烏苯美司—殼聚糖納米微粒的性能研究

魏譚軍　董德剛

【摘要】利用低分散度水溶性殼聚糖的生物降解性和生物相容性特點，以離子交聯法制備烏苯美司-殼聚糖納米微粒（Uben-CS-NP），并研究其形態、粒徑、包封率、載藥量及體外釋藥行為。所制備的Uben-CS-NP形態圓整規則，分散性好，粒徑為200-360nm，Zeta電勢為+35.3mV，包封率為68.3%，載藥量為29.6%，體外釋藥行為符合Higuchi方程，緩釋作用明顯。

【關鍵詞】烏苯美司；殼聚糖；納米微粒；緩釋

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.04.023文章編號：1004-7484（2014）-04-1827-02烏苯美司是日本學者梅澤賓夫于1976年從橄欖網狀鏈霉菌培養液中分離得到的低分子二肽化合物，為一種有效的免疫調節劑[1]。近年來的體內外實驗及臨床驗證結果表明，烏苯美司與其他化療藥物聯合使用，能顯著抑制各種惡性腫瘤如白血病、肺癌、胃癌等癌細胞[2]的增殖。但是現用的臨床劑型如片劑和膠囊劑，具有靶向性差、生物利用度低、價格高等缺陷，直接影響其治療效果。本文通過對Uben-CS-NP新型給藥系統進行質量評價，以期為進一步該新型給藥系統的藥效學研究奠定基礎。1材料與儀器

1.1主要材料烏苯美司；低分散度水溶性殼聚糖；其他試劑均為分析純。

1.2主要儀器UV1102型紫外可見分光光度計；低溫冷凍高速臺式離心機；PHSJ-3F型pH計；JY92-Ⅱ超聲波細胞粉碎機；激光納米粒度測定儀；掃描電子顯微鏡。2方法

2.1離子交聯法制備烏苯美司-殼聚糖納米微粒取一定量的烏苯美司加入含有1%冰醋酸的2.5mg/mL殼聚糖溶液中混勻，用0.45μm微孔濾膜過濾；將1.5mg/mLTPP溶液用0.22μm微孔濾膜過濾。取上述殼聚糖溶液20mL與TPP溶液4mL混合均勻后，用1mol/LNaOH溶液調節pH為6.0，然后進行超聲震蕩即得烏苯美司-殼聚糖納米微粒。

2.2烏苯美司-殼聚糖納米微粒的質量評價

2.2.1納米微粒的形態觀察取Uben-CS-NP粘附于蓋玻片上，再用雙面膠帶附著固定后真空噴金，置于掃描電鏡下觀察。

2.2.2納米微粒粒徑的測定取空白殼聚糖納米微粒懸浮液和Uben-CS-NP懸浮液置于樣品池內，加去離子水稀釋到合適的濃度后用激光粒度分析儀測定（25℃）。

2.2.3納米微粒Zeta電勢的測定取Uben-CS-NP懸浮液置于樣品池內，用激光粒度分析儀測定（25℃）。

2.2.4pH的測定取Uben-CS-NP懸浮液適量，用pH計測定其pH值。

2.2.5納米微粒包封率和載藥量的測定取Uben-CS-NP懸浮液1.0ml，超速離心30min后（12000rpm）取上清液200ul，稀釋，定容，測定OD值，計算上清液中烏苯美司含量，按照《微囊、微球與脂質體制劑指導原則》來計算Uben-CS-NP的包封率和載藥量。

包封率%=[（Wt-Wa）/Wt]×100

載藥量%=[（Wt-Wa）/W總]×100

其中Wt：初始投藥量；Wa：上清液中含藥量；W總：納米微粒總質量。

2.2.6納米微粒體外釋藥性實驗（動態膜透析法）分別精密量取一定體積的烏苯美司原料藥、烏苯美司膠囊和Uben-CS-NP懸浮液，置于處理過的透析袋內，封口后分別投入到裝有200ml緩沖溶液PBS（pH6.8）的錐形瓶中，置恒溫搖床于37℃攪拌（100r/min），按一定時間間隔分別于0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24h取樣5mL，并同時補充同樣體積的PBS（pH6.8）緩沖溶液。以PBS（pH6.8）緩沖溶液為對照，樣品在最大吸收波長216nm處測定OD值，計算累積釋放率，以累積釋放率對時間作圖。3結果與討論

