犬乳腺癌的病理組織學(xué)分析

侯相山 （山東省東營職業(yè)學(xué)院生物與生態(tài)工程學(xué)院 257091）

犬乳腺癌的病理組織學(xué)分析

侯相山 （山東省東營職業(yè)學(xué)院生物與生態(tài)工程學(xué)院 257091）

通過對病犬腫瘤的病理組織學(xué)檢查來確定腫瘤的性質(zhì)、癌巢結(jié)構(gòu)、腫瘤細胞的形態(tài)(異型性)，惡性程度等。探討用犬來作為研究乳腺腫瘤的模型對以后研究新的治療方案的意義。利用蘇木素-伊紅(HE)染色與過碘酸Schiff氏液(PAS)染色，在光學(xué)顯微鏡下進行觀察。發(fā)現(xiàn)該病犬患有乳腺癌(碰撞癌)、硬癌。根據(jù)病理切片和相關(guān)資料分析此病犬腫瘤為腺癌、鱗狀上皮癌、鱗化腺癌、軟骨瘤等所組成的混合瘤，且其惡性程度較高，與人類及其它哺乳動物乳腺腫瘤有較大的差異。

乳腺癌 混合瘤 犬

乳腺癌是獸醫(yī)臨床上犬常發(fā)的惡性腫瘤，母犬乳腺瘤發(fā)病率約占全部腫瘤性疾病25%～42%，這種疾病在公犬很少發(fā)病(低于3%)[1]。乳腺惡性腫瘤(癌)是犬死亡的重要原因，犬乳腺腫瘤形態(tài)多種多樣，在不同個體的腫瘤之間或同一個體腫瘤標(biāo)本的形態(tài)學(xué)特征相差很大，即使在同一切片標(biāo)本上，也可同時表現(xiàn)為乳頭狀、管狀和髓樣癌，肌上皮增生和軟骨形成等[2-3]。根據(jù)不同的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，母犬一生當(dāng)中發(fā)生這種腫瘤的幾率從2%～20%不等，而發(fā)生良性乳腺腫瘤的幾率則會高出2～5倍。最近有兩個大樣本統(tǒng)計的有關(guān)發(fā)病率的報告發(fā)表，一個報告是對英國的病例進行統(tǒng)計，其報道的發(fā)病率為每年每10萬只犬中有205只會發(fā)生乳腺腫瘤，第二個報告則對瑞典有保險的8萬只母犬進行了母犬進行了統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)每年每1萬只犬中有111只會發(fā)生乳腺腫瘤。良性和惡性乳腺腫瘤在犬的某個特定種群中的發(fā)病率和犬的預(yù)期壽命有關(guān)，而且如果犬在年輕的時候進行過子宮卵巢摘除手術(shù)，發(fā)病率能夠大大降低。如果犬曾經(jīng)使用過孕激素防止發(fā)情，則乳腺腫瘤的發(fā)生幾率會進一步升高。

最近幾十年對人類乳腺腫瘤的研究和報道比較多，但仍有許多問題沒有解決，盡管已經(jīng)在裸鼠上建立人類的伴侶動物犬分享著人類生活得很多方面，如在與人相同的環(huán)境中，接觸的致癌物了人乳腺腫瘤的模型，但是犬是一類患自發(fā)性乳腺腫瘤幾率較高的動物(嚙齒類動物除外)，并且作為質(zhì)與人類也極其相近，經(jīng)研究已表明，犬惡性乳腺癌的發(fā)病率比女性還要高[4-5]。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對犬常見腫瘤的形態(tài)學(xué)、組織學(xué)和臨床特征已有相當(dāng)?shù)牧私猓鶕?jù)病史，臨床癥狀組織學(xué)檢查，可確診常見表在性腫瘤，有條件時配合X線檢查，超聲檢查，免疫診斷和放射性同位素標(biāo)記，則更利于診斷，但許多腫瘤特別是惡性腫瘤則常在手術(shù)切除后經(jīng)組織學(xué)檢查后才得以確診[6]。對犬的腫瘤往往采取手術(shù)切除方法進行治療，有時也采取冷凍療法和放射線療法。

