潔陰洗劑的質量標準研究

王宏源姚千足

（1 江蘇省昆山市中醫醫院，江蘇 昆山 215300；2 南京中醫藥大學，江蘇 南京 210046）

潔陰洗劑的質量標準研究

王宏源1姚千足2

（1 江蘇省昆山市中醫醫院，江蘇 昆山 215300；2 南京中醫藥大學，江蘇 南京 210046）

目的建立潔陰洗劑的質量標準。方法采用薄層色譜法鑒別蛇床子素，采用酸性染料比色法測定潔陰洗劑中生物總堿的含量。結果潔陰洗劑中含有蛇床子素，且小檗堿濃度在0.0187～0.0936 mg/mL范圍內線性關系良好，平均回收率為99.03%，RSD為2.34%。結論薄層色譜法快速簡便。含量測定方法簡便易行，穩定性、重復性、精密度高，具有較好的專屬性和準確度。

潔陰洗劑；蛇床子素；小檗堿；薄層色譜；酸性染料比色法

潔陰洗劑是我院自制的外用中藥洗劑，其處方由蛇床子、苦參、土荊皮、百部、馬鞭草、黃柏、冰片等藥味組成，具有清熱燥濕，殺蟲止癢的功效，臨床用量較大。為有效控制其產品質量，確保臨床療效，本文建立了制劑中有效成分蛇床子素的薄層色譜鑒別方法，并采用酸性染料比色法對主要藥味黃柏中含有的小檗堿進行含量測定，取得了較為理想的結果，可作為該制劑質量控制的依據。

1 儀器與試藥

760CRT型紫可見分光光度計；硅膠預制板G。甲醇，三氯甲烷等試劑均為分析純，蛇床子素標準品；鹽酸小檗堿標準品；潔陰洗劑（昆山市中醫醫院制劑室提供，500毫升/瓶，批號131207、131117、131013）。

2 方法與結果

2.1 蛇床子素薄層色譜鑒別

2.1.1 供試品的制備：取潔陰洗劑制劑500 mL，蒸干，殘渣加入5 mL 95%乙醇，超聲溶解30 min，移至25 mL容量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度為止，備用。

2.1.2 陰性對照的制備：按比例稱取制劑處方藥材，不加蛇床子，置500 mL容量瓶中第一次加水320 mL煎煮2 h，第二次加水200 mL，煎煮1 h。合并濾液，過濾。加入冰片，蒸干，殘渣加入5 mL 95%乙醇，超聲溶解30 min，過濾，移至5 mL容量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度為止，備用。

2.1.3 對照品溶液的制備：精密稱取蛇床子素標準品1.0 mg，置于2 mL容量瓶中，用適量的95%乙醇溶解，再用95%乙醇稀釋至刻度為止，制成0.50 mg/mL的對照品溶液，備用。

2.1.4 薄層色譜的鑒別：吸取供試品溶液、陰性對照溶液、標準品溶液各1 μL，分別點樣于硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯（20∶1）為展開劑[1]，檢視斑點的位置。供試品溶液在色譜中含有對照品溶液在色譜中的斑點，而陰性對照溶液不含有對照品溶液在色譜中的斑點，實驗結果表明供試品溶液中含有蛇床子素（圖1）。

2.2 總生物堿含量測定（以鹽酸小檗堿計）：精密稱取鹽酸小檗堿對照品5.4 mg制成濃度為0.0936 mg/mL的對照品溶液，取醫院自制的潔陰洗劑制劑三份，為批號131207、131117、131013的三個批次，備用。以溴甲酚紫為酸性染料，檸檬酸-檸檬酸鈉為緩沖液、pH為3.2，緩沖液用量為10.0 mL，酸性染料用量為1.0 mL，三氯甲烷用量為10 mL，萃取2次，每次5 mL。分別精密量取對照品溶液和供試品溶液1 mL置分液漏斗中，加入檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.2）10.0 mL，溴甲酚紫溶液1.0 mL搖勻，加入三氯甲烷，振搖提取2次，每次5.0 mL分取三氯甲烷層，合并兩次提取液，用紫外分光光度儀在200～500 nm范圍內掃描（圖2、3）。

由掃描結果可知，鹽酸小檗堿標準品與供試品在409 nm處均有明顯的吸收峰，故可用409 nm作為該實驗的檢測波長。

2.3 線性關系考察：精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置5 mL容量瓶中，蒸餾水稀釋至刻度。分別精密量取稀釋后的對照品溶液各1.0 mL，分別置分液漏斗中，加入檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.2）10.0 mL，溴甲酚紫溶液1.0 mL搖勻，加入三氯甲烷，振搖提取2次，每次5.0 mL分取三氯甲烷層，合并兩次提取液，以相應的試劑為空白。照紫外可見分光光度法[3]，于409 nm波長處測定吸光值，得到線性回歸方程：Y=6.0038X+0.0911，R=0.9963。結果見表1。

