注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠血清轉氨酶的檢測分析

鄧玉紅袁 靜徐六妹

（1 深圳市第三人民醫院預防保健科，廣東 深圳 518112；2 深圳市第三人民醫院感染科，廣東 深圳 518112）

注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠血清轉氨酶的檢測分析

鄧玉紅1袁 靜2徐六妹2

（1 深圳市第三人民醫院預防保健科，廣東 深圳 518112；2 深圳市第三人民醫院感染科，廣東 深圳 518112）

目的研究注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠血清中轉氨酶水平的變化。方法選取遺傳背景相同的HBsAg陰性正常鼠30只作為正常對照組，HBV轉基因鼠30只為實驗1組，注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠30只為實驗2組。采集各組小鼠在8周齡時的血液，用全自動的生化分析儀檢測小鼠血清丙氨酸轉氨酶和天冬氨酸轉氨酶水平。結果實驗1組（HBV轉基因小鼠未注射HBsAg-SCT質粒組）和實驗2組（HBV轉基因小鼠注射HBsAg-SCT質粒組）小鼠的血清丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶與正常對照組比較，均顯著升高（P＜0.01）；實驗1組小鼠的血清丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶與實驗2組比較，無明顯差異（P＞0.05）。結論注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠血清轉氨酶水平明顯高于正常小鼠；但與未注射HBsAg-SCT質粒HBV轉基因小鼠無明顯差異。

HBV轉基因小鼠；HBsAg-SCT質粒；丙氨酸轉氨酶；天冬氨酸轉氨酶

主要組織相容性復合體基因（major histocompatibility complex，MHC）編碼許多與T細胞的抗原識別密切相關的組織相容抗原。MHC是人類的第6對染色體的一組連鎖的基因群，包括MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ，人的MHC稱為人白細胞抗原（HLA）。抗原必須暴露在細胞膜上并與HLA的特異性的糖蛋白結合，T細胞才能將其識別并清除。對疾病易感性的個體差異在很大程度上是由遺傳因素所決定，以MHC表達的免疫遺傳學基礎是限定HBV感染發展的重要因素[1，2]。本研究通過檢測注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠的血清轉氨酶水平，為該HBV轉基因動物的生理、病理、藥理和毒理的實驗研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

①含有H-2IJd的真核表達載體（pIRES-Ld）由Lybarger Lonnie實驗室保存，編碼HBV抗原表位肽S28-39（IPQSLDSWWTSL）寡核苷酸由亞利桑那大學合成。按文獻報道[3]的方法，人工合成兩端分別帶一小段DNA接頭的HBV表面抗原CTL表位肽（S29-38）的寡核苷酸片段，與兩端帶接頭的β2m寡核苷酸片段混合變性后自然冷卻到室溫使其發生退火，其后將混合物與pIRES-Ld進行連接，形成HbsAg-S28-39·β2m·Ld單鏈復合物（HBsAg-SCT），并命名為HbsAg-SCT[4]。②選取遺傳背景相同的HBsAg陰性正常鼠30只（正常對照組），HBV轉基因鼠30只（實驗1組）和注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠30只（實驗2組）。各為6～10周齡，雌雄各半，本部飼育，生產許可證號為SCXK 2005-010。

1.2 試劑和儀器

丙氨酸轉氨酶和天冬氨酸轉氨酶指標的檢測儀器是奧林巴斯AU400，試劑由申能公司提供。

1.3 方法

各組小鼠均眼眶內眥采血，采血時周齡均為8周，采血后室溫放置2 h后3000 r/min離心5 min提取血清。用全自動奧林巴斯AU400生化儀檢測血清丙氨酸轉氨酶和天冬氨酸轉氨酶水平。

1.4 統計學處理

2 結 果

實驗1組（HBV轉基因小鼠未注射HBsAg-SCT質粒組）和實驗2組（HBV轉基因小鼠注射HBsAg-SCT質粒組）小鼠的血清丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶與正常對照組比較，顯著升高（P＜0.01）；實驗1組小鼠的血清丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶與實驗2組比較，無明顯差異（P＞0.05）。見表1和表2。

表1 各組小鼠的血清丙氨酸轉氨酶的檢測結果

表2 各組小鼠的血清天冬氨酸轉氨酶的檢測結果

實驗1組與對照組比較有明顯差異（t=18.5455；P＜0.01）；實驗1組與對照組比較有明顯差異（t=20.6692；P＜0.01）；而實驗1組與實驗2比較無明顯差異（t=1.2624；P值＞0.05）。

3 討 論

HBV轉基因小鼠是國內進行乙肝發病機制、藥物研發和疫苗研發的首選動物模型，由小鼠的生殖特性可知[5]，雌性小鼠的性成熟期是5～7周；雄性小鼠的性成熟期是6～8周，本研究的采血時小鼠的周齡均為10周，此時期小鼠均已以育完全，其性激素水平和血液生理生化指標也基本趨于穩定，但動物的血液生理生化指標受動物的品系、年齡、性別、營養代謝等情況，及測定方法與儀器設備和樣品量大小的影響，其正常范圍的差異很大[6]。

本研究是將自構建的pIRES-HBsAg質粒分次注射到被HBV感染的轉基因小鼠中，研究HBsAg-SCT質粒質粒對轉基因小鼠感染HBV后免疫應答，本研究結果顯示：HBV轉基因小鼠和注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠的血清丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶均顯著高于正常對照組（P＜0.01）；與國外文獻報道一致[7]；而實驗1組小鼠的血清丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶與實驗2組比較，無明顯差異（P＞0.05），但本實驗指標較少，對注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠的血液生理生化全面分析有一定的影響，今后應增加其正常的生理生化指標監測，以便全面了解注射HBsAg-SCT質粒的HBV轉基因小鼠模型，為該HBV轉基因動物的生理、病理、藥理和毒理的實驗研究提供參考。

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[3] Huang CH,Peng S.Cancer immunotherapy using a DNA vaccine encoding a single-chain trimer of MHC class I linked to an HPV-16 E6 immunodominant CTL epitope[J].Gene Ther, 2005,12(15):1180-1186.

[4] 周伯平,張紅梅,陳心春,等.HBV細胞毒性T細胞抗原表位單鏈三聚體在真核細胞中的表達及其腺病毒載體的構建[J].中西醫結合肝病雜志,2007,17(1):19-22.

[5] 何誠.實驗動物學[M].北京:中國農業大學出版社,2006:65.

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R512.6+<2 文獻標識碼：B class="emphasis_bold">2 文獻標識碼：B 文章編號：1671-8194（2014）27-0066-022 文獻標識碼：B

1671-8194（2014）27-0066-02

B 文章編號：1671-8194（2014）27-0066-02

2005年廣東省深圳市科技社會公益科研項目（JH200507120847A）