坤安煎劑對去卵巢大鼠體質量及皮質酮的影響*

傅金英，于勝男，徐萌萌，李瑞麗，杜 蕾

(河南中醫學院，鄭州 450008)

絕經后婦女由于卵巢功能衰退，雌激素分泌減少，機體出現糖脂代謝紊亂、脂肪分布改變及骨鈣丟失增加，容易患高血壓、冠心病、糖尿病、骨質疏松等疾病[1]。我們在生活中發現，許多女性進入中年以后出現腹型肥胖;長期臨床觀察也發現，中年女性隨著卵巢功能衰退，容易出現脂代謝紊亂，而受腎上腺調控的皮質激素與脂代謝異常及肥胖關系密切。本實驗采用去卵巢雌鼠模型，通過觀察“坤安煎劑”對去卵巢大鼠體質量及血清皮質酮水平的影響，驗證卵巢功能衰退后是否會影響腎上腺軸(HPA軸)，并探討中藥對其干預作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

選用SPF級雌性成年Wister大鼠40只，體質量200±10 g，由山東魯抗醫藥股份有限公司提供(實驗動物質量許可證號SCXK(魯)20080002)。實驗室溫度18±3℃，相對濕度70%。

動物適應喂養1周后隨機分為4組:空白組不予任何處理;模型組摘除大鼠雙側卵巢，術后7 d給予生理鹽水灌胃，10 ml/kg/次，連續8周;中藥組摘除大鼠雙側卵巢，術后7 d給予中藥“坤安煎劑”灌胃，10 ml/kg/次，相當于成人等效劑量的6倍，連續8周;補佳樂組摘除大鼠雙側卵巢，術后7 d給予補佳樂生理鹽水混懸液(0.01 mg/ml)灌胃，10 ml/kg/次，相當于成人等效劑量的6倍，連續8周。

1.2 藥品和試劑

坤安煎劑組成:北沙參15 g，山茱萸15 g，枸杞20 g，地骨皮 15 g，女貞子15 g，旱蓮草 30 g，知母 15 g，黃柏 12 g，黃芪 30 g，茯苓15 g，杜仲20 g，淫羊藿30 g，煅龍骨 30 g，煅牡蠣 30 g，丹參30 g，酸棗仁 30 g，由河南省中醫院制藥室提供，1 ml相當于3.52 g生藥，4℃冰箱保存備用;鹽酸氯胺酮注射液2 ml，0.1 g/支，由福建古田藥業有限公司提供(生產批號H35020148)。注射用青霉素鈉80萬單位/支，由華北制藥股份有限公司提供(生產批號H13020657);生理鹽水500 ml/瓶，由河南太龍藥業股份有限公司提供(生產批號H41023506);補佳樂戊酸雌二醇片由法國Delpharm Lille SAS提供(生產批號J20080036);皮質酮(CORT)酶聯免疫吸附測定試劑盒，由伊萊瑞特生物技術有限公司提供。

1.3 儀器

AG204型電子天平，動物天平(上海精密儀器儀表有限公司)，80-2型離心機(上海云樓醫用儀器廠)，電熱恒溫水浴箱(HI-I·W21·Cu660型上海醫療器械廠)，－80℃超低溫冰箱(美國)，光學顯微鏡(上海光學儀器廠)。

1.4 動物模型復制

用5%鹽酸氯胺酮注射液將大鼠腹腔注射麻醉(用量100 mg/kg)，切開皮膚及肌肉層1-1.5 cm，找到雙角管狀子宮，沿子宮可找到卵巢，將雙側卵巢摘除止血，再將牽拉出的輸卵管及子宮輕輕放回腹腔。縫合腹肌和皮膚，術后肌肉注射青霉素每只每天20萬U，連續3 d。大鼠摘除卵巢后3 d，逐只進行陰道脫落細胞涂片檢查，每天1次，連續5 d，顯示動情周期紊亂，證明去卵巢成功。

1.5 大鼠稱重及血清皮質酮(CORT)水平測定方法

末次給藥24 h后稱取各大鼠體質量。腹腔麻醉后腹主動脈取血5 ml，分離出血清，－80℃保存，用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清皮質酮(CORT)水平，檢測方法嚴格按試劑盒說明書進行操作。

1.7 統計學方法

采用SPSS 18.0統計軟件進行統計分析，組間比較采用單因素方差分析，所有數據以均數±標準差(s)表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

結果表明，大鼠卵巢切除后體質量明顯升高，與空白組比較差異有統計學意義(P＜0.01);補佳樂組大鼠體質量有降低趨勢，但與模型組比較差異無統計學意義(P＞0.05);中藥組大鼠體質量明顯降低，與模型組比較差異有統計學意義(P＜0.05);中藥組與補佳樂組比較體質量降低，但差異無統計學意義(P＞0.05)。

表1 各組大鼠體質量及血清CORT比較(s)

表1 各組大鼠體質量及血清CORT比較(s)

注:與空白組比較:▲P＜0.01;與模型組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與補佳樂組比較:△P＜0.01。

組 別 例數 體質量(g)血清CORT(pg/ml)10 318.70±27.29 102.92± 3.93模 型 組 10 390.88±38.92▲ 205.62± 3.54▲△中 藥 組 10 357.30±36.05* 170.79± 4.36＊＊▲△補佳樂組 10 378.50±24.05▲ 151.52±25.51空白組＊＊▲

大鼠卵巢切除后血清皮質酮(CORT)水平明顯升高，與空白組比較差異有統計學意義(P＜0.01);中藥組及補佳樂組大鼠血清CORT水平明顯降低，與模型組比較差異有統計學意義(P＜0.01);中藥組與補佳樂組比較差異有統計學意義(P＜0.01)。