表1 標準曲線考察結果

2.4 精密度試驗：精密量取對照品溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，精密量取1 mL，照2.3項下的方法自“置分液漏斗中”起，重復測定5次，結果RSD=1.09%，精密度良好。

圖1 蛇床子素薄層的薄層色譜圖(1：蛇床子素對照品；2：潔陰洗劑（批號131117）；3：陰性對照)

圖2 鹽酸小檗堿對照品溶液的全波長掃描

圖3 供試品溶液的全波長掃描

2.5 穩定性試驗：精密量取供試液1 mL，置25 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，精密量取1 mL，照2.3項下方法自“置分液漏斗中”起，每隔10 min，共60 min內測定吸收度，吸光度平均值0.222，RSD=2.57%，結果表明供試品液在60 min內穩定性良好。

2.6 重復性試驗：取醫院制劑制備6份供試品液，精密量取各供試品液1 mL，置于25 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，再精密量取1 mL，依法測定吸光度。見表2。

表2 重復性實驗結果

2.7 加樣回收率實驗：精密量取已知含量供試品溶液1 mL，置于25 mL容量瓶內，精密吸取上述溶液1 mL和濃度為0.0187 mg/mL的鹽酸小檗堿對照品溶液1 mL，混合后取1 mL，依法測定吸光度，平行操作六份，回收率均值為99.03%。

2.8 含量測定：按上述方法，測定三批潔陰洗劑總生物堿含量（以小檗堿計），各3份，共9份供試品。所測得的含量為稀釋25倍的樣品含量，經計算得到最終的樣品含量，批號：131013平均含量0.5541 mg/mL，RSD1.63%；批號：131013平均含量0.5531 mg/mL，RSD1.64%；批號：131013平均含量0.5550 mg/mL，RSD1.24%。

2.9 制劑含量標準：依據2.8，取三個批次樣品的總生物堿（以小檗堿計）平均含量的80%暫作為該制劑的質量標準，供醫院今后生產該制劑時作為參考，即暫定每瓶樣品中總生物堿（以小檗堿計）含量不得低于0.4433 mg/mL。

3 討 論

小檗堿的含量測定我們最初采用紫外分光光度法直接測定，分別將鹽酸小檗堿對照品溶于甲醇，陰性對照品溶液和供試品溶液蒸干后加入甲醇溶解，再依次測各溶液的吸光度[2]。實驗對小檗堿對照品、制劑供試品和陰性對照品進行全波長掃描。結果顯示：鹽酸小檗堿對照品溶液在330 nm處有明顯的吸收峰，供試品溶液及陰性對照品溶液在330 nm處也含有明顯吸收但峰形不明顯，且陰性對照品與供試品相差不大，考慮潔陰洗劑中的中藥成分較多，不排除含其他生物堿或物質在該處也含有吸收峰，對實驗結果有影響，故放棄直接測定吸光度。

選擇利用酸性染料與生物堿的有色離子對形成反應可以去除其他成分對其吸光度的影響，且在405 nm處有吸收峰[3]，經實測，由于受對照品、溶劑、操作等因素的影響，測得酸性染料比色法處理后鹽酸小檗堿在409 nm處有明顯的吸收峰且干擾較小，故最后確定采用酸性染料比色法進行含量測定。

此次通過對潔陰洗劑質量標準的研究，建立了對蛇床子素的薄層色譜鑒別方法以及酸性染料比色法對潔陰洗劑中總生物堿的含量測定方法。薄層色譜法快速簡便，色譜斑點清晰、圓整、無拖尾。含量測定方法簡便易行，穩定性、重復性、精密度高，具有較好的專屬性和準確度。目前，按照省食藥監局的要求，醫院制劑均要逐步完善及提高質量標準體系，逐步建立定性、定量測定方法，本次研究結果，可作為潔陰洗劑質量標準的重要參考和依據，今后條件許可，可進行更深入的研究，從而不斷完善其質量標準，確保臨床療效。

[1] 張曉麗,曹愛民.薄層掃描法測定抗風濕膠囊中蛇床子素含量[J].時珍國醫國藥,2004,15(9):646.

[2] 汪怡.酸性染料比色法測定黃連解毒湯中總生物堿的含量[J].安徽醫藥,2013,17(5):759-761.

[3] 羅國平,孟會寧,張云龍,等.小陷胸顆粒中鹽酸小檗堿的含量測定[J].河北醫藥,2012,34(10):1568-1569.

R282.710.2

B

1671-8194（2014）29-0072-02