紫外-可見分光光度法測定振源口服液（無糖型）中人參總皂苷的含量

龐 威趙宏峰彌 宏越 皓曲芯瑤郭禹彤

（1 長春中醫藥大學，吉林 長春 130117；2 吉林省中醫藥科學院，吉林 長春 130012）

紫外-可見分光光度法測定振源口服液（無糖型）中人參總皂苷的含量

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（1 長春中醫藥大學，吉林 長春 130117；2 吉林省中醫藥科學院，吉林 長春 130012）

目的采用紫外-可見分光光度法測定振源口服液（無糖型）中人參總皂苷的含量。方法以人參皂苷Re為對照，用1%香草醛-高氯酸試液及77%硫酸顯色，在540 nm波長下通過紫外分光光度法對人參總皂苷進行含量測定。結果人參皂苷Re濃度在6.65～66.55 μg/mL范圍內線性關系良好，回歸方程A=-0.0751+0.0195X（相關系數r=0.9995），平均回收率為96.92%（RSD=1.79%）。結論該方法簡便可靠，穩定性好，可用于本品的含量測定和質量控制。

紫外-可見分光光度法；振源口服液（無糖型）；人參皂苷Re；人參總皂苷；含量測定

“振源口服液(無糖型)”具有益氣養陰的功效，適用于氣陰兩虛的久病虛弱患者，屬于現代醫學冠心病心絞痛的范疇。而目前我國心腦血管疾病發病率較高，每年呈上升趨勢，因此該藥有著積極的治療意義。“振源口服液(無糖型)”是以人參果總皂苷為原料的中藥單方口服制劑，對原“振源口服液”進行了輔料上的優化，擴大了用藥人群（糖尿病等胰島素功能不全的患者），同時建立了新的質量標準，通過紫外可見分光光度法測定了人參總皂苷的含量，并對其含量限度進行規定，現將研究結果報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：752型紫外光柵分光光度計（上海第三分析儀器廠）；梅特勒AB265-S型天平（瑞士梅特勒公司）；XMTD-4000型水浴鍋（北京市永光明醫療儀器有限公司）；具塞試管；移液槍；廢液缸；試管架。

1.2 試藥：人參皂苷Re對照品（供含量測定用，批號110754-200218，中國藥品生物制品檢定所提供）；甲醇（色譜純，美國Fisher公司）；香草醛（中國惠世生化試劑有限公司）；高氯酸（北京化工廠，分析純）；硫酸（北京化工廠，分析純）。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備：取人參皂苷Re對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Re 1.83 mg的溶液，搖勻，即得。

2.2 測定波長的確定：精密吸取人參皂苷Re對照品溶液（1.83 mg/mL）100 μL，置于具塞試管中，低溫揮去溶劑，加入1%香草醛高氯酸試液0.5 mL，置60 ℃恒溫水浴上充分混勻后加熱15 min，立即用冰水冷卻2 min，加入77%硫酸溶液5 mL，搖勻；以試劑作空白，消除氣泡后照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄V A），在440～600 nm處進行光譜處掃描，結果對照品溶液在538 nm處有最大吸收，同法制成的供試品溶液在530 nm處有最大吸收(見圖1-a,b)，故最終選擇540 nm為測定波長。

2.3 線性關系的考察：精密吸取人參皂苷Re對照品溶液20 μL、40 μL、 80 μL、120 μL、160 μL、200 μL，分別置于具塞試管中，低溫揮去溶劑，加入1%香草醛高氯酸試液0.5 mL，置60 ℃恒溫水浴上充分混勻后加熱15 min，立即用冰水冷卻2 min，加入77%硫酸溶液5 mL，搖勻；以試劑作空白，消除氣泡后照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄V A），在540 nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程A=-0.0751+0.0195X，相關系數r=0.9995。結果表明，人參皂苷Re濃度在6.65～66.55 μg/mL范圍內，吸光度與人參皂苷Re濃度呈良好的線性關系。

2.4 專屬性試驗：取按處方比例除去“人參果皂苷粉”并采用相同工藝制成的陰性樣品，精密吸取100 μL，按線性關系考察項下方法處理顯色，以試劑作空白，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄V A），在540 nm的波長處測定吸光度，結果顯示，除去“人參果皂苷粉”的陰性樣品在540 nm波長處的吸光度為樣品吸光度的0.5%，＜5%，故認為本品空白輔料無干擾。

