牛皮杜鵑葉水煎液鎮痛作用的實驗研究

何曉燕，楊麗娟，關穎麗，丁錄軍，宮汝淳，趙玉敏，顧地周

(通化師范學院 生命科學學院，吉林 通化134002)

牛皮杜鵑(RhododendronChrysanthum)，又名牛皮茶，杜鵑花科，杜鵑花屬，常綠小灌木，分布于長白山海拔1700～2300m的高山岳樺林帶至高山凍原帶，抗寒耐風，具有很好地保持水土的生態功能，對維持生態平衡起重要作用[1-2]．其葉含黃酮貳，蘆丁，單寧酸，痕跡量的生物堿等，可入藥[3]．目前，國內外對牛皮杜鵑的研究主要集中在繁殖培育、解剖學及植物分類學研究[4]，而對牛皮杜鵑的鎮痛作用實驗研究尚未見報道．因此，本文針對牛皮杜鵑葉水煎液對小鼠痛閾和扭體抑制進行了實驗研究，以期為新藥研發和臨床應用提供一定的實驗依據，可更好地開發利用牛皮杜鵑．

1 實驗材料

1.1 實驗動物

健康昆明種小鼠，雌性，100只，體重18～22g，長春高新醫學實驗動物中心提供，合格證號:scxk-(吉)2008-0001．

1.2 實驗儀器

電熱鼓風烘干箱:型號DGF30，南京實驗儀器廠;智能恒溫電熱套:型號ZNHW-II，鄭州長城科工貿有限公司;高速萬能粉碎機:型號FW100，北京中興偉業儀器有限公司；精密電子天平：型號JA2003，上海恒平科學儀器有限公司．

1.3 實驗藥品

冰醋酸，批號20120803，天津市科密歐化學試劑有限公司; 苦味酸，批號20070127，天津市科密歐化學試劑有限公司; 阿司匹林片，批號120707，哈爾濱格拉雷藥業有限公司;氯化鈉，批號20120716，天津博迪化工股份有限公司．

2 實驗方法

2.1 供試品溶液的制備

(1)牛皮杜鵑葉水煎液的制備[5]．將采自長白山地區并經鑒定的新鮮牛皮杜鵑葉陰干，放入電熱鼓風烘干箱中60℃烘干，粉碎機將其粉碎．精密稱取牛皮杜鵑葉粉末100g，置于1000mL燒杯中，按料液比1:10加水浸泡3h，水煮法提取兩次，每次1h，16層紗布過濾，濾液加熱濃縮至2g/mL，冷藏備用．

(2)阿司匹林片水溶液[6]及0.6%醋酸溶液的制備．精密稱取阿司匹林片115mg置于100mL容量瓶中，加水定容，搖勻，配成1.15mg/mL的阿司匹林片水溶液，備用．用移液管量取0.12mL冰醋酸置于容量瓶中，加水定容至20mL，得0.6%醋酸溶液，現用現配即可．

2.2 熱板法實驗[7-9]．

(1)動物篩選．電熱套溫度為(55±0.5)℃，取雌性小鼠放入電熱套內，30 s內有舔后足反應者為合格小鼠，對逃避跳躍者和 30 s內不出現舔后足者，棄之不用，選出50只健康小鼠．

(2)實驗分組及給藥劑量．將選出的50只健康小鼠按蛇形分組法[6]分為5組，每組10只，即生理鹽水組、阿司匹林組、牛皮杜鵑葉水煎液低劑量組、中劑量組和高劑量組．以半數致死量濃度的1/10作為最高劑量組給藥質量濃度，各劑量組濃度梯度相差2倍，即高、中、低劑量組給藥質量濃度分別為1.2g/kg，0.6g/kg，0.3g/kg．各組小鼠均以0.2mL/10g灌胃給藥，生理鹽水組和阿司匹林組給予同體積的生理鹽水和阿司匹林片水溶液，每天1次，連續給藥7d．

(3)測痛閾值．給藥前先測定各鼠的正常痛反應，記錄小鼠足底接觸熱板至出現舔后足的時間(s)，即熱板反應潛伏期作為痛閾指標．末次給藥1h后，再測定各鼠的正常痛反應，并計算小鼠給藥前后痛閾提高百分率．痛閾提高百分率=(給藥后平均痛閾值-給藥前平均痛閾值)/給藥前平均痛閾值×100%.

2.3 扭體法實驗[7-9]

(1)實驗分組．隨機選取50只健康小鼠，分組同“2.2(2)”．

(2)計算抑制率．給藥劑量同“2.2(2)”，末次給藥1h后，各組分別腹腔注射0.6%醋酸溶液，0.2mL/只，觀察并記錄注射醋酸后15min內出現扭體反應(腹部收縮內凹，伸展后肢，臀部抬高，蠕行)的時間及次數，計算抑制率．抑制率=(生理鹽水組平均扭體次數-給藥組平均扭體次數)/生理鹽水組平均扭體次數×100%.