3 討論

更年期綜合征(Climacteric Syndrome，CS)是臨床常見病、多發病，是婦女在絕經前后因卵巢功能逐漸衰退以致雌激素水平下降所引起的以植物神經功能紊亂代謝障礙為主的一系列證候群，屬于中醫“絕經前后諸癥”范疇[2]。《素問·上古天真論》曰:“……七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子也。”中醫認為，婦女49歲左右，腎氣漸衰，天癸將竭，任沖二脈虛衰，腎陰虧虛，陰不斂陽，陽浮于外，陰陽平衡失調，所以主要表現為腎陰虛，而“陰累及于陽”，致陰陽兩虛影響心、肝、脾等臟，從而發生一系列的病理變化而引起絕經前后諸癥。近期主要表現為潮熱、出汗、心悸、抑郁、失眠等，遠期可致骨質疏松、泌尿生殖道改變、老年癡呆及心血管疾病發病率增加[3，4]。治療以補腎滋陰為主，兼以溫陽養血、益精填髓。本次研究所用方“坤安煎劑”是導師傅金英教授在基礎研究及大量臨床經驗中總結出的經驗方，由經方“知柏地黃丸”合“二至丸”加減化裁而來。方中北沙參、知母、黃柏滋陰降火;地骨皮退虛熱;山茱萸、杜仲、枸杞、女貞子、旱蓮草補益肝腎、益精填髓;淫羊藿補腎壯陽;丹參活血化瘀;煅龍骨、煅牡蠣斂汗固精、鎮靜安神;酸棗仁養心安神;黃芪、茯苓益氣健脾。諸藥合用切中病機，共奏補腎填精、調理氣血、平衡陰陽之功效。

皮質醇(cortisol，CORT)是從腎上腺皮質中提取出的對糖類代謝具有最強作用的腎上腺皮質激素，屬于糖皮質激素的一種，鼠類皮質醇含量較少，而以皮質酮為主。CORT的分泌水平受HPA軸調控，HPA軸活性被認為與肥胖等的發生有關，且CORT可以拮抗生長激素和性激素對外周脂肪組織的作用，促進腹部脂肪的堆積，可見中心性脂肪堆積，即腹型肥胖多數是CORT分泌增加的結果。Phillips[5]等報道，早晨血皮質醇水平升高，并與糖耐量異常、胰島素抵抗、高脂血癥、高血壓相關，脂肪組織和肝臟皮質醇代謝異常可能在中心型肥胖和代謝綜合征發病中發揮重要作用。代謝綜合征(metabolic syndrome，MS)為臨床綜合征，包含多方面的要素:腹型肥胖、胰島素抵抗、血脂異常、血壓異常、糖耐量異常等[6]。殷元萬等[7]研究中發現，代謝綜合征患者午夜血清皮質醇水平與腰圍、體質量指數、收縮壓、空腹血糖、甘油三酯呈正相關，與高密度脂蛋白、膽固醇呈負相關。另外，CORT在各種應激狀態下大量釋放，能直接影響糖、蛋白質、脂肪等三大營養物質代謝，通過“許可作用”保持血管平滑肌對去甲腎上腺素的敏感性，從而對心血管系統產生影響[8]。葉林秀等[9]在冠心病患者唾液皮質醇水平與糖代謝狀況的研究中發現，冠心病患者皮質醇水平顯著升高。湯圓圓等[10]研究發現，急性心肌缺血大鼠CORT含量明顯升高。總之，皮質酮水平與血脂代謝紊亂、心血管疾病的發生密切相關。

本研究發現，大鼠去卵巢后可引起血清皮質酮水平的升高和體質量的增加，驗證了我們之前提出的關于女性絕經后由于卵巢功能衰退進而影響到HPA軸的一個假說，提示益腎填精中藥“坤安煎劑”可能通過調節血清皮質酮水平改善去卵巢大鼠血脂代謝紊亂等情況，為臨床研究提供了實驗支持。但連接HPO-HPA軸的紐帶及其機制尚待進一步的研究發現。

[1]張賢莉.對絕經后婦女激素替代治療的認識[J].臨床合理用藥，2010，3(12):98-99.

[2]張玉珍.中醫婦科學[M].2版.北京:中國中醫院出版社，2002:169-172.

[3]鄧偉民，黃海，曾東，等.補腎壯骨沖劑對更年期綜合征患者性激素及血脂的影響[J].中醫雜志，2011，52(3):208-213.

[4]陸華，胡翔，王靜.左歸丸對去勢雌性大鼠子宮和陰道的影響[J].中醫雜志，2009，50(6):544-546.

[5]Phillips.DI.Elevated plasma cortisol concentrations:a link between low birth weight and the insulin resistance syndrome[J].J Clin Endocrinol Metab，1998，83:7578.

[6]潘長玉.代謝綜合癥認識和防治新進展[J].中華內分泌代謝雜志，2005，21(4):298-300.

[7]殷元萬，向斌，楊芳，等.代謝綜合征患者午夜血清皮質醇水平與心血管危險因素的關系[J].中外醫療，2012，11:53-54.

[8]李娜，王涵，文威，等.不可預見刺激對大鼠行為學及HPA軸功能的影響[J].中國老年學雜志，2011，7(31):1196-1199.

[9]葉林秀，劉興暉，郭昆全，等.冠心病患者唾液皮質醇水平與糖代謝狀況的研究[J].臨床心血管雜志，2011，27(1):13-15.

[10]湯園園，凃乾，張英，等.電針內關穴對急性心肌缺血大鼠血清ACTH、CORT 含量的影響[J].江蘇中醫，2012，44(4):69-70.