生殖道解脲支原體檢測方法的比較及應用

王紫燕 張永樂 周強

1蘇州大學附屬兒童醫院檢驗科 江蘇蘇州 215003

2杭州第六人民醫院檢驗科 浙江杭州 310014

生殖道解脲支原體檢測方法的比較及應用

王紫燕1張永樂2周強2

1蘇州大學附屬兒童醫院檢驗科 江蘇蘇州 215003

2杭州第六人民醫院檢驗科 浙江杭州 310014

目的:分析熒光定量PCR法與液體培養法對生殖道解脲支原體的檢出率及臨床應用。方法:收集1299例患者生殖道分泌物標本，其中302例標本同時采用熒光定量PCR法和液體培養法檢測Uu，997例標本僅采用熒光定量PCR法檢測Uu。結果:熒光定量PCR法和液體培養法同時檢測302例標本，PCR法檢出Uu 116例，陽性率為38.41%，液體培養法檢出Uu 81例，陽性率為26.82%，PCR法陽性率顯著高于培養法(X2=9.23，P＜0.05)。結論:女性感染Uu陽性率較男性要高。Q－PCR法Uu檢出率高于液體培養法，臨床應二種方法結合使用。

生殖道;解脲支原體;熒光定量PCR

解脲支原體(Ureaplasm urealyticum，Uu)是泌尿生殖道非淋菌性炎癥中常見的病原體，在男性易引起非細菌性前列腺炎、非淋菌性尿道炎、男性不育等，在女性易引起尿道及生殖器官感染、不明原因的流產、宮外孕等，也是導致女性不孕不育的病原體之一［1］。目前臨床應用最廣泛的檢測方法有熒光定量PCR法(fluorescence quantitative PCR，Q－PCR)和支原體培養法，現就兩種方法學對Uu的檢出率及臨床應用作一分析。

1 資料與方法

1.1 研究對象收集2009年1－10月在杭州第六人民醫院性保門診就診的1299例患者生殖道分泌物標本，其中男801例，平均年齡(27.5± 6.6)歲，女498例，平均年齡(28.4±4.5)歲。

1.2 標本采集用無菌棉拭子取男性前尿道1－2cm處分泌物，采集女性分泌物時，在陰道或宮頸內旋轉并至少停留20秒，以獲得較多細胞。

1.3 方法

1.3.1 熒光定量PCR檢測向無菌棉拭子的標本中加1 ml生理鹽水，震蕩混勻數秒，轉入1.5 ml的離心管中，12000 r/min離心5 min，棄上清，在沉淀中加入50 ulDNA裂解液，100℃10min，轉入4℃冷卻30min，12000 r/min離心5 min，上清即為PCR反應模版。

1.3.2 液體培養法支原體液體培養檢測卡第一排第一孔為陰性對照。將采集的標本拭子插入培養瓶擠壓旋轉數次，使拭子中的分泌物混勻在培養液中，在除陰性孔的檢測卡其他孔加入100 ul含標本的培養液，再加兩滴石蠟油，蓋上蓋子放入培養箱培養24－48小時，在48小時后觀察結果，反應孔呈清晰透明紅色為Uu陽性，混濁紅色為污染，黃色或橙黃色為陰性。

1.4 統計學處理采用統計分析用spss17.0統計軟件檢測分析數據，陽性率的差異性采用X2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

1、兩種方法學檢測結果比較:302例生殖道分泌物標本同時采用兩種檢測方法檢測結果見表1，其中Q－PCR法檢出Uu 116例，陽性率為38.4%，培養法檢出Uu 81例，陽性率為26.8%，Q－PCR法敏感性明顯高于培養法(X2=9.228，P＜0.05)。

表1 Q－PCR法和液體培養法檢測解脲支原體的陽性率差異

3 討論

支原體是一群大小介于細菌與病毒之間，能夠獨立生活的微生物，支原體無細胞壁，呈高度多形性，繁殖方式多樣。Uu是引起人類泌尿生殖道感染的主要病原體之一，目前臨床常用的檢測方法為液體培養法和熒光定量PCR技術。

液體培養法準確率高，被人們認為是Uu檢測的"金標準"［2］。同時培養法還能通過藥敏試驗，得出病原體的耐藥性，為臨床醫生提供可靠治療依據。但是培養要求條件比較高，從標本采集，運送都有較高的要求，同時受是否使用抗生素的影響。當標本采集過少，運送時間過長時可導致培養失敗，患者正在使用抗生素或停藥時間較短時采集標本也可能會出現假陰性。這些條件的存在是致使液體培養法陽性率不高的關鍵所在。熒光定量PCR技術是近年興起的技術，它以靈敏度高、特異性強而受歡迎，但是常規PCR較易出現產物污染導致假陽性的產生，而熒光定量PCR技術在密閉的反應管中檢測，可杜絕產物污染。雖然熒光定量PCR有較高的靈敏性和特異性，但是PCR技術不能判斷病原體是否存活，病原體的殘核存在PCR也能檢出。另外，PCR不能進行藥物敏感度的判定。

我們通過實驗證實302例生殖道分泌物標本采用液體培養法陽性率為26.8%，而Q－PCR法陽性率為38.4%，Q－PCR法敏感性明顯高于傳統培養法。另外，1299例標本Q－PCR總體陽性率為36.6%，這與報道的結果一致［3］。

綜上所述，在解脲支原體感染的臨床檢測中我們應該培養法與熒光定量PCR相結合，這不僅提高了臨床病原體的檢出率，達到早期檢測避免漏檢現象，同時培養的藥敏結果也給臨床醫師提供正確選擇抗生素的有效途徑。

［1］陳春英，楊舒盈，朱根海.女性生殖道感染治療前后解脲支原體熒光定量PCR檢測的假陽性分析［J］.中國優生與遺傳雜志，2007，15 (3):32－33.

［2］Misteli T.Protein dynamics:implications for nuclear architecture and gene expression［J］.Science，2001，291(5505):843－847.

［3］張永樂，章松平，馬蘭等.檢測早期梅毒螺旋體感染的4種方法比較［J］.中國皮膚性病學雜志，2008，22(2):118－119.

R446.1

B

1009－6019(2014)10－0166－02