食管癌疫苗臨床應用分析*

劉東紅 朱麗華 張慶波 曹秀華 石恩富 丁賀田

食管癌疫苗臨床應用分析*

劉東紅①②朱麗華①張慶波①曹秀華②石恩富②丁賀田③

目的：對食管癌疫苗在臨床應用效果進行分析，以期為臨床應用提供參考。方法：從食管癌術后腫瘤組織標本中提取其可溶性抗原成分和超抗原SEC構建成腫瘤疫苗，對食管癌術后328例患者進行臨床應用（觀察組），并以常規治療326例患者作為對照組，觀察并分析臨床應用效果和5年隨訪結果。結果：觀察組5年生存率為49.71%（173/328），對照組5年生存率為20.55%（67/326），經統計學處理有顯著性差異（P＜0.05）；女性生存率為51.22%（84/164），男性生存率為45.12%（74/164），女性生存率顯著高于男性（P＜0.05）。觀察組中低分化患者的生存率（61.90%）顯著高于高分化患者的生存率（41.61%），差異具有統計學意義（P＜0.05）；而對照組低分化患者生存率（10.75%）顯著低于高分化患者的生存率（31.34%），差異具有統計學意義（P＜0.05）。結論：該疫苗能有效防止食管癌術后患者的復發和腫瘤轉移，提高生存率，特別是對女性患者和惡性程度高的患者效果更佳。

腫瘤疫苗 食管癌 腫瘤可溶性抗原 超抗原SEC 生物治療

食管癌是常見的上消化道腫瘤，嚴重威脅著人類的生命健康，全世界每年約有30萬人死于食管癌，我國食管癌病死率為15.02/10萬［1］，其死亡率僅次于胃癌、肝癌、肺癌，位居我國居惡性腫瘤第四位［2］。食管癌切除術后總體5年生存率仍然停留在20%～30%的水平［3］，提高食管癌術后生存率是目前臨床亟待解決的問題。為此，本研究從食管癌切除術后的臨床組織標本中提取可溶性抗原成分，與金葡菌超抗原一起構建成為腫瘤疫苗，進行臨床應用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

自2007年3月至2009年3月選擇河北聯合大學附屬醫院、唐山市人民醫院、唐山市工人醫院、秦皇島市人民醫院、遵化市人民醫院等單位的食管癌術后患者654例。入組標準：1）經病理檢查證實均為鱗癌，無高血壓、糖尿病、心腦血管疾病及其他合并癥等；2）術前1周和疫苗應用后1周分別做OT試驗，由弱陽性轉為陽性或由陽性轉為強陽性，表明細胞免疫功能增強，治療有效；3）病理分期：T3期或以下，M0、N期無要求。愿意接受食管癌疫苗治療的設為觀察組，同期符合上述要求未接受疫苗治療者為對照組。觀察組328例，男性164例（高分化68例、中分化52例、低分化44例），年齡42～68歲，女性164例（高分化69例、中分化55例、低分化40例），年齡44～69歲；對照組326例，男性165例（高分化68例、中分化54例、低分化44例），年齡41～70歲，女性161例（高分化66例、中分化51例、低分化49例），年齡40～67歲，2組患者性別、年齡和腫瘤惡性程度比較無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，患者及家屬知情同意并簽署協議書。

1.2 方法

1.2.1 食管癌疫苗構建 取手術切除的食管癌組織標本，提取其可溶性抗原成分［4］。選取最佳濃度的TSA（50 μg/mL）和SEC（0.1 ng/mL）混合成為腫瘤疫苗。

1.2.2 接種方法 對照組術后進行常規治療和處理。觀察組在常規治療的基礎上加用腫瘤疫苗皮內注射：于雙前臂掌側，每側注射0.1 mL，用藥前后1 d和用藥當天，每天靜脈滴注IL-2 20萬單位。首次于術后第7天應用，間隔7天再進行第2次接種，共接種2次。

