獨一味水提物對大鼠血液凝集參數的影響

廖應瓊，鄧治國，韋會平

(1.攀鋼集團總醫院藥劑科，四川攀枝花 617023；2.攀枝花學院醫學院，四川攀枝花 617023）

·論著·

獨一味水提物對大鼠血液凝集參數的影響

廖應瓊1，鄧治國1，韋會平2

(1.攀鋼集團總醫院藥劑科，四川攀枝花 617023；2.攀枝花學院醫學院，四川攀枝花 617023）

目的研究藏藥獨一味對凝血作用和血液凝集參數的影響。方法以云南白藥(0.09 g/kg)為陽性對照組，蒸餾水為空白對照組，獨一味水提物為試驗組，試驗組分高(0.3 g/kg)、中(0.15 g/kg)、低(0.075 g/kg)三個劑量組，給大鼠灌胃給藥14 d后，頸總動脈采血測定其凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)以及纖維蛋白原含量(FIB)。結果與空白對照組比較，獨一味水提物的高、中、低劑量組及云南白藥組的TT值分別縮短了25.77%、12.42%、8.60%和24.91%；FIB值分別增加了26.80%、6.38%、20.72%和9.44%；PT、APTT值無明顯變化。結論獨一味水提物能增加大鼠纖維蛋白原的含量并能縮短大鼠凝血酶時間。

獨一味；水提物；止血；凝血酶時間；纖維蛋白原

獨一味[Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo]為唇形科獨一味屬植物，是我國藏、蒙、納西等民族民間常用藥之一[1]，具有止血、鎮痛消腫、活血化瘀、補髓、行氣、續筋接骨之功效。1982-1985年間，蘭州醫學院梁重棟等[2]首先對其進行了基礎與臨床研究，并研制了以獨一味水提取物為原料的獨一味片，取得了新藥證書。載入2000版《中國藥典》[3]的獨一味膠囊，臨床應用廣泛，主要用于各種外科手術后的鎮痛止血及牙科、婦科、關節炎等方面的疾病。但獨一味止血的活性成分及其作用機理至今沒有得到明確闡述，這極大地阻礙了獨一味藥材質量標準的制定、制劑工藝的優化和臨床應用的深入研究，限制了這一西北特色中藥的臨床應用和市場推廣。我們的前期實驗表明，獨一味水提物小鼠灌胃能顯著縮短小鼠斷尾出血時間和毛細管凝血時間，并且對小鼠、大鼠的血小板數量無顯著影響。在此基礎上，我們參考相關實驗方法學[4-5]，設計本實驗，考察獨一味水提物大鼠灌胃給藥后是否能夠對大鼠的血液凝集參數和纖維蛋白原的含量產生影響，以進一步闡明獨一味的止血機理。

1 材料與方法

1.1 藥材與儀器獨一味水提取物由實驗室自制，獲得率為23.5%；云南白藥(云南白藥集團股份有限公司，批號20130320)；一次性真空采血管(含0.3 ml，0.109 M的枸櫞酸鈉抗凝劑，英國，批號5006641)；ACL 9000全自動凝血/纖溶分析儀，Instrumentation Laboratory，USA；SPINCHROMTMDLX離心機，BECKMAN，USA；戊巴比妥鈉(化學純)，北京通縣育才精細化工廠，批號 100427；PT、APTT、TT的試劑盒，Behring Werke，Marburg。

1.2 分組與給藥Wistar大鼠50只隨機分成5組，每組10只，正常條件飼養，分別設為空白對照組、陽性對照組(云南白藥0.09 g/kg)、獨一味水提物高劑量組(0.3 g/kg)、獨一味水提物中劑量組(0.15 g/kg)和獨一味水提物低劑量組(0.075 g/kg)。空白對照組每天灌胃給予蒸餾水2 ml/200 g，其余各組給予同體積的蒸餾水配制的藥物。共給藥14 d。

1.3 大鼠體重的變化實驗第7天和第14天每只大鼠稱重，并與實驗前體重進行比較。

1.4 動物采血實驗第14天每組大鼠相隔40 min給藥，給藥后1 h依次腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液0.6 ml麻醉，剝離一側頸總動脈，采血1.7 ml于一次性真空采血管中，輕輕顛倒搖勻。

