門冬氨酸鳥氨酸注射液的處方與工藝優化研究

王璐璐 陳少華 相 莉 鄭穩生*

（中國醫學科學院藥物研究所藥物傳輸技術及新型制劑北京市重點試驗室，北京 100050）

門冬氨酸鳥氨酸注射液的處方與工藝優化研究

王璐璐 陳少華 相 莉 鄭穩生*

（中國醫學科學院藥物研究所藥物傳輸技術及新型制劑北京市重點試驗室，北京 100050）

目的研究門冬氨酸鳥氨酸注射液的處方及制備工藝。方法通過考察門冬氨酸鳥氨酸注射液的性狀、色澤、pH、含量及有關物質，得到優選處方。結果本品最適pH值為 6.0～7.0，以 115 ℃熱壓蒸汽滅菌30 min作為本品的滅菌方法。本品在室溫避光放置12個月，各項質量指標均在合格范圍內。結論本品處方設計合理，工藝可行，質量穩定。

門冬氨酸鳥氨酸注射液；制備工藝；穩定性

門冬氨酸鳥氨酸（Ornithine Aspartate，OA）最先于20世紀70年代在德國用于臨床，1991年收載德國藥典，并被美國FDA批準用于治療肝性腦病。由于OA能參與尿素代謝而降低血氨，在糾正肝性腦病和亞臨床型肝性腦病的臨床應用中已得到認可[1-3]。隨著應用經驗的積累，發現門冬氨酸鳥氨酸在促進肝細胞修復，減輕肝細胞損害等方面有一定作用，已在肝臟的圍手術期和放、化療中作為護肝輔助治療，具有很好的安全性[4]。OA主要成分及其化學名稱為（S）-2，5-二氨基戊酸（s）-2-氨基丁二酸鹽，其結構中有酰胺基團，因此對光、氧、堿及酸均不穩定。本文對OA注射液的處方及制備工藝進行研究，并且通過穩性試驗確定制劑的有效期，為工業化生產提供基礎。

1 儀器與試藥

HP8453紫外分光光度計（美國惠普公司）；HPLC儀（美國Waters公司），泵：515、紫外檢測器2487、自動進樣器717plus Autosampler。OA注射液（中國醫學科學院藥物研究所，批號：130101、130102、130103，規格為 10 mL：5 g）；OA原料（中國醫學科學院藥物研究所，批 號 ：201201。

2 方法與結果

2.1 OA注射液的制備：在避光條件下，于燒杯中加入煮沸冷卻至50 ℃的注射用水800 mL，氯化鈉6.0 g，亞硫酸氫鈉0.8 g，OA 5.0 g，溶解后用0.5 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH為6.0～7.0，加注射用水至1 L，混勻，再加入0.1%活性炭（w/v），攪拌煮沸 30 min，趁熱濾過脫炭，經0.22 μm微孔濾膜過濾，濾液灌裝于10 mL安瓿中，通氮熔封。置流通蒸汽115 ℃滅菌30 min。

2.2 OA注射液含量及有關物質的測定[5]

2.2.1 色譜條件：Kromasil 100-5NH2柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈（50∶50）；檢測波長：210 nm；流速：1.0 mL/min；進樣量 20 μL。

2.2.2 注射液中的OA含量：精密量取OA注射液0.2 mL(相當于OA 100 mg)，置100 mL棕色量瓶中，加流動相溶解并定容，作為供試品溶液。另取濃度為1 mg/mL的對照品溶液（精密稱取OA 25 mg置25 mL棕色量瓶中，加流動相溶解并定容）。按外標法計算供試品中OA的含量。

2.2.3 有關物質測定：精密量取本品2.0 mL，置100 mL容量瓶中，用流動相定量稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為1%自身對照溶液。另取雜質對照，精密稱定，用流動相分別定量OA稀釋成一定濃度作為雜質對照液，記錄峰面積，計算結果。

2.3 處方篩選及工藝優化

2.3.1 pH值的選擇：照“2.1”項下方法配制OA注射液，分別用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調 pH 值為5.0、5.3、5.6、6.0、6.3、6.7、7.0、7.3、7.7、8.0，灌入10 mL安瓿瓶中，熔封，經 115 ℃熱壓蒸汽滅菌30 min后，冷卻，觀察樣品色澤，測定其含量、有關物質。結果表明，OA在pH6.0～7.0范圍的水溶液中有良好的穩定性，結果見表1。

表1 pH值對樣品的影響

2.3.2 抗氧劑對OA注射液穩定性影響：在處方中分別加入不同濃度的抗氧劑，照“2.1”項下方法配制OA注射液，考察其色澤、含量及有關物質的變化，結果表明，抗氧劑在0.1%范圍內，OA注射液穩定性良好，結果見表2。

表2 抗氧劑對OA注射液穩定性影響

2.3.3 活性炭對主藥的吸附考察：照“2.1”項下方法配制OA注射液，按溶液量分別加入0%、0.1%、0.2%、0.3% 的針用活性炭，攪拌煮沸30 min，趁熱濾過脫炭，觀察樣品色澤，測定其含量、有關物質。由結果可見，活性炭對OA有吸附，活性炭加入量為0.3%時，主藥含量下降顯著，經0.1%、0.2%、0.3%活性炭處理的藥液熱原檢查均符合標準。根據試驗結果，選擇溶液量的0.1%的針用活性炭處理藥液。見表3。