此次觀察與研究分析，是對2000年5月24日黑龍江省雙鴨山市興達畜禽疾病研究所送檢的一條雜種犬的乳腺腫瘤組織做病理學(xué)觀察與回顧性病理學(xué)分析。根據(jù)提供的犬乳腺腫瘤組織進行了病理組織學(xué)與組織化學(xué)檢查，在HE、PAS染色，借助顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，該病犬乳腺癌組織中同時存在腺癌、鱗狀上皮癌、鱗化腺癌、軟骨瘤等。腫瘤組織異型性大，腫瘤細胞形態(tài)也呈現(xiàn)多樣性，細胞核分裂相多見，多種癌與瘤變組織構(gòu)成的混合瘤，惡化程度極高。此種病例在獸醫(yī)臨床中報道較少，對腫瘤病理學(xué)學(xué)、比較病理學(xué)、獸醫(yī)臨床病理學(xué)研究有很大的臨床參考價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 腫瘤組織 三塊犬乳腺腫瘤組織由雙鴨山市興達畜禽疾病研究所提供，病犬，雌性，5歲半。

1.1.2 染色材料 10%的福爾馬林、石蠟、甲醛、飽和碳酸鋰、伊紅、蘇木素、蒸餾水、70%酒精、75%酒精、80%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、無水乙醇、二甲苯、中性樹膠。過碘酸(HIO4.2H2O)、醋酸鈉、堿性品紅、鹽酸、偏重硫酸鈉、Schiff氏液、純酒精、蒸餾水。萊卡切片機、恒溫箱、干燥箱、濕盒、Leitz光學(xué)顯微鏡。

1.2 試驗方法

1.2.1 HE染色 病理組織切片的制備與HE染色按龔志錦、詹容洲主編《病理組織制片和染色技術(shù)》所敘方法進行[7]。

1.2.2 PAS染色 將切片放入0.5%～1%高碘酸氧化20min，schiff氏液避光染色1h，0.5%偏重亞硫酸鈉浸洗，Harris蘇木精染色15min，自來水沖洗1～2min，1%鹽酸酒精分化1min，1%氨水返藍5min,自來水沖洗15min，待干。脫水、透明和封固同HE染色法。

2 結(jié)果

2.1 臨床檢查與處理

該犬為雜種犬，雌性，5歲半，肩高0.5m，體重35kg，毛色灰黑。據(jù)畜主敘述，從發(fā)現(xiàn)至就診已半個月。該患犬腹下最后一對乳房皮下觸診有馬鈴薯狀瘤樣物。即左側(cè)乳頭皮下，有長約14.5cm，橫徑約8.5cm瘤樣物，表皮緊繃，瘤體凸凹不平，近地面有直徑1.5cm擦傷，瘤樣物觸診堅硬，右側(cè)乳頭皮下有直徑為3cm 扣狀瘤樣物，表面不平、堅硬。該瘤樣物生長極快，其余未見異常。畜主要求給犬進行手術(shù)，對腫物做病理學(xué)檢查。

經(jīng)手術(shù)鈍性剝離瘤樣物，切面可見明顯包膜。左側(cè)長14cm，橫徑8cm大型瘤樣物一個，蠶豆?fàn)盍鰳游?個，米粒大硬結(jié)(懷疑是腫瘤)6個，全部摘除。右側(cè)有3cm直徑瘤樣物一個，米粒大瘤2個，全部摘除，摘除的瘤樣物，灰白色，擊之有聲，堅硬如石，刀切有痕，切角有淺粉色大理石花紋。臨床摘除后，創(chuàng)處皮膚袋狀松弛，并有滲出，順創(chuàng)梭形切除皮膚，結(jié)節(jié)縫合，引流。由于畜主未帶其復(fù)診，故預(yù)后不詳。

2.2 組織學(xué)觀察

2.2.1 HE染色組織學(xué)觀察 常規(guī)HE染色觀察，乳腺瘤樣物中乳腺正常結(jié)構(gòu)完全被破壞。其中有大小不同形態(tài)各異的癌灶。有的癌巢呈塊狀、菊花狀、腺管狀、篩狀、團塊狀、小梁狀排列，無包膜。有的癌巢呈類似膠樣物質(zhì)結(jié)構(gòu)的癌細胞團存在，周圍繞以大量結(jié)締纖維，有的有成片粉紅色細胞角化灶。間質(zhì)纖維結(jié)締組織廣泛增生，有平滑肌纖維存在。腫瘤細胞在各個時期呈現(xiàn)不同形態(tài)，圓形、橢圓形、梭形、三角形、腺管管腔上皮細胞由單層變?yōu)閺?fù)層，向管腔內(nèi)突起生長，越往管腔中心，腫瘤細胞越大，胞漿越豐富，核越大，核分裂相多見，有的腫瘤細胞核發(fā)生顆粒變性和空泡變性。間質(zhì)纖維細胞變大，胞漿豐富，核變大，肌纖維細胞呈橢圓形，有的發(fā)生顆粒變性，核內(nèi)有兩核仁或多核仁現(xiàn)象，可見核分裂相，癌巢周圍未見炎性細胞浸潤。有髓樣癌灶，癌灶內(nèi)的癌細胞密集，纖維很少，并有大量淋巴樣細胞。