1.2.3 接種效果判定 于第2次接種后48 h觀察局部接種反應。陽性：局部紅腫或有硬結；陰性：局部無紅腫或硬結。結果陽性為接種有效。

1.2.4 觀測內容 觀察組患者注射疫苗后，觀測接種部位的局部反應和全身反應，全部接種者無發熱及過敏現象發生，并對接種者進行定期5年生存率隨訪。

1.2.5 療效判斷 對觀察組、對照組患者進行5年生存率隨訪，生存時間延長為治療有效。

1.3 統計學分析

應用SPSS 16.0軟件對數據進行統計學處理。計量資料以±s表示，多組間數據兩兩比較采用q檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 總生存率和性別與生存率的相關性分析

觀察組總生存率和男女生存率均高于對照組（P＜0.05，表1）。

2.2 腫瘤分化程度與生存率的相關性分析

觀察組低分化癌患者生存率顯著高于高分化癌患者（P＜0.05，表2），而對照組低分化癌患者生存率顯著低于高分化癌患者（P＜0.05，表2）。

2.3 低分化癌和高分化癌抗原對PBMC增值活性的影響

各觀察組對細胞增殖活性的影響均高于對照組（P＜0.05，表3）。

表1 觀察組和對照組5年生存情況比較 例（%）Table 1 Comparison of five-year survival rate between treatment and control groups[case(%)]

表2 腫瘤分化程度與生存率的卡方分析 例（%）Table 2 Analysis between the degree of tumor differentiation and the survival rate[case(%)]

3 討論

本文5五年隨訪結果顯示的兩個突出的問題：一是女性患者生存率顯著高于男性，可能是由于女性患者機體的免疫力高于男性；二是惡性程度低的患者生存率高于惡性程度高者，可能是由于惡性程度低的腫瘤組織抗原其免疫原性強，能誘導產生更強的免疫反應。提取腫瘤組織細胞可溶性抗原，可避免細胞抗原的各種弊端，保存抗原的特異性，加入葡萄球菌腸毒素（超抗原）可誘導T細胞增殖［5］，提高其免疫原性。金葡菌腸毒素（SE）是一種具有高度生物活性的蛋白質，是目前研究較多的細菌性超抗原，對腫瘤細胞產生直接和間接的殺傷和抑制作用［6］。由腫瘤可溶性抗原和金葡菌超抗原構建的腫瘤疫苗，可誘導人外周血單個核細胞產生細胞毒性T細胞，這種效應細胞對抗原來源的腫瘤細胞具有選擇性殺傷活性，其機理為效應細胞誘導靶細胞凋亡［7-9］。

表3 不同分化程度的腫瘤抗原對PBMC增殖活性影響的比較 （OD值±s）Table 3 Peripheral blood mononuclear cell proliferation stimulated by the tumor antigen of different groups（OD value，±s）

表3 不同分化程度的腫瘤抗原對PBMC增殖活性影響的比較 （OD值±s）Table 3 Peripheral blood mononuclear cell proliferation stimulated by the tumor antigen of different groups（OD value，±s）

Note：Control group(A),high-differentiation group(B),moderate-differentiation group(C),and low-differentiation group(D);PB-A=0.000,PC-A= 0.000,PD-A=0.000(P＜0.05,statistically significant)

Group High differentiation Moderate differentiation Low differentiation Control group P The third day 0.279±0.007* 0.369±0.008* 0.585±0.011* 0.166±0.007 0 The sixth day 0.330±0.012* 0.487±0.009* 0.796±0.008* 0.279±0.009