2.5 精密度試驗

2.5.1 重復性試驗：精密吸取振源口服液(無糖型)樣品100 μL，共6份，分別測定，計算總皂苷的含量，結果平均含量為1.97 mg/mL，RSD=1.44%，表明重復性良好。

2.5.2 顯色重現性試驗：精密吸取振源口服液(無糖型)樣品100 μL，依法處理顯色，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄V A），在540 nm的波長處測定吸光度，重復測定6次，結果平均吸光度為0.612，RSD=0.13%，表明該方法精密度良好。

2.6 穩定性試驗：精密吸取無糖型振源口服液樣品100 μL，依法處理顯色，分別于放置0，10，20，30，40，50 min時，在540 nm的波長處測定吸光度。結果平均吸光度為0.605，RSD=0.13%，表明本方法50 min內能保持良好的穩定性。

2.7 回收率試驗：取重復性試驗同批次樣品（總皂苷含量為1.97 mg/mL），精密量取50 μL，共計6份，再分別精密加入人參皂苷Re對照品溶液（人參皂苷Re濃度為2.01 mg/mL，）50 μL，按[含量測定]項下方法操作，測定其中“人參果總皂苷”的含量，計算回收率，結果平均回收率為96.92%，RSD=1.79%，測定結果見表1。

表1 人參皂苷Re加樣回收率測定結果

2.8 樣品含量測定及含量限度的確定：精密吸取本品100 μL，照標準曲線的制備項下的方法，自“置于具塞試管中”起依法操作，測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的量。共測定了10批振源口服液(無糖型)中人參果總皂苷的含量，結果見表2。

表2 樣品的測定結果

根據上述測定結果，10批樣品中人參總皂苷的平均含量為1.70 mg/mL，且均高于1.30 mg/mL。為有效保證制劑質量，同時考慮原料藥產地、加工及生產等因素的影響，限定本品每1 mL含人參總皂苷以人參皂苷Re(C48H82O18)計，不得少于1.30 mg。

3 討 論

“振源口服液(無糖型)”將原處方中的輔料蜂蜜改成了可以為廣大糖尿病等胰島素功能障礙人群服用的木糖醇，擴大了產品的應用范圍；原料藥人參果總皂苷是在人參果中提取的，避免了人參果實的浪費，提高了人參的利用率，具有一定的經濟意義和藥學研究意義。

本文選擇人參皂苷Re為對照品是因為它是人參果總皂苷的主要成分[1]，具有良好的穩定性，通過現代藥理學研究具備多種藥理活性，可作為含量測定的指標成分[2,3]。

1%香草醛-高氯酸需現用現配，注意避光操作，應嚴格控制在香草醛-高氯酸加熱溫度及顯色反應時間，顯色后迅速放入冰水冷卻，以保證實驗的靈敏度。

本測定方法簡便快捷，穩定性及重現性好，適用于振源口服液（無糖型）中人參總皂苷的含量測定及質量控制。

[1] 趙澍.人參果成分的研究[J].中醫雜志,1979,20(12):50-53.

[2] 陳發奎.常用中草藥有效成分含量測定[M].北京:人民衛生出版社,1997.

[3] 苗明三.現代實用中藥質量控制技術[M].北京:人民衛生出版社, 2000.

Determination of Total Ginsenosides in Free-sugar Zhenyuan Oral Liquid by Ultraviolet-visible Spectrophotometry

PANG Wei1, ZHAO Hong-feng2, MI Hong2, YUE Hao1, QU Xin-yao2, GUO Yu-tong1
(1 Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China; 2 Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130012, China)

ObjevtiveTo determine the content of total Ginsenosides in free-sugar Zhenyuan oral liquid by ultraviolet-visible spectrophotometry.MethodGinsenoside Re was selected as control article, coloration was used with 1% vanillin-perchloric acid and 77% sulfuric acid, the content of total Ginsenosides in freesugar Zhenyuan oral liquid was determined at 540 nm by UV.ResultThe calibration curve was linear over the range of 6.65-66.55 μg/mL with the correlation of 0.9995, and the linear regression equation was A=-0.0751+0.0195X, the average recovery of Ginsenoside Re was 96.92% with RSD of 1.79% (n=6).ConclusionThe method was simple, reliable and stable, so it is suitable for content determination and quality control of total Ginsenosides in free-sugar Zhenyuan oral liquid.

Ultraviolet-visible spectrophotometry; Free-sugar Zhenyuan oral liquid; Ginsenoside Re; Total Ginsenosides; Content assay

R282.710.3

B

1671-8194（2014）29-0059-02

吉林省科技廳技術成果轉化重大項目（20115090）