1.5 凝血酶時間的測定所取血樣立即置SPINCHROMTMDLX離心機中離心10 min，去除血小板，分離血漿，取上清400 μl，用ACL9000凝血/纖溶分析儀依次測定凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)以及纖維蛋白原含量(FIB)。

1.6 TT縮短率和FIB增加率的計算按下式計算各組與空白對照組比較TT縮短率和FIB增加率。

1.7 統計學方法所有數據用SPSS10.0軟件進行單因素方差分析，進行多個樣本均數間的兩兩比較，以均數±標準差(±s)表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 獨一味口服對大鼠體重的影響各實驗組對大鼠體重的影響測定結果見表1。獨一味水提物高、中、低劑量以及云南白藥組大鼠口服給藥14 d后，各組大鼠體重變化差異無統計學意義(P＞0.05)，未見明顯毒性作用。

組別空白對照組陽性對照組組獨一味高劑量組獨一味中劑量組獨一味低劑量組第0天1 9 8 . 0 ± 1 7 . 5 1 9 8 . 8 ± 1 8 . 0 1 9 9 . 8 ± 1 7 . 7 2 0 0 . 0 ± 1 9 . 4 1 9 8 . 6 ± 1 7 . 3第7天2 1 4 . 4 ± 1 9 . 0 2 2 3 . 2 ± 2 4 . 2 2 1 9 . 2 ± 1 8 . 0 2 2 2 . 4 ± 1 9 . 3 2 1 7 . 4 ± 1 5 . 6第1 4天2 2 8 . 2 ± 2 1 . 8 2 3 3 . 0 ± 2 9 . 0 2 2 2 . 4 ± 1 8 . 3 2 2 7 . 0 ± 1 9 . 4 2 2 3 . 4 ± 1 5 . 4

2.2 獨一味灌胃給藥對大鼠血液凝集參數和纖維蛋白原的含量的影響各實驗組對大鼠血液凝集參數和纖維蛋白原的含量的影響測定結果見表2。獨一味給藥14 d后，大鼠PT、APTT各組測得數值差異均無統計學意義(P＞0.05)。

表2 獨一味灌胃給藥對大鼠血液凝集參數和纖維蛋白原的含量影響(±s，n=10)

表2 獨一味灌胃給藥對大鼠血液凝集參數和纖維蛋白原的含量影響(±s，n=10)

組別空白對照組陽性對照組獨一味高劑量組獨一味中劑量組獨一味低劑量組PT(s) 16.97±0.95 16.28±0.85 16.06±1.55 16.75±2.49 16.50±0.72 APTT(s) 24.68±1.76 25.99±2.66 26.61±3.99 25.76±5.43 24.20±1.37 TT(s) 26.58±3.51 19.96±4.57 19.73±5.76 23.28±5.77 24.30±6.59 FIB(g/L) 1.567±0.197 1.715±0.099 1.987±0.370 1.667±0.203 1.913±0.173

2.3 各組TT縮短率和FIB增加率比較獨一味水提物高、中、低劑量組及陽性對照組給藥14 d后大鼠TT分別為(19.73±5.76)s、(23.28±5.77)s、(24.30±6.59)s和(19.96±4.57)s，與空白對照組(26.58±3.51)s比較，分別縮短25.77%、12.42%、8.60%、和24.91%，獨一味水提物高劑量組、陽性對照組與空白對照組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)。獨一味水提物高、中、低劑量組以及陽性對照組口服給藥14 d后，各組的大鼠FIB含量分別為(1.987±0.370)g/L、(1.667±0.203)g/L、(1.913±0.173)g/L和(1.715±0.099)g/L，與空白對照組(1.567±0.197)g/L比較，分別增加了26.80%、6.38%，20.72%和9.44%，獨一味水提物高、低劑量組與空白對照組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表3

表3 TT縮短率和FIB增加率(±s，n=10)

表3 TT縮短率和FIB增加率(±s，n=10)