3.1離子交聯法制備烏苯美司-殼聚糖納米微粒離子交聯法制備Uben-CS-NP的過程簡單，作用時間短，不使用有機溶劑，得到的Uben-CS-NP形態圓整規則，分散性好，分布均勻，且結果重現性較好。

3.2烏苯美司-殼聚糖納米微粒的質量評價

3.2.1納米微粒的形態觀察采用掃描電鏡觀察納米微粒的形態，照片截圖見圖1，Uben-CS-NP為類圓形的球體，可靠性和直觀性良好。

3.2.2納米微粒粒徑的測定經激光納米粒度分析儀測定，Uben-CS-NP分散性好，比較集中，基本位于200-360nm，平均粒徑為261.6nm（如圖2）。

3.2.3納米微粒Zeta電勢的測定經激光納米粒度分析儀測定，Uben-CS-NP表面帶正電荷，測定值均大于30mV，平均為35.3mV，穩定性較好（Zeta電勢越高，Uben-CS-NP越穩定）。

3.2.4pH的測定經PHSJ-3F型pH計測定，Uben-CS-NP懸浮液pH值在6.0左右。介質的酸堿度可能影響藥物的穩定性或制劑的應用（如刺激性）等。

3.2.5納米微粒包封率和載藥量的測定Uben-CS-NP包封率為68.3%，載藥量為29.6%。包封率和載藥量越高，則說明懸浮液中游離的藥物量越少，藥物的損失越小。

3.2.6納米微粒體外釋藥性實驗由表1可以看出，與烏苯美司和市售烏苯美司膠囊比較，Uben-CS-NP釋藥分為突釋和緩釋兩個階段，突釋階段納米微粒累積釋藥量在1h內達29.35%，之后緩慢釋放，第12h累積釋藥量約43.28%，到24h時累積釋藥量約為51.49%，體外釋藥行為符合Higuchi方程，具有明顯的緩釋作用。烏苯美司原料藥在釋放介質中釋放迅速，3h累積釋藥量高達94.21%；烏苯美司膠囊的釋藥速度介于原料藥和Uben-CS-NP之間。

表1Uben-CS-NP、烏苯美司膠囊及烏苯美司體外釋藥結果

時間（h）1Uben-CS-NP（%）1烏苯美司膠囊（%）1烏苯美司（%）0.2516.7917.3119.060.5115.62119.83124.540.75124.08128.49132.871129.35135.67139.361.511150.582133.19147.45164.142.511178.63311194.214136.72158.736138.54166.468140.03173.9210141.66179.7712143.28183.3424151.49191.55一般情況下，納米微粒的體外釋藥機制主要有以下幾種，吸附或連接于納米微粒表面的藥物與微粒脫離；包裹在納米微粒內部的藥物不斷向外擴散；伴隨著納米微粒本身不斷地溶蝕和降解釋放出藥物；擴散與溶蝕作用同時發生。而對本研究Uben-CS-NP的體外釋藥機制進行推測：納米微粒表面吸附一定量的藥物，容易從表面脫落造成藥物在1h內突釋；之后緩慢釋放，可能是由于藥用輔料低分散度水溶性殼聚糖的降解和溶蝕，導致包裹在殼聚糖網狀結構中的烏苯美司釋放出來。Uben-CS-NP具體的釋藥機制還有待于進一步研究。4結論

通過離子交聯法制備的Uben-CS-NP形態圓整規則，分散性好，粒徑范圍在200-360nm，Zeta電勢為+35.3mV，有較高的包封率和載藥量，其釋藥行為符合Higuchi方程，具有明顯的緩釋作用，從而可提高烏苯美司藥物的生物利用度與療效，應用前景廣闊。參考文獻

[1]盧曉男.烏苯美司誘導絨癌JAR細胞凋亡的研究[D].浙江大學，2001.

[2]何靜松，林茂芳，錢文斌.烏苯美司對人白血病細胞生長抑制及其機制探討[J].浙江大學學報，2002，31（4）：260-264.