ELISA定性檢測HBsAg灰區和相關實驗室結果分析

李 秀，王紅麗，馬 超，田永芳，劉小雙

ELISA定性檢測HBsAg灰區和相關實驗室結果分析

李 秀，王紅麗，馬 超，田永芳，劉小雙

（新疆維吾爾自治區人民醫院檢驗科，新疆烏魯木齊830001）

實際工作中，由于HBsAg濃度低或基因表達變異，出現乙肝表面抗原灰區。本實驗正是運用酶免法定性檢測HBsAg，同時結合化學發光定量法及核酸DNA檢測相關結果，進行對比分析，從而劃分灰區范圍，準確檢出乙肝表面抗原灰區血清，發出正確報告單。

1 材料與方法

1．1 標本來源

我院2011年3月—2012年3月門診、住院病人篩選出弱陽性標本（0．05＜A＜0．5）48例4種感染模式患者血清。其中HBsAg＋、抗HBeAg＋和抗HBcAg＋感染者HBsAg A值0．1－0．5間27例和0．5－＞1．0（弱陽性報出）13例；HBsAg＋、HBeAg＋和抗HBcAg＋感染者HBsAg A值0．1－0．5間3例和0．5－＞1．0（弱陽性報出）5例。見表1。

1．2 儀器及試劑

1．2．1 ELISA法采用的是廈門英科新創提供的乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒及科華公司立可讀乙肝檢測試劑盒（用于表面抗原雙篩）；洗滌液為英科新創原裝洗滌液；洗板機為Rayto RT－3100全自動洗板機及KHB－Wellscan K3酶標儀。

1．2．2 羅氏電化學發光乙肝檢測試劑盒及羅氏COBASE601電化學發光分析儀。

1．2．3 Roche Light Cycler 480型全自動熒光實時定量PCR擴增儀及深圳凱杰公司乙肝DNA檢測試劑。

1．3 資料統計處理

資料由LIS數據庫整理后，EXCEL軟件包做統計學處理，統計學方法用百分比計算。

2 結果

表1 低濃度HBsAg病人乙肝定量、定性檢測結果

從表中所見，HBsAg＋、抗HBeAg＋和抗HB－cAg＋感染模式中27例（56．2%）HBsAg弱陽性病人Els法定性所測A值是0．1－0．5間，用Ecl法檢測HBsAg為1－10COI（＞1COI為陽性），DNA拷貝均≤103IU／ml。13例（27．1%）HBsAg＋、抗HBeAg＋和抗HBcAg＋感染模式HBsAg弱陽性病人，Els法定性初篩用英科新創乙肝表面檢測試劑盒，復篩用上海科華乙肝表面檢測試劑盒，A值結果是弱陽性，一個是陽性，在0．5－＞1．0間，仍按弱陽性報出，其Ecl法檢測值為10－100COI，核酸DNA≤103IU／ml。5例（10．4%）HBsAg＋、HBeAg＋和抗HBcAg＋感染模式的病人，HBsAg Els法A值0．5－＞1．0，其Ecl法HBsAg＞100COI或更高；HBeAg＞500COI或更高，核酸≥103IU／ml。3例（6．2%）HBsAg＋、HBeAg＋和抗HBcAg＋感染模式的病人，HBsAg Els法A值0．1－0．5間，其Ecl法在1－10COI間，DNA≤103IU／ml。見表1。

3 討論

由此，本實驗認為，若Els法HBsAg A值在0．1－0．5or 0．5－＞1．0間，Ecl法HBsAg定量值在1－100COI，DNA≤103IU／ml，可視為乙肝灰區范圍。

Els法由于方法學原因，受不同試劑、標本質量、操作精細程度等多種因素影響，易造成假陰性或假陽性［1］。而化學發光法靈敏度高，尤其對低濃度HBsAg血清，重復性好，在完全密閉反應系統中進行，可消除試劑批間及批內差異［2］。而DNA檢測水平升高取決于HBeAg陽性而不是HBsAg陽性。

在運用Els法定性檢測乙肝表面抗原灰區時，通常需重復試驗并且使用兩種以上不同廠家試劑，最好進一步用化學發光定量檢測，對比分析結果，并結合DNA核酸表達水平，只有這樣才能準確無誤發出報告單，降低漏報誤報發生。

［1］李美忠，姜慶波．化學發光微粒子免疫法測定乙型肝炎表面抗原的臨床應用評價［J］．實用醫技雜志，2010，17（4）：343．

［2］劉秀琴，傅杭洲，張曉俐等．化學發光微粒子免疫分析法與酶聯免疫法測定乙肝表面抗原的比較［J］．海南醫學，2010，21（8）：104．

2013－01－24）

1007－4287（2014）02－0290－02