表3 活性炭對樣品的影響

2.3.4 滅菌條件考察：照“2.1”項下方法配制OA注射液，灌裝于10 mL安瓿瓶中，進行高溫滅菌考察。結果顯示，3種滅菌條件下的無菌檢查均符合要求，且均不影響產品的性狀、pH值及含量，考慮生產成本，選擇 115 ℃ 熱壓蒸汽滅菌30 min作為本品的滅菌方法。見表4。

表4 滅菌溫度、滅菌時間對樣品的影響

2.4 穩定性試驗

2.4.1 影響因素試驗：取按照“2.1”項下方法配制的 OA 樣品，分別于光照[（4500±500）lx]及高溫（60 ℃）條件下放置10 d，檢測樣品pH、色澤、含量、有關物質及澄明度變化，結果見表5。OA注射液經強光照射10 d后有關物質增多，其他條件下pH、色澤、含量、澄明度均無明顯變化。提示本品對光較敏感，在制備和貯存過程中均須避光。

2.4.2 凍融試驗：新藥研究單位在設計藥品的穩定性考察實驗方案時，往往注意通過一系列的影響因素實驗來選定藥品的包裝與儲存條件，通過標準條件下的長期留樣實驗來確定產品的有效期[6]。但經常會忽略一些特殊的藥品在運輸或使用過程中因為溫度的變化而可能給產品的質量所造成的不利影響。

美國FDA1998年6月發表的穩定性指導原則草案對此問題提出了一個解決的辦法，即對于易發生物相分離、黏度減小、沉淀或聚集的藥品需通過熱循環實驗來驗證其運輸或使用過程中的穩定性。作為影響因素實驗的一部分，應模擬藥品在運輸與使用過程中可能碰到的溫度條件下循環考察上市包裝的藥品的穩定性[7]。具體方法如下：對于可能暴露于冰點以下的藥品，熱循環實驗應包括三次循環，每次循環應在-10～-20 ℃兩天，然后在40 ℃加速條件下考察2 d。觀察pH、色澤、含量、有關物質及澄明度變化，結果見表6。

表6 低溫凍融試驗 （n=3）

2.4.3 長期試驗：檢測OA注射液長期試驗[（25±2） ℃，避光]的穩定性（表7）。結果顯示，OA注射液室溫長期放置18個月，各項質量指標均在暫定質量標準的合格范圍內，故有效期暫定為1.5年。

表7 OA注射液長期試驗穩定性試驗結果（n=3）

3 結 論

考察了OA注射液的處方和制備工藝，并對其質量影響因素及長期穩定性進行了研究。結果表明所研制的OA注射液處方合理，工藝可行，質量穩定。本品對光敏感，須避光保存，通過對處方中pH值的考察，發現門冬氨酸鳥氨酸注射液pH值在6.0～7.0時均較穩定，因此將本品的pH值控制范圍確定為6.0～7.0。本產品生產采用水浴式滅菌柜，F0值約為12，滅菌效力有充分的保證[8,9]。

[1] 趙麗,門冬氨酸鳥氨酸注射液抗肝性腦病的療效觀察[J].中國當代醫藥,2011,18(24):82-83.

[2] 劉海,郭致平.門冬氨酸鳥氨酸注射液治療肝性腦病的30例療效分析[J].中國社區醫師(醫學專業半月刊), 2008,20(1):36.

[3] 江必武,王平.門冬氨酸鳥氨酸注射液與綜合療法治療失代償期肝硬化35例[J].中西醫結合肝病雜志,2005,15(5):46-47.

[4] 王一寧,金薇,高洪艷.門冬氨酸鳥氨酸治療慢性乙型肝炎的臨床研究[J].中國中醫藥現代遠程教育,2010,8(1):106.

[5] 蔣音,陳良,巫善明.門冬氨酸鳥氨酸的藥理作用與臨床應用[J].世界感染雜志,2007,7(5):415-418.

[6] 繆寧梅,馬婕.高效液相色譜法測定門冬氨酸鳥氨酸注射液的含量[J].中國生化藥物雜志,2007,28(1):52-53.

[7] 王榮梅.高效液相色譜法測定鹽酸精氨酸注射液的含量[J].中國生化藥物雜志,2003,24(6):296-297.

[8] 高春,戴紅.門冬氨酸鉀鎂葡萄糖注射液中￡一門冬氨酸的HPLC測定[J].中國醫藥工業雜志,2003,34(5):241-245.

[9] 黃晨,著林俏,蘇素紅,等.注射用門冬氨酸鳥氨酸與果糖注射液配伍的穩定性考察[J].海峽藥學, 2009,21(5):69.

Prescription and Optimization of ornithine aspartate injection

WANG Lu-lu, CHEN Shao-hua, XIANG Li, ZHENG Wen-sheng
(Institute of Materia Medica Chinese Academy of Medical Sciences, Key laboratory of Drug Delivery?Technology and Novel Formulations, Beijing 100050, China)

ObjectiveTo develop an injection formulation for ornitbinaspaetant injection.MethodsThe appearance, color, pH, drug content and related substances of the injection were used as indicators for screening the formulation.ResultsThe optimum pH for the injection formulation was 6.0-7.0 according to the stability. Pressing steam sterilization was performed at 115 for 30 minutes. The prepared product was stable when stored at room temperature in light-resistant container for 12 months.ConclusionThe developed injection formulation was stable and suitable for industrial production.

Ornitbinaspaetant injection; Formulation; Stability

R917

B

1671-8194（2014）36-0051-02

*通訊作者