2.4 數據統計分析

3 實驗結果與分析

3.1 對小鼠一般特征的影響

與給藥前相比，給藥后的小鼠精神狀態良好，行為活躍，飲食量、飲水量均無明顯變化，小鼠平均體重呈增長趨勢．

3.2 對小鼠熱板法實驗的影響

實驗結果表明，與給藥前比較，牛皮杜鵑葉水煎液三個劑量組均可延長熱板反應潛伏期并提高痛閾百分率，其中高劑量組和中劑量組小鼠熱板反應潛伏期和痛閾提高百分率在給藥1h后發生極顯著性變化(P<0.01)，較阿司匹林組強；低劑量組小鼠熱板反應潛伏期和痛閾提高百分率在給藥1h后發生顯著性變化(P<0.05)，生理鹽水組無顯著性變化；與生理鹽水組比較，各劑量組均可延長熱板反應潛伏期并提高痛閾百分率且各組小鼠熱板反應潛伏期和痛閾提高百分率在給藥1h后發生極顯著性變化(P<0.01)．(見表1)

表1 牛皮杜鵑葉水煎液對小鼠熱板反應的影響

注：給藥后與給藥前比較，*P<0.05，**P<0.01．與生理鹽水組比較，#P<0.01．

3.3 對小鼠扭體法實驗的影響

實驗結果表明，在小鼠扭體實驗中，與生理鹽水組比較，牛皮杜鵑葉水煎液低、中劑量組對小鼠扭體反應潛伏期無明顯影響，但兩個劑量組均可減少小鼠扭體次數并提高扭體抑制率；高劑量組扭體次數和扭體抑制率發生顯著性變化(P<0.05)，但作用不如阿司匹林組.(見表2)

表2 牛皮杜鵑葉水煎液對小鼠扭體反應的影響

注：與生理鹽水組比較，*P<0.05，**P<0.01.

4 討論

疼痛是由于痛覺感受器受到刺激而產生興奮，沖動經傳入神經纖維到達大腦某些神經細胞，或中樞通路的某一水平受損時所產生的一種不舒適的感覺[10]．在生活中疼痛常給患者帶來生理和心理的折磨，它能改變人的精神——心理狀態，使情緒極不穩定．同時會打亂機體內分泌系統、心血管系統和呼吸系統的正常運行，使胃腸功能紊亂，降低人們的生活質量[11]．因此，緩解和減輕疼痛成為現代醫學研究者廣泛關注的問題．

本文采用兩種實驗模型對牛皮杜鵑葉水煎液的鎮痛作用進行了研究，其中，熱板法早在50年前就用于疼痛和鎮痛的研究中[12-13]，是目前藥理實驗中比較成熟的實驗模型，多年的研究表明，凡在臨床上對急性疼痛顯示良好效果的鎮痛劑，在熱板法實驗中都可明顯延長動物的反應時間．本實驗結果表明牛皮杜鵑葉水煎液對熱板法小鼠產生的快痛具有鎮痛效應．扭體實驗是一種慢性持續性疼痛的實驗模型，結果顯示，牛皮杜鵑葉水煎液對醋酸所致小鼠的疼痛有緩解作用，表明牛皮杜鵑葉水煎液對慢性持續性疼痛也有鎮痛作用．因此，牛皮杜鵑葉水煎液具有一定的鎮痛作用，但其鎮痛機理還有待進一步研究．

參考文獻：

[1]周繇.長白山區杜鵑花科稀有瀕危植物的區系特點和保護評價[J].湖北大學學報,2006,28(12):393-396.

[2]周繇.長白山植物資源學[M].長春:吉林人民出版社,2008.

[3]中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京:科學出版社,2004.

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[5]葉麗卡,陳妍研,任長順,等.龜葉草抗炎鎮痛作用的實驗研究[J].中草藥,2002,33(10):94.

[6]邢俊波,曹紅,王國佳.白芷乙醇提取物鎮痛作用研究[J].中國野生植物資源,2012,31(1):43-45.

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[8]胡榮,李祖倫,楊露,等.白芷提取物歐前胡素鎮痛作用實驗研究[J].四川中醫,2012(4):58-60.

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[10]許蓬娟,辛曉林,艾洪濱.中藥雞血藤的鎮痛實驗研究[J].生物醫學工程研究,2008,27(4):291-293.

[11]周志剛,張斯.疼痛醫學的新進展[J].河南外科學雜志,2003,9(6):46-48.

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[13]王維,孫靖輝,康治臣.藁本醇提物的鎮痛作用實驗研究[J].中國實驗診斷學,2008,12(2):171-174.