儀器法血小板計數假性減少的相關性分析及對策

王宜海

(棗莊市立醫院檢驗科，山東 棗莊 277102)

儀器法血小板計數假性減少的相關性分析及對策

王宜海

(棗莊市立醫院檢驗科，山東 棗莊 277102)

目的探討儀器法檢測血小板減少患者，血小板計數數據的準確性、影響因素和解決方法。方法對530例儀器法血小板減少患者標本，進行血涂片染色鏡檢分析，并手工計數復檢。結果530例標本其中有55例假性血小板減少，原因分為采集因素、EDTA依賴因數、大血小板因素、小血小板因素、其他因素。475例真性血小板減少。結論對于儀器法血小板減少或儀器提示異常的患者標本需經血涂片觀察和人工復檢方能發布結果，以提高血小板計數準確性，減少誤診。

儀器法；血小板計數；假性減少；對策

血細胞分析儀測定血小板，具有快速、方便、重復性好、準確性高、能同時提供血小板多項指標，是目前常規篩檢血小板計數主要方法。但是，血小板計數結果有時會出現假性減少，所致原因復雜，易造成誤診、誤治，應引起醫務工作者廣泛關注。現將我院儀器法檢測530例血小板減少患者，進行涂片及手工計數分析情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料：隨機選取2012年3月至2013年2月期間儀器法檢測PLT＜100×109/L住院患者530例標本。男229例，女301例，年齡范圍8～89歲。其中血液科142例，骨科43例，呼吸科62例，心血管51例，婦科71例，腫瘤科72例，兒科18例、神經科35例、其他科室36例。

1.2 儀器與試劑：xE-2100全自動血細胞分析儀，原裝配套試劑，校準物和質控物由日本sysmex公司提供。Olympus雙筒顯微鏡購自日本奧林巴斯光學工業株式會社，用于血涂片顯微鏡檢查。草酸銨稀釋液（按照第3版《全國臨床檢驗操作規程》[1]配制）；劉氏染色液（鄭州貝索醫用儀器有限公司）

1.3 采血管：①A管：EDTA-K2抗凝管；②B管：109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝管。

1.4 方法

1.4.1 人員培訓：根據《全國臨床檢驗操作規程》[1]《血小板參考方法》[2]中制定的血涂片檢測操作程序（SOP），對參加實驗的人員進行培訓，研討可能出現的問題和解決的措施。

1.4.2 對530例血小板減少的血常規標本（EDTA-K2抗凝），同時進行外周血片復檢，相符合的標本475例；剩余55例為假性血小板減少標本，作為實驗樣本。其測定值作為第一次測定值列入結果統計。

1.4.3 對55例假性血小板減少患者重新采血，分別注入A管和B管，各2 mL，充分混勻，室溫放置；同時取未抗凝血20 μL加入含0.38 mL草酸銨稀釋液的試管中，嚴格按照第3版《全國臨床檢驗操作規程》[1]進行人工顯微鏡血小板計數，每個標本由經驗豐富的檢驗師計數2次，誤差＜10%，取2次均值報告，誤差＞10%需做第3次計數，取2次相近結果的均值作為實驗數據；同時將A管和B管的抗凝血，分別制備血涂片，經劉氏染色，顯微鏡下觀察血小板數量（正常可見8～15個/油鏡視野），根據A、B兩管外周血片中有無聚集的血小板、血小板衛星現象、血小板大小分布以及血標本有無黃疸脂血等，將55例假性血小板減少標本分為5組：①采血不當因素：A管和B管抗凝血血片中均無凝集血小板、血小板散在分布、大小較為均一，標本無黃疽、脂血等異常，而重抽血前的第一次抗凝血片中有聚集的血小板；②EDTA依賴性凝集：A管血片中有大量血小板聚集，一般為8～20個血小板聚集成堆，而與之相對應的B管血涂片則無聚集血小板，血小板呈散在分布；③大血小板組：A管和B管抗凝血片中均無凝集的血小板、以大血小板為主；④小血小板組：A管和B管抗凝血片中均無凝集的血小板、以小血小板為主；⑤其他因素：A管和B管抗凝血片中均無凝集的血小板，標本有黃疸、脂血等異常變化。EDTA依賴性凝集組，對B管血進行上機檢測，其余組對A管血進行上機檢測，且檢測的結果作為第二次測定值進行統計。

表1 55例重新抽血前后2次儀器檢測血小板值與人工顯微鏡計數值

表1 55例重新抽血前后2次儀器檢測血小板值與人工顯微鏡計數值

備注：**和*與△比較：P＜0.01；**與*比較：P＞0.05。▲和#與##比較：P＜0.01；▲與#比較：P＞0.05

1.5 統計學分析：數據處理應用SPSSl2.0軟件進行數據分析，數據以均數±標準差表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

55例重新抽血前后2次儀器檢測血小板值與人工顯微鏡計數值見表1。

3 討 論

3.1 采血不當因素是造成假性血小板減少的最常見的因素，占49.09%。原因：①采血技術不熟練：血流不暢可導致血小板破壞；且會因多次穿刺組織損傷，組織凝血因子混入血標本中產生肉眼看不見的小凝塊[3]。②抽血后的處理不當：沒能充分的顛倒混勻，抗凝劑沒有充分發揮抗凝作用，導致血小板凝集，造成血小板假性減少[4]。因此檢驗人員或護士應掌握采集標本注意事項，充分認識實驗分析前質量控制的重要性，增強責任心，提高采血技術。

