赤霉酸A4，A7原藥高效液相色譜分析方法的研究

（江西新瑞豐生化有限公司,江西 新干 331307）

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采用高效液相色譜分析法對赤霉酸A4,A7原藥中的A4,A7進行分離與測定，將甲醇與水作為流動相，調(diào)整甲醇與水的體積比，在210nm波長下，使用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的不銹鋼柱和可調(diào)波長紫外檢測器，對試樣中的赤霉酸A4,A7進行高效液相色譜分離和測定。結(jié)果表明，此方法屬于準(zhǔn)確、可靠、快速、簡單的分析方法。

赤霉酸A4,A7原藥；高效液相色譜；甲醇；分析方法

1 前言

赤霉酸GA4+7屬植物生長調(diào)節(jié)劑，是GA4和GA7的混合物，在國外得到廣泛應(yīng)用。它不僅能改善果蔬的品質(zhì)，還能改變果形和大小，提高單果重量，從而達到顯著增產(chǎn)的目的。赤霉酸A4，A7原藥的ISO通用名：GibberellinA4，A7，原藥為白色結(jié)晶粉末，熔點：GA4：222oC；GA7：202oC。本文采用高效液相色譜法對赤霉酸A4，A7原藥中A4，A7進行分離和測定。

2 實驗部分

（1）實驗試劑和溶液。二次蒸餾水、甲醇（色譜純）、甲酸（分析純）、赤霉酸GA4，GA7標(biāo)準(zhǔn)品：已知質(zhì)量分數(shù)≥95.0％.（GA4質(zhì)量分數(shù)：63.5％；GA7質(zhì)量分數(shù)：31.5％）。

（2）實驗儀器。高效液相色譜儀；可調(diào)波長紫外檢測；數(shù)據(jù)處理站；C18柱；微量進樣器：50μL；過濾器，濾膜孔直徑為0.45μm。

（3）高效液相色譜操作條件。流動相：甲醇+水+甲酸=67+33+0.05（V/V）；流速：0.7mL/min，柱溫：30oC；檢測波長：210nm，進樣體積：20μL左右，而赤霉酸GA4保留時間約9.4min，GA7保留時間約11.0min。

圖1 試樣中赤霉酸A4，A7高效液相色譜圖

（4）制備標(biāo)樣溶液。稱取赤霉酸A4，A7標(biāo)準(zhǔn)品25 mg（精確到0.0002g）于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度。

（5）制備試樣溶液。稱取試樣25 mg（精確到0.0002g），于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度。

（6）實驗測定。在上述高效液相色譜操作條件下，等儀器基線穩(wěn)定之后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰兩針的相對響應(yīng)值變化均小于1.5％時，按標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液，標(biāo)樣溶液的順序進行測定。

（7）結(jié)果計算。將測得的兩針試樣溶液以及試樣溶液前后兩針標(biāo)樣溶液中GA4與GA7峰面積之和分別進行平均。，按照下列公式計算試樣中赤霉酸

上述計算公式中，A1—標(biāo)樣溶液中GA4、GA7的峰值面積之和平均值；A2—試樣溶液中GA4、GA7的峰值面積之和平均值；m1—標(biāo)樣質(zhì)量（g），m2—試樣質(zhì)量（g），P—標(biāo)樣溶液GA4、GA7的質(zhì)量分數(shù)（％）。

3 結(jié)果分析

（1）液相色譜條件。參照赤霉酸原藥的國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法[1]，通過調(diào)整甲醇與水的體積比，當(dāng)甲醇與水的體積比為67比33時 ，基線平穩(wěn)，GA4，GA7的峰型好，避免了峰拖尾的現(xiàn)象，分離效果較好。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性分析。不同濃度梯度的GA4+7的HPLC的吸收值（見表1），以赤霉酸濃度為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)繪圖，能夠得到赤霉酸線性方程y=43131x-285.74（圖2），相關(guān)系數(shù)是0.9997。

表1

圖2 赤霉酸線性圖

（3）測定方法的精密度。在上述色譜操作條件對同一樣品平行測定5次，赤霉酸 （GA4+GA7）的標(biāo)準(zhǔn)偏差是，0.38，RSD為0.4％

（4）測定方法的準(zhǔn)確度。通過在已知含量的樣品中添加不同質(zhì)量的標(biāo)樣，在上述色譜操作條件下進行測定，經(jīng)過計算，赤霉酸的回收率的平均值為99.45％，分析方法準(zhǔn)確度實驗結(jié)果（見表3）。

表2

表3 分析方法精度實驗結(jié)果

4 結(jié)論

在本文的高效液相色譜的檢測條件下對赤霉酸GA4+ GA7可以準(zhǔn)確檢測出來，分離效果好，GA4和GA7的峰型良好，保留時間穩(wěn)定，操作快速、方便，而且精密度、準(zhǔn)確度較高，和定量分析的要求一致，屬于準(zhǔn)確、快速、簡單實用的分析方法。

[1]中國石油和化學(xué)工業(yè)協(xié)會.GB 15955-2011,赤霉酸原藥[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2011.

[2]雷琪，于福利，王玉萍.3.6％芐氨·赤霉酸可溶液劑高效液相色譜分析方法研究[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2012,11（06）：20-21.

[3]戴冬艷,朱靜毅,聞琍毓.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用[J].天津藥學(xué),2012,7（13）：99-100.

[4]王偉麗.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用[J].中國藥業(yè),2009,18（14）：83-84.

赤霉酸A4，A7原藥高效液相色譜分析方法的研究

王紅亞,張 麗