著極少數(shù)具有干細(xì)胞特性的BCSCs有關(guān)。Al-Hajj等［2］首先發(fā)現(xiàn)具有干細(xì)胞特性的CD44+CD24-/low細(xì)胞，證實(shí)了BCSCs的存在。Ginestier等［3］提出相對(duì)于CD44+CD24-/low，較少量ALDH1陽(yáng)性細(xì)胞即可在免疫缺陷小鼠體內(nèi)成瘤。Sox-2、Oct-4是維持胚胎干細(xì)胞多能性和自我更新能力的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，這些表面標(biāo)記物的表達(dá)同實(shí)體瘤的不良預(yù)后呈正相關(guān)［7-8］。Ricardo等［9］研究表明，標(biāo)記物ALDH1在HER-2過(guò)表達(dá)型及Basal-like型乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)率明顯高于Luminal型。該研究中無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的原代HER-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌細(xì)胞中ALDH1表達(dá)率在第1天較高，第3天后ALDH1陽(yáng)性細(xì)胞占46.4%±5.580%，明顯高于對(duì)照組的19.03%±1.363%。推測(cè)原代培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞中可能存在著少量的干細(xì)胞，且成纖維細(xì)胞上清液可能在BCSCs的增殖分化中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。

懸浮培養(yǎng)的一些乳腺癌細(xì)胞形成漂浮的克隆小球，即乳腺微球體（mammospheres）。這些微球體在三維立體培養(yǎng)時(shí)表現(xiàn)出自我更新和多向分化的能力，推測(cè)乳腺微球體中可能含有干細(xì)胞成分。本研究采用2種不同的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，其中成纖維細(xì)胞上清液中的成纖維細(xì)胞可以通過(guò)分泌一些膠原蛋白、纖連蛋白和多種細(xì)胞因子促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）生成，通過(guò)產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）調(diào)節(jié)ECM更新，進(jìn)而通過(guò)各種信號(hào)通路影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)［10］。本研究發(fā)現(xiàn)，利用無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2培養(yǎng)的原代細(xì)胞微球體的直徑大于成纖維細(xì)胞上清液的培養(yǎng)（P＜0.05）；RT-PCR檢測(cè)成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞，ALDH1、Oct-4表達(dá)下調(diào)，E-cadherin、Vimentin表達(dá)上調(diào)；成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的原代細(xì)胞中ALDH1表達(dá)下調(diào)，E-cadherin、Vimentin表達(dá)上調(diào)。提示本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的微球體可能具有干細(xì)胞的特性，而成纖維細(xì)胞上清液中的一些生長(zhǎng)因子或趨化因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、血小板源生長(zhǎng)因子（platelet derived growth factor，PDGF）、基質(zhì)衍生因子-1（stroma derived factor-1，SDF-1）、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF），以直接或間接的方式與乳腺癌細(xì)胞本身及炎細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等相互作用，促進(jìn)了BCSCs的分化。本研究不足之處為盡管無(wú)血清懸浮培養(yǎng)能夠純化BCSCs，但所形成的微球體可能并非全是真正意義上的BCSCs。隨著研究的不斷深入，有望發(fā)現(xiàn)更為有效的篩選并純化BCSCs的方法。

腫瘤微環(huán)境是細(xì)胞外基質(zhì)、血管內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞及炎癥細(xì)胞等在腫瘤發(fā)展過(guò)程中形成的局部穩(wěn)態(tài)環(huán)境，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。Sneddon等［11］研究表明，如骨形態(tài)蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)拮抗劑Gremlin1蛋白，能夠阻止基底細(xì)胞癌的分化。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（tumor-associated fibroblasts，TAFs）高表達(dá)Gremlin1蛋白，在一定程度上解釋了TAFs分泌的Gremlin1蛋白或許能夠促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞（tumor stem cells，CSCs）的自我更新和分化能力。本研究中MTT比色法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，使用成纖維細(xì)胞上清液培養(yǎng)的原代細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)速度均快于無(wú)血清培養(yǎng)液PCM-2的培養(yǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），再次證實(shí)了成纖維細(xì)胞上清液中的成纖維細(xì)胞可能通過(guò)其分泌的大量相關(guān)生長(zhǎng)因子影響乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)活性。R?mer等［12］研究發(fā)現(xiàn)原代乳腺癌細(xì)胞與正常乳腺組織中的成纖維細(xì)胞在三維培養(yǎng)后出現(xiàn)惡性表型的逆轉(zhuǎn)，而具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。Polyak等［13］提出上皮細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境之間相互作用，能夠調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞的分化、增殖、浸潤(rùn)及遷移。Korkaya等［14］研究證實(shí)TAFs能夠通過(guò)分泌白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-8（interleukin-8，IL-8）、趨化因子CXCL-7等，激活BCSCs的STAT3/NF-κB信號(hào)通路，引發(fā)BCSCs的自我更新和多向分化的潛能。Orimo等［15］將TAFs與乳腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)后植入免疫缺陷小鼠體內(nèi)，腫瘤生長(zhǎng)速度明顯加快。推測(cè)TAFs分泌的SDF-1、TGF-β、bFGF等因子誘導(dǎo)刺激上皮細(xì)胞，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖及分化。