組別TT基礎值(s)縮短率(%) FIB基礎值(g/L)增加率(%空白對照組陽性對照組獨一味高劑量組獨一味中劑量組獨一味低劑量組26.58±3.51 19.96±4.57 19.73±5.76 23.28±5.77 24.30±6.59 0.00 24.91 25.77 12.42 8.60 1.567±0.197 1.715±0.099 1.987±0.370 1.667±0.203 1.913±0.173 ) 0.00 9.44 26.80 6.38 20.72

3 討論

3.1 獨一味的止血、促凝血作用上述結果表明，獨一味水提物對大鼠無明顯毒性作用，對大鼠PT、APTT也無顯著影響，但能顯著縮短TT，并顯著增加FIB。PT值反映外源性凝血因子是否異常，APTT值反映內源性凝血因子是否異常，TT主要反映凝血共同途徑纖維蛋白原轉變為纖維蛋白的過程中，是否存在異常的抗凝現象。低纖維蛋白原血癥患者常見TT延長，而FIB的增加可以縮短TT。由此可見，獨一味確實具有較好的止血、促凝血作用。并且可以推測獨一味止血的機理，可能主要是影響凝血共同途徑纖維蛋白原轉變為纖維蛋白的過程，而對外源性凝血因子和內源性凝血因子影響不大。

3.2 采血方法對凝血實驗結果的影響本實驗研究中我們曾經嘗試從大鼠眼眶后靜脈叢采血，但由于采血量難以滿足測定需要，并且采血過程中易帶入眼組織液、毛等極易激活凝血系統的物質，使許多樣本出現凝血而干擾測定。經大量實驗摸索，我們最終決定從頸總動脈采集大鼠動脈血。此法采集的血樣不易凝血，對各項凝血指標測定的干擾小。

3.3 抗凝劑對凝血實驗結果的影響本項實驗用的真空采血管是臨床用于人凝血酶實驗的采血管，內含0.109 M的枸櫞酸鈉抗凝劑0.3 ml，每次患者采血2.7 ml。但由于大鼠的血比人類的血具有更高的凝集性，當采集2.7 ml大鼠血時易發生凝血。我們比較研究了最終抗凝劑含量分別為10%、15%、20%、30%時所采血樣的凝血狀況。結果發現抗凝劑為15%時，即采集1.7 ml的大鼠動脈血于內含0.3 ml、0.109 M的枸櫞酸鈉抗凝劑的真空采血管中時，抗凝效果最好，且不發生溶血現象，所測各項指標變異較小。

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[S].7卷.上海:上海科學技術出版社,1999:6074-6075.

[2]梁重棟.藏藥獨一味的基礎與臨床研究[J].蘭州醫學院學報, 1987,40(2):47-49.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學工業出版社,2000:533-534.

[4]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].3版.北京:人民衛生出版社,2002:184-186,1270-1275.

[5]杜冠華,李學軍,張永祥.藥理學實驗指南－新藥發現和藥理學評價[M].北京:科學出版社,2004:219-220.

Effect of Herba Lamiophlomis rotata on blood coagulation parameters of rats.

LIAO Ying-qiong1,DENG Zhi-guo1,WEI Hui-ping2.1.Pharmaceutical Preparation Section，Hospital of Panzhihua Metal Group,Panzhihua 617023,Sichuan,CHINA;2.Medical School,Panzhihua University,Panzhihua 617023,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo study the effect of tibet medicine herba lamiophlomis rotata on blood coagulation parameters(PT,APTT,TT)of rats.MethodsYunnan Baiyao powder(0.09 g/kg),distilled water, high dose(0.3 g/kg),middle dose(0.15 g/kg),low dose(0.075 g/kg)of the aqueous extract ofL.rotata,were taken orally by rats for fourteen days.Blood samples were culled from common carotid artery and PT,APTT,TT and FIB of these samples were determined.ResultsCompared to the blank control group,the reduced rates of TT values of the high,middle and low dose groups and Yunnan Baiyao powder group were 25.77%,12.42%,8.60%and 24.91%,respectively.The increased rates of FIB values were 26.80%,6.38%,20.72%and 9.44%,respectively.There were no obvious changes in PT and APTT values between all groups.ConclusionThe aqueous extract ofL.rotatacould increase the content of FIB and shorten TT value.

Lamiophlomis rotata;Aