復方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量測定

賈燕花，劉皈陽，馬建麗，王曉青，李翔

(解放軍總醫院第一附屬醫院藥劑藥理科，北京 100048)

復方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量測定

賈燕花，劉皈陽，馬建麗，王曉青，李翔

(解放軍總醫院第一附屬醫院藥劑藥理科，北京 100048)

目的 建立測定復方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量的高效液相色譜法。方法用Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱;流動相為甲醇-水(60∶40);流速為1.0 mL·min-1;檢測波長為240 nm。結果醋酸曲安奈德在12～32 μg·mL-1的濃度范圍內呈現良好的線性關系,相關系數為0.999 9;日內精密度為0.33%(n=6);平均回收率為99.8%(n=9)。結論該方法快捷方便,結果可靠,可作為復方醋酸曲安奈德搽劑的質量控制標準。

曲安奈德,醋酸；搽劑；色譜法,高效液相；含量測定

復方醋酸曲安奈德搽劑由解放軍總醫院第一附屬醫院制備,為無色澄明的液體,具有消炎、抗免疫反應、止癢和鎮痛的作用,主要用于神經性皮炎、脂溢性皮炎、濕疹等皮膚病,其主要成分為醋酸曲安奈德和鹽酸普魯卡因。文獻報道該制劑中醋酸曲安奈德含量測定的方法有分光光度法[1];同時醋酸曲安奈德為單一制劑時,測定的方法有高效液相色譜法[2-3]。筆者未見關于高效液相色譜法測定醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量的報道。參考文獻[4-7],筆者在本實驗中采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定復方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量,方法簡便、快速,結果滿意,可用于復方醋酸曲安奈德搽劑的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(VWD檢測器,美國安捷倫科技有限公司),HITACHI U3000型紫外分光光度儀,AE204型十萬分之一電子分析天平(瑞士梅特勒托利多科技公司)。

1.2 試劑 對照品醋酸曲安奈德(批號:100125-201105)和曲安奈德(批號:100055-201103)由中國食品藥品檢定研究院提供,醋酸曲安奈德含量97.8%;復方醋酸曲安奈德搽劑由解放軍總醫院第一附屬醫院提供[批準文號:總制字(2001)F02001,批號:130109, 130130,130218]。實驗用水為雙蒸水,甲醇為色譜純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備 醋酸曲安奈德對照品溶液:精密稱取醋酸曲安奈德對照品50 mg,置50 mL量瓶,加甲醇定容,作為對照品儲備液A;精密量取1 mL,置50 mL量瓶,加流動相定容,即得醋酸曲安奈德對照品溶液。

曲安奈德對照品溶液:精密稱取曲安奈德對照品50 mg,置50 mL量瓶,加甲醇定容,作為對照品儲備液B;精密量取1 mL,置50 mL量瓶,加流動相定容,即得曲安奈德對照品溶液。

系統適用性溶液:精密量取對照品儲備液A和對照品儲備液B各0.5 mL,置50 mL量瓶,加流動相定容,即得混合對照品溶液。

供試品溶液:精密量取復方醋酸曲安奈德搽劑1 mL,轉入50 mL量瓶,加流動相稀釋到刻度,搖勻即可。

陰性樣品溶液:按照處方配置不加醋酸曲安奈德的空白對照。

2.2 色譜條件 色譜柱:Welch Materials Ultimate XBC8(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為甲醇-水(60∶40),流速1.0 mL·min-1,檢測波長240 nm,進樣量20 μL。

2.3 系統適用性實驗與專屬性實驗 在上述色譜條件下,取對照品溶液、供試品溶液和系統適用性溶液各20 μL,分別進樣HPLC分析。制劑中醋酸曲安奈德有效分離,出峰順序為曲安奈德峰、醋酸曲安奈德峰,曲安奈德峰與醋酸曲安奈德峰的分離度＞10.0,實驗結果表明色譜峰分離度高,系統適應性良好。

取復方醋酸曲安奈德搽劑陰性樣品溶液和供試品溶液,按“2.2”項條件分別測定,記錄色譜圖,醋酸曲安奈德的保留時間為18.2 min,而陰性樣品溶液在該處無色譜保留行為,表明陰性樣品對醋酸曲安奈德色譜峰不構成干擾,本方法專屬性良好。

2.4 線性關系考察 精密量取對照品儲備液A0.6, 0.8,1.0,1.2,1.6 mL,分別置于50 mL量瓶,用流動相稀釋至刻度,搖勻;分別取上述溶液20 μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以濃度(C,μg·mL-1)為橫坐標,峰面積(A)為縱坐標進行一元線性回歸。醋酸曲安奈德的回歸方程為:A=3.648 8×104C+20.823,r= 0.999 9。結果顯示:在進樣量為20 μL時,醋酸曲安奈德進樣濃度在12～32 μg·mL-1范圍內,與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗 精密吸取對照品溶液,按照上述色譜條件連續進樣6次,每次進樣量20 μL,以醋酸曲安奈德峰面積計算RSD。計算得醋酸曲安奈德的日內精密度RSD為0.33%,表明實驗方法精密度良好。

2.6 重復性實驗 取同一批樣品(批號:130218,含量0.095%),按照“2.1”項供試品溶液配制方法,制備6份供試品溶液,按照上述色譜條件進樣分析,以醋酸曲安奈德峰面積計算RSD為1.3%。表明該實驗方法重復性良好。

2.7 穩定性實驗 取相同的供試品溶液(批號: 130218),分別在0,2,4,6,8,12 h進樣測定醋酸曲安奈德的峰面積,計算RSD。結果醋酸曲安奈德峰面積的RSD為0.20%,表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.8 加樣回收率實驗 精密量取對照品儲備液A 0.3,0.5和0.7 mL各3份,分別置50 mL量瓶,每份分別精密加入已準確測定含量的樣品0.5 mL(批號: 130218,含量:0.095%),用流動相稀釋至刻度,搖勻。按照上述色譜條件,分別量取20 μL進樣測定。結果表明,醋酸曲安奈德平均回收率為99.8%,RSD為1.24%(n=9)。本標準確定的復方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德的含量測定方法的平均回收率符合含量測定要求。見表1。

表1 醋酸曲安奈德回收率實驗結果Tab.1 Recovery of triamcinolone acetonide acetate μg

2.9 樣品含量測定 精密量取本品適量,用流動相定量稀釋制成每毫升含醋酸曲安奈德約0.02 mg溶液,搖勻,精密量取20 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另精密稱取對照品適量,加甲醇溶解并用流動相定量稀釋制成每毫升約含0.02 mg的溶液,精密量取1 mL,置50 mL量瓶,用流動相稀釋至刻度,搖勻,同法測定,按外標法以峰面積計算,即得。批號130109,130130, 130218醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量測定結果分別為0.094%,0.096%,0.095%,RSD分別為0.07%,0.23%,0.41%。

3 討論

3.1 色譜柱的選擇 筆者考察了C8色譜柱和C18色譜柱的影響。醋酸曲安奈德在C18色譜柱上28.4 min出峰,在C8色譜柱上約18.2 min出峰,同時發現C8色譜柱的色譜圖優于C18色譜柱,因此選擇C8色譜柱。

3.2 檢測波長的選擇 由測得的紫外吸收圖譜可知,醋酸曲安奈德最大吸收波長為240 nm;高效液相色譜中醋酸曲安奈德在約18.2 min出峰,而陰性對照品在該波長處無吸收,表明醋酸曲安奈德在240 nm處不受處方中其他組分的影響。因此選擇240 nm作為檢測波長。

3.3 流動相、檢測濃度以及溶劑的選擇 由于醋酸曲安奈德在水中不溶解,根據《中華人民共和國藥典》(2010年版)中醋酸曲安奈德和《日本藥典》(16版)中曲安奈德的含量測定方法,確定流動相為甲醇-水(60∶40),濃度約為0.02 mg·mL-1。同時經過實驗發現在制備樣品時先用甲醇溶解,再用流動相進一步稀釋可以獲得良好的色譜峰。

該方法快捷方便,結果可靠,可用于復方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德的含量測定。

[1] 陳新善,劉玉波,張波,等.分光光度法測定復方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德的含量[J].解放軍藥學學報, 2001,17(4):227-229.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:1122-1123.

[3] http://jpdb.nihs.go.jp/jp15e/(第16改正日本藥局方, English version):1525-1526.

[4] 王玉,王鐵杰.反相高效液相色譜法測定復方醋酸曲安奈德溶液中醋酸曲安奈德和氯霉素含量[J].中國醫院藥學雜志,2000,20(7):415-417.

[5] 郭江紅,趙亞萍,姜紅,等.RP-HPLC法測定曲安奈德氯霉素溶液的含量及有關物質[J].藥物分析雜志,2012,32 (2):323-326.

[6] 呂應年,吳怡,吳鐵.HPLC法同時測定炎菌清搽劑中水楊酸、醋酸曲安奈德和利福平的含量[J].藥物分析雜志, 2008,28(12):2062-2064.

[7] 王吉華,丁華,張迪.高效液相色譜法測定復方醋酸曲安奈德滴耳液的含量[J].中國醫藥導報,2009,6(21):48-50.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.030

Content Determination of Triamcinolone Acetonide Acetate in Compound Tri-amcinolone Acetonide Acetate Liniment

JIA Yan-hua,LIU Gui-yang,MA Jian-li,WANG Xiao-qing,LI Xiang
(Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish a HPLC method to determine triamcinolone acetonide acetate in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.MethodsHPLC was used with Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm,5 μm) as chromatographic column with a mobile phase of methanol-water(60∶40).The detection wavelength was 240 nm,and the flow rate was 1.0 mL·min-1.ResultsThe concentration of triamcinolone acetonide acetate was linear within the range of 12-32 μg·mL-1(r=0.999 9).The intra-day precision RSD(n=6)was 0.33%.The average recovery(n=9)was 99.8%.ConclusionThe method is simple,rapid,accurate and reproducible.The method is suitable for determination of the content of triamcinolone acetonide acetate in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.

Triamcinolone acetonide,acetate;Liniment;HPLC;Content of determination

R977.1;R927.1

A

1004-0781(2014)03-0378-03

2013-05-10

2013-06-12

賈燕花(1982-),女,河南焦作人,主管藥師,博士,主要研究方向:藥物分析。電話:010-66867088,E-mail：yanhuajia@163.com。

劉皈陽(1972-),男,副主任藥師,主要研究方向:醫院藥學。電話:010-66867081,E-mail：liuguiy@live.cn。