氣相色譜法對甘草片中有機氯的測定

麥 妙

(海南省三亞市食品藥品監督管理局，海南三亞 572000)

甘草被譽為中藥中的“國老”，其性平、味甜，具有益氣補中、緩急止痛、潤肺止咳、瀉火解毒之功效，尤其是其特有的甜味能蓋過其他藥材的苦味，在兒科處方中較為常見[1]。甘草片屬中成藥，具有鎮咳祛痰作用，主要有效成分為甘草流浸膏。由于甘草品的止咳效果顯著，其在臨床上的應用十分廣泛。正所謂“十方九草”，隨著現代科學技術的發展，甘草的臨床應用更是越來越廣泛[2～4]，正是如此大的需求量，市面上的甘草多為人工種植品。有機氯類農藥是被廣泛運用的殺蟲劑，但對人體百害無一利，該類農藥具有難分解、性質穩定的特點，故而殘留期長，且容易在人體內累積造成慢性中毒，長期的大量使用對環境已經造成了較大的污染[5]，我國在20世紀80年代已停用了有機氯類農藥，但目前仍能在中藥中檢出該類農藥。為探究有機氯在中成藥中的殘留[6]，本文將氣相色譜法用于檢測甘草片中有機氯含量，期望通過該檢測手段快速、準確地檢測中成藥中有機氯類農藥的殘留量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津氣相色譜儀GC-2010plus)含氣相色譜工作站和電子捕獲檢測器(Ni-ECD)，農殘專用石英毛細管柱(30 m ×0.25 mm ×0.25 μm)，旋轉蒸發儀YRE-202B(上海標和儀器公司)，電子分析天平(上海方瑞儀器廠)，循環水真空泵SHZ-III型(江蘇金壇儀器廠)，超聲波發生器(江蘇金壇儀器廠)，800B臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)。

1.2 試藥

石油醚、丙酮、硫酸、二氯甲烷及無水硫酸鈉等均購自廣州化學試劑廠，所用試劑均為分析純;六六六(BHC)包括 α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC 4 種異構體;滴滴涕(DDT)也有4種異構體，分別為PP'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT 和 PP'-DDT;五氯硝基苯(PCNB)濃度均為100 μg/ml。以上有機氯標準品購自國家標準物質研究中心。

2 方法

2.1 色譜條件

島津氣相色譜儀和氣相工作站，Ni-ECD檢測器，農殘檢測專用石英毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);進樣口溫度250℃，檢測器溫度300℃，柱溫220℃[7]。升溫程序為:初始溫度120℃，每分鐘升溫10℃，升到200℃終止，保持終止溫度2 min，從200℃以每分鐘2℃的速率升溫，升到230℃后保持2 min，載氣為高純氮氣，流速為1.5 ml/min，壓力為100 kPa，尾吹氣流量56.3 ml·min－1，進樣量 1 μL 不分流進樣[8]。

2.2 標準曲線繪制

混合對照品溶液的制備:先制備對照品儲備液，精密吸取 α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDD、PP'-DDT 和五氯硝基苯 1 ml，置于25 ml容量瓶中，用丙酮與石油醚混合有機溶劑稀釋至刻度，儲備液濃度為4.0 μg·ml－1;精確吸取一定體積的對照品儲備液于25 ml容量瓶中，用石油醚稀釋至刻度，分別配置 0.01、0.05、0.10、0.50及1.0 μg·ml－1不同濃度的一系列對照品溶液;在上述的色譜條件下進樣1 μL，以濃度為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)，建立標準曲線方程[9]。

2.3 精密度實驗

精密吸取一定量標準品溶液，相當于含量5 μg/L，按照2.1色譜條件連續進樣6次，記錄峰高和保留時間，根據峰面積計算RSD值。

2.4 重現性實驗

稱取甘草片樣品3份，每份按照含甘草流浸膏粉100 mg為標準，加入30 ml丙酮與石油醚混合有機溶劑，超聲提取25 min過濾棄渣，并用5 ml石油醚洗滌2次并入上述濾液中，濾液放入旋轉蒸發瓶中濃縮干，再用石油醚定容并用濃硫酸磺化，2500 r/min離心15 min，靜置取上清液中，再按2.1色譜條件連續進樣6次，根據峰面積計算RSD值[10]。

2.5 回收率實驗

稱取相當于含甘草流浸膏粉100 mg的甘草片樣品，制備供試品溶液，分別加入濃度為0.05、0.10、0.15 μg/ml的對照品標準溶液，3 個濃度均按2.1色譜條件連續進樣6次，記錄峰高和峰面積并計算回收率[11]。

3 結果

3.1 線性考察結果

表1顯示，對照品混合物的濃度在10～1000 μg·ml－1范圍內線性良好，相關系數 r≥0.9961。

表1 標準曲線方程

3.2 精密度和重復性結果

根據對照品混合溶液峰面積計算RSD值在2.18% ～6.45%范圍內，檢測儀器的精密度良好;樣品峰面積計算RSD值為6.17%，檢測方法重現性好(精密度和重現性就是通過峰面積計算RSD值，不要單獨將各測定峰面積值列出)。

3.3 回收率實驗結果

表2顯示，樣品平均回收率89.7% ～101.2%，該檢測方法回收率高且準確、可靠。

3.4 樣品檢測結果

樣品和對照品溶液做隨行對照檢測，含量計算采用外標法。從色譜圖1、2中可見，本甘草片樣品中只檢測出β-BHC，檢測出的殘留量為0.008 mg/kg。

4 結論

農藥殘留會污染藥材而影響用藥安全，尤其是高毒性的有機氯類農藥，會對人體健康和用藥安全產生極大影響[12，13]。中成藥的質量不僅要相關的有效成分合格，同時農殘、重金屬等對藥品質量都有影響，對人體健康有危害的物質，也應限定在一定范圍內。我國是中成藥的生產和消費大國，臨床療效也充分證明了中成藥的獨特作用，但目前中成藥的出口和國外對中成藥的接受程度均受到限制，其中農殘是一個很重要的原因[14]，為此加強中成藥的農藥殘留分析十分必要。世界衛生組織從20世紀80年代就將農殘列為檢測項目，我國2000版《中國藥典》開始對農殘進行限量要求，特別是《中藥材生產質量管理規范》的實施，對從源頭上控制農藥殘留量起到了至關重要的作用[15]。

圖1 混合標準品氣相色譜圖

圖2 樣品的色譜圖

中成藥成分比較復雜，甘草片中就含有阿片粉、樟腦、八角茴香油、苯甲酸鈉、甘草酸等許多成分，部分化合物的結構、理化性質等與有機氯農藥相似，使得樣品與有機氯農藥的分離、凈化難度增大。為保證檢測結果的可靠性，中成藥中有機氯農殘的處理技術一般較為繁瑣，這也是當前有機氯農殘檢測中普遍存在的問題。繁瑣的前處理步驟降低了檢測效率和檢測的可靠性，不能滿足實際需要，而建立簡便、快速、可靠的樣品前處理和分離檢測方法，已成為未來中成藥中有機氯農殘檢測的發展趨勢[12]。針對當前中成藥有機氯農殘檢測主要集中在BHC和DDT上的特點，本文以石油醚和丙酮為超聲提取溶劑，采用外標法計算含量，并參照《中華人民共和國藥典(2010版)》中“有機氯類農藥殘留檢測法”。該檢測相對簡便、快速，其準確度和可靠性高，在實際檢測工作中，不但適用于中成藥甘草片的有機氯檢測，也可以用于檢測其他中成藥樣品中有機氯的農藥殘留。

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