由于腫瘤細胞在長期的生長演變過程中，形成了逃避機體免疫系統攻擊殺傷的機制，腫瘤細胞可通過多種方式來逃避免疫監視，目前已經認識到的腫瘤免疫逃逸的相關機制可能包括以下幾個方面［10-12］：1）腫瘤抗原表達缺陷或抗原調變，異質性大；2）腫瘤細胞MHC-Ⅱ類分子表達不同程度的下降、缺如，且分化能力差的腫瘤細胞HLA表達更弱，大多數實體腫瘤不表達HLA-Ⅱ分子抗原；3）腫瘤細胞產生的細胞因子的負性調節作用；4）Fas/FasL在腫瘤免疫逃逸中的作用，表達FasL的腫瘤細胞能誘導表達Fas的淋巴細胞發生凋亡，又由于瘤細胞本身表達的下調，使淋巴細胞促腫瘤細胞凋亡的作用處于弱勢；5）黏附分子/共刺激分子缺陷，使得T細胞在活化過程中缺乏第二信號而不能被有效的激活，不能激發起有效的抗腫瘤免疫應答；6）抑制性免疫細胞亞群的作用。這些方面作用導致了機體無法對腫瘤細胞進行有效的識別和殺傷。大多數腫瘤抗原的免疫原性很弱，且宿主對腫瘤抗原的免疫應答導致腫瘤細胞表面抗原減少或丟失，從而使腫瘤細胞不被免疫系統識別，不能誘發有效的抗腫瘤免疫應答作用。基于這個認識，需要運用增強腫瘤抗原的免疫原性的基本方法，誘發機體的抗腫瘤免疫應答，以達到縮小和消除腫瘤的目的。

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（2014-07-14收稿）

（2014-10-19修回）

（本文編輯：周曉穎）

Analysis of the effect of clinical application of vaccine for esophageal cancer

Donghong LIU1,2,Lihua ZHU1,Qingbo ZHANG1,Xiuhua CAO2,Enfu SHI2,Hetian DING3

Lihua ZHU;E-mail:zhulihua1972@163.com
1Department of Pathogenic Organism and Immunology,Hebei United University,Tangshan 063000,China;2Department of Surgical Oncology,Zunhua No.2 Hospital,Zunhua 064200,China;3Department of Surgical Oncology,Zunhua National Hospital,Zunhua 064206,China
This work was supported by The Science and Technology Support Program of Hebei Province(No.09276418D-18 and 132777138)

Objective:To analyze the effects of the clinical applications of vaccine for esophageal cancer to provide treatment basis.Methods:Tumor-soluble antigen was extracted from clinical samples of esophageal cancer tissue.Vaccine for esophageal cancer was prepared using antigen and superantigen staphylococcal enterotoxin C(SEC).One group of patients with esophageal cancer was treated with vaccine after surgery(treatment group).Another group of patients with esophageal cancer was treated using routine methods(control group).After five years,the patients were followed up to analyze survival.Results:After five years of follow up,the survival rates of treatment and control groups were 173/328(49.71%)and 67/326(20.55%),respectively.Survival rates significantly differed between the two groups(P＜0.05).Furthermore,the survival rates of the female patients were higher than those of the male patients(P＜0.05).In the treatment group,the survival rates of patients with low-differentiation cancer were higher than those of patients with high-differentiation cancer(P＜0.05).In the control group,the survival rates of patients with low-differentiation cancer were lower than those of patients with high-differentiation cancer(P＜0.05).Conclusion:Tumor vaccine prepared with esophageal cancer antigen and superantigen SEC could increase the survival rate of patients with esophageal cancer,particularly female patients and those with low-differentiation cancer.

tumor vaccine,esophageal cancer,tumor-soluble antigen,superantigen SEC,tumor biotherapy

10.3969/j.issn.1000-8179.20141175

①河北聯合大學基礎醫學院病原生物與免疫學學科（河北省唐山市063000）；②遵化市第二醫院外科；③遵化市民族醫院腫瘤外科

*本文課題受河北省科學技術廳項目（編號：132777138）和唐山市科技計劃指令項目（編號：13130263z）資助

朱麗華 zhulihua1972@163.com

劉東紅 專業方向為腫瘤免疫及生物治療。

E-mail：zqb1955@163.com