HPLC-RID法測定葡甲胺原料藥的含量

張春林，張莉（1.重慶福安藥業集團禮邦藥物開發有限公司，重慶 40111；.重慶華邦制藥有限公司，重慶 40111）

葡甲胺（Meglumine）[1-3]為白色至淡黃色結晶性粉末，無臭或微臭，由于其可與一些藥物生成鹽從而增加藥物的溶解度，故作為助溶劑被廣泛應用于注射用制劑中。本品常用量下安全無毒，目前已被收載于《英國藥典》（BP）、《日本藥典》（JP）、《美國藥典》（USP）及美國FDA《非活性組分指南》（注射劑）中，近年來在我國也已得到國家食品藥品監督管理總局認可用于注射劑中。2010年版《中國藥典》二部[4]采用滴定法測定其含量。為建立一種更簡單、快速、準確測定葡甲胺含量的方法，筆者查閱相關文獻[5-8]并對信息進行整理，根據葡甲胺的性質及各種分析方法的特點建立了測定其含量的高效液相色譜-示差折光檢測（HPLC-RID）法，并進行了方法學研究，現報道如下。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AD HPLC儀（包括自動進樣器、四元輸液泵、柱溫箱）、RID-10A示差折光檢測器（日本島津公司）。

1.2 藥品與試劑

葡甲胺對照品（美國藥典委員會，批號:FOD385，含量:100.0%）；葡甲胺原料藥（西安力邦制藥有限公司，批號:120702B、120905B、130305B，純度:99.6%、99.7%、99.5%）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:月旭Ultimate?AQ-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相:水（用磷酸調節pH 2.5）-甲醇（95∶5），流速:0.5 ml/min；示差折光檢測器池溫為40℃；柱溫:35℃；進樣量:20μl。

2.2 對照品溶液的配制

精密稱取葡甲胺對照品75 mg，置于25 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的配制

精密稱定葡甲胺樣品75 mg，置于25 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 測定方法

取對照品溶液和供試品溶液各20μl進樣，按上述色譜條件進行色譜分析，記錄葡甲胺的色譜峰面積，按外標法以峰面積計算葡甲胺的含量。

2.5 空白試驗及系統適用性試驗

2.5.1 空白試驗。取流動相作為空白溶液，按上述色譜條件進樣分析，色譜圖見圖1A。

2.5.2 系統適用性試驗。取對照品溶液進樣分析，結果葡甲胺的保留時間為7.224 min，理論板數為7678，對稱因子為1.019，色譜圖見圖1B。

2.6 線性關系試驗

圖1 高效液相色譜圖A.空白溶液；B.對照品；C.供試品；1.葡甲胺Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank solution；B.substance control；C.test sample；1.meglumine

精密稱定葡甲胺對照品1.5214 g，用流動相溶解并稀釋至50 ml，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取貯備液5、6、8、10、12、15 ml分別用流動相稀釋定容至100 ml，得葡甲胺質量濃度分別為1.52、1.83、2.43、3.04、3.65、4.56 mg/ml。測定對照品溶液主峰峰面積，以峰面積為縱坐標（y）、質量濃度為橫坐標（x）進行線性回歸，得葡甲胺線性方程為:y＝390794x+2393.1（r＝0.9999）。結果表明，葡甲胺檢測質量濃度線性范圍為1.52～4.56 mg/ml。

2.7 溶液的穩定性試驗

取3 mg/ml的供試品溶液1份，分別于0、2、4、8、12、24 h時間點測定葡甲胺的峰面積，結果在室溫條件下24 h內峰面積的RSD＝0.27%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8 重復性試驗

精密稱取葡甲胺樣品6份，配制成供試品溶液，分別進樣20μl，測定葡甲胺的含量，結果葡甲胺含量的RSD＝0.1%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.9 精密度試驗

取已配制好的對照品溶液1份，連續進樣6次，測得葡甲胺的峰面積的RSD＝0.14%（n＝6），表明方法精密度好。

2.10 回收率試驗

精密稱取已知含量的同一批葡甲胺樣品（批號:120702B）適量，置于25 ml量瓶中，共9份；再分別精密加入葡甲胺對照品（約60、75、90 mg各3份），加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻作為回收率供試品溶液，按上述方法進行測定，計算加樣回收率，試驗結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝3）Tab 1 Result of recovery tests（n＝3）

表1結果顯示，葡甲胺的平均回收率為99.7%，RSD＝0.63%（n＝3），表明方法的準確度好。

2.11 樣品含量測定

按“2.4”項下方法測定多批葡甲胺樣品的含量，同時與《中國藥典》方法測定結果進行比較，結果見表2；供試品溶液（批號:120720B）代表性圖譜見圖1C。

表2 兩種方法測定樣品中葡甲胺含量的比較（%）Tab 2 Comparison of the contents of meglumine in samples determined by 2 methods（%）

3 討論

3.1 檢測器的選擇

葡甲胺分子結構中不含C＝C等發色基團，除紫外末端外基本無吸收，所以決定采用通用型檢測器即RID對葡甲胺進行含量測定。

3.2 流動相及色譜柱的選擇

因葡甲胺分子結構中含有5個醇羥基和1個氨基，分子極性很強，同時由于葡甲胺為堿性藥物，在常用反相色譜柱上保留較差，因此筆者通過多次嘗試及條件篩選，決定采用以水（用磷酸調節pH 2.5）-甲醇（95∶5）為流動相；以月旭Ultimate?AQ-C18為色譜柱對葡甲胺進行含量測定，結果表明分析效果理想。

采用本文所述方法測定多批葡甲胺樣品，測定結果與藥典方法一致，但采用本法可省去滴定法的煩瑣操作。同時，本方法也可用于葡甲胺制劑及部分藥物中功能性輔料葡甲胺含量的測定。

[1]（美）舍斯基，（英）韋勒.藥用輔料手冊[M].鄭俊民，譯.4版.北京:化學工業出版社，2004:440-442.

[2]羅明生，高天惠，宋民憲.中國藥用輔料[M].北京:化學工業出版社，2006:705-706.

[3]侯惠民，王浩，張光杰.藥用輔料應用技術[M].2版.北京:中國醫藥科技出版社，2002:293-294.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:926.

[5]岳云飛，張麗英，劉永成.HPLC法測定葡甲胺中的有關物質[J].中國藥品標準，2011，12（3）:184.

[6]劉娜，張津楓，高瑞昶.葡萄糖與甲胺還原胺化產物的高效液相色譜分析[J].光譜實驗室，2006，23（1）:35.

[7]曹玲，王亞超，馮有龍，等.茵梔黃注射液中助溶劑葡甲胺2種含量測定方法比較[J].藥物分析雜志，2011，31（6）:1126.

[8]李瑞萍，黃駿雄.親水作用色譜及其在堿性藥物分析中的應用[J].化學進展，2006，18（11）:1508.