綜上所述，本研究通過(guò)無(wú)血清懸浮培養(yǎng)富集了BCSCs樣微球體。BCSCs具有增殖和多向分化的能力，乳腺癌細(xì)胞本身產(chǎn)生的細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子能夠增強(qiáng)BCSCs樣微球體的增殖能力，并且成纖維細(xì)胞上清液中分泌的一些生長(zhǎng)因子及趨化因子在一定程度上也促進(jìn)了BCSCs樣微球體的增殖與分化。腫瘤微環(huán)境在調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、介導(dǎo)致瘤效應(yīng)的過(guò)程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。腫瘤微環(huán)境可以影響B(tài)CSCs樣微球體的生存狀態(tài)，但BCSCs是否能夠在微環(huán)境中促進(jìn)腫瘤致瘤性，尚待進(jìn)一步研究。

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（2014-06-24收稿）

（2014-09-25修回）

Influence of tumor microenvironment on culture and identification of breast cancer stem cell-like microspheres

Yufen ZHU,Meijing REN,Feng Gu,Li Fu

Li Fu;Email:fulijyb@hotmail.com
Department of Breast Cancer Pathology and Research Laboratory,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical Research Center of Cancer,Ministry of Education Key Laboratory of Breast Cancer Prevention and Therapy,Tianjin Medical University,Tianjin Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin 300060,China
This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30930038)

Objective:To investigate the influence and significance of tumor microenvironment in breast cancer stem-cell culture and identification.Methods:Cells isolated from primary breast cancer tissues were cultured in vitro in a serum-free medium PCM-2 and in the supernatant of cultured fibroblasts.The MCF-7 breast cancer cell line was used as the control group.The status of the microspheres was observed,and the proliferative capacity of the cells was detected by methyl thiazolyl tetrazolium assay.The expression of stem cell and epithelial-mesenchymal markers were detected by real-time reverse transcription polymerase chain reaction.Results:The diameter of microspheres in PCM-2 gradually increased with prolonged incubation time(t=4.996,P=0.002).The cells in the supernatant of cultured fibroblasts increased daily and mostly exhibited a spindle cell growth.The growth rate of primary breast cancer cells was faster in the supernatant of cultured fibroblasts than in PCM-2(P=0.004).Compared with the case of cells in the supernatant of cultured fibroblasts,aldehyde dehydrogenase 1 was upregulated in the primary breast cancer cells cultured in serum-free medium PCM-2, whereas E-cadherin and Vimentin were downregulated.Conclusion:Serum-free culture can be one of the best methods for enriching breast cancer stem cell-like mammospheres.The tumor micro-environment serves a vital function in the growth and development of tumor cells and in the evolution of breast cancer.

breast cancer,breast cancer stem cells,tumor microenvironment,serum-free culture,mammospheres

10.3969/j.issn.1000-8179.20141062

天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院乳腺病理研究室，國(guó)家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津市腫瘤防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，乳腺癌防治教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（天津市300060）

*本文課題受國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目（編號(hào)：30930038）資助

付麗 fulijyb@hotmail.com

朱玉芬 專業(yè)方向?yàn)槟[瘤微環(huán)境與乳腺癌生長(zhǎng)侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制等。

E-mail：zhuyufenrain@163.com