圖1 狗乳腺癌癌灶呈塊狀、菊花狀、腺管狀、篩狀 HE 10×

圖2 癌灶呈類似軟骨樣結(jié)構(gòu)。有包膜。纖維組織增生HE 33×

圖3 部分癌巢中心部分呈粉紅色細胞角化灶HE 10×

圖4 腫瘤細胞呈圓形、橢圓形、梭形、三角形HE 25×

圖5 狗乳腺癌成片粉紅色細胞角化灶 HE 10×

圖6 狗乳腺癌腫瘤細胞呈圓形、橢圓形、梭形、三角形 HE 25×

圖7 疑似髓樣癌

圖8 軟骨瘤大量結(jié)締組織

圖9 軟骨瘤

圖10 軟骨瘤

圖11 鱗化腺癌, 共壁現(xiàn)象

圖12 低分化腺癌的髓樣癌，癌細胞緊密排列，多邊形，胞漿咯嗜堿性，核仁明顯，排列成片狀。間質(zhì)結(jié)締組織少，其內(nèi)大量淋巴細胞浸潤。

圖13 鱗化腺癌，邊緣癌細胞已鱗狀化生。

圖14 癌巢小而少，間質(zhì)結(jié)締組織多的硬癌

2.2.2 PAS染色組織學(xué)檢查 PAS染色組織學(xué)檢查呈陰性，其組織形態(tài)類似骨樣組織物質(zhì)，淡染，可見腫瘤細胞核呈桔黃色。間質(zhì)組織中纖維極其豐富明顯。

圖15 狗乳腺癌 PAS 33×

圖16 狗乳腺癌 PAS 132×

3 討論與結(jié)論

（1）病料組織塊中腺管上皮細胞發(fā)生癌變，形成腺癌。部分腺癌中發(fā)生角化，出現(xiàn)角化珠，這是上皮組織鱗狀癌的特征[8]。部分軟骨瘤被周圍的腺癌包圍形成較復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，并且其癌細胞及細胞核異型性極強，核分裂相多見。還有的形成纖維肉瘤，部分發(fā)生骨化。癌巢中有高分化鱗化腺癌。有的癌細胞或癌細胞片塊密集，纖維很少，常有大量淋巴細胞浸潤，疑似髓樣癌。PAS染色組織學(xué)檢查呈陰性，這就排除了粘液瘤的可能。（2）乳腺腫瘤是母犬最常見的一類疾病，美國的一項調(diào)查發(fā)現(xiàn)，犬乳腺腫瘤占所有犬腫瘤發(fā)生率的52%，且41%～53%乳腺腫瘤為惡性的，科學(xué)家認為，研究這些腫瘤與種屬之間有很大的相關(guān)性，也有學(xué)者認為各種環(huán)境因素和遺傳因素影響犬乳腺腫瘤的發(fā)生[9]。而這些對人類腫瘤的研究都能夠有所啟發(fā)。而本文此病犬的腫瘤充分體現(xiàn)了犬乳腺腫瘤的特點，其惡性程度極高，且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，是多種癌變混合在一起的腫瘤結(jié)構(gòu)。相對與人類的乳腺腫瘤有較大的差異。據(jù)很多資料表明，犬惡性腫瘤大多為混合瘤[10]，而人類的乳腺腫瘤的類型雖然很多，但很少見類似犬腫瘤這種混合性極強的現(xiàn)象。因此是什么原因?qū)е氯橄倌[瘤如此高的惡性程度，還有如此多樣化的癌巢結(jié)構(gòu)，都有待將來的進一步研究。（3）該犬患有乳腺癌，且該癌巢為乳腺腺癌、高度分化鱗化腺癌與鱗狀上皮癌、軟骨瘤所混合在一起的混合癌(碰撞癌)、硬癌。

本研究將會對治療人類乳腺腫瘤提供理論依據(jù)，對戰(zhàn)勝人類惡性腫瘤提供獨特的幫助，所以將來用犬來作為研究乳腺腫瘤的模型對以后研究人類乳腺腫瘤新的治療方案有重要意義。

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1007-1733(2014)06-0007-03

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