3.2 EDTA抗凝劑依賴因素占29.09%。①EDTA依賴性血小板減少癥（EDP）是由于EDTA鹽抗凝血中EDTA誘導血小板中的特殊蛋白而使血小板發生凝集，在全自動血細胞計數儀上檢測時，血小板計數發生假性減少的現象。原因：a.EDTA-K2可使血液發生免疫介導，產生冷抗血小板抗體，使血小板互相發生凝集現象，這種EDTA依賴的冷抗血小板自身抗體還能直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同時這種與血小板結合后的自身抗Fc端又可與淋巴細胞或單核細胞膜上Fc受體結合，出現衛星現象。b.EDTA-K2可導致血小板活化，使血小板形態發生改變，導致血小板膜表面某種隱匿性抗原表位發生構象改變，這些活化的血小板與血漿中的自身抗體結合后，激活了細胞膜中的某些能活化血小板纖維蛋白的原受體的活性物質，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團。這兩種原因在表象上都表現為血小板的體積增大。由于EDTA-K2可引起血小板的聚集或發生衛星現象，分析儀不能識別凝集的血小板，導致血小板計數偏低；當血小板聚集成堆與白細胞體積接近時，可被分析儀當作白細胞進行計數，這就造成了血小板假性減少和和白細胞假性增多。這種假性血小板減少會導致臨床無故增加其他不必要的輔助檢查，甚至引起臨床誤診、誤治。因此，這種EDTA依賴性血小板減少癥應該受到廣泛重視。解決這種EDTA所致的假性血小板減少的辦法是采用不含抗凝劑的稀釋液或利用含枸櫞酸鈉抗凝劑的真空采血管采集標本，避免這種血小板凝集而導致的血小板假性減少。②與白細胞周圍的血小板衛星現象有關的假性血小板減少。血小板衛星現象是發生在EDTA抗凝血中的一種體外現象，這種現象是血小板黏附、圍繞于中性粒細胞的現象。當血小板衛星現象發生時，血小板計數有中度減少[（50～100）×109/L]，導致在某些病例中血小板假性減少[5]。在EDTA的血樣本中，除成熟中性多核細胞周圍的玫瑰狀凝集物外，還可見到成熟中性多核細胞和單核細胞周圍的血小板衛星現象。

3.3 血小板體積因素占18.18%。血細胞分析儀檢測血小板的原理為電阻抗原理。其進行血小板計數時，血小板閾值是設定在2～30 fL范圍內，而正常的血小板多集中在3～20 fL范圍[6]。因此，當血小板體積＞30 fL時，血小板會被儀器誤認為小紅細胞而不納入血小板計數范圍，而當作小紅細胞計數，引起血小板假性減少；當血小板體積＜2 fL時，儀器會把它當作實驗噪音不進行計數，從而使血小板計數偏低，出現假性血小板減少現象[7]。對于此類情況必須進行外周血片染色鏡檢和手工顯微鏡計數血小板，保證檢查結果的準確性。

3.4 其他原因所致的假性血小板減少占3.64%。高膽固醇和高三酰甘油血癥時，低密度脂蛋白和載脂蛋白可促進血液高凝狀態，血小板凝集性增高，部分患者可引起假性血小板減少；糖尿病、高血壓患者血管內皮損傷，致血小板容易凝集不容易解散，常導致機測血小板偏低[8]。另外冷凝集性、高鎂血癥、藥物誘發的假性血小板減少偶有發生，也應引起重視。

總之，造成假性血小板減少癥的原因復雜，如遇有靜脈抗凝血檢測血小板顯著減少，而臨床檢查又無淤點、淤斑等血小板減少癥的臨床表現時，即應外周血片染色鏡檢，并用人工血小板計數作對照，以獲得準確的實驗數據，力求為臨床醫師和患者提供最準確、最可靠的信息，以避免假性血小板減少所致的誤診、誤治。

[1] 葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].3版.南京:東南大學出版社,2006.

[2] 華人民共和國衛生部.中華人民共和國衛生部行業標準:白細胞分類計數參考方法[M].北京:人民衛生出版社,2005.

[3] 魏青顱克曼血細胞分析儀檢測假性血小板減少的原因分析[J].中華臨床醫學志,2007,13(12):1751.

[4] 魯家才,李明.血細胞分析時假性血小板減少原因分析[J].國外醫學臨床生物化學與檢驗學分冊,2004,25(3):284-285.

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[6] 巫小莉,周小棉,鄧穗德,等.EDTA抗凝劑依賴性假性血小板減少癥血小板計數的研究[J].實用醫學雜志,2007,23(4):578-580.

[7] Zandeeki M,Genevieve F,Gerard J,et a1.Spurious counts and spurious results on haematology analyserst areview.Partl:platelets[J]. Int J Lab Hematol,2007,29(1):4-20.

[8] 魯家才,享明.血細胞分析時假性血小板減少原因分析[J].國外醫學臨床生物化學與檢驗學分冊,2004,25(1):284-285.

Analysis and Countermeasures of Reducing Platelet Count by Pseudo Correlation Instrument

WANG Yi-hai
(Department of Clinical Laboratory, Zaozhuang Municipal Hospital, Zaozhuang 277102, China)

ObjectiveTo explore the method of detection instrument in patients with thrombocytopenia, platelet count data accuracy, influence factors and solving methods.Methods530 cases of blood platelet decrease patient specimens, were stained blood smear microscopy analysis, and manual counting inspection.Results530 cases of specimens from which there were 55 cases of thrombocytopenia, reasons for acquisition factors, EDTA dependent factor, platelet factor, small platelet factors, other factors. 475 cases of true thrombocytopenia.ConclusionThe blood platelet decrease or instrument tips in patients with abnormal blood smear specimens were observed and artificial re-inspection can publish the results, in order to improve the accuracy of platelet count, reduce misdiagnosis.

Instrument method; Platelet count; The pseudo reduced; Countermeasure

R446.11

B

1671-8194（2014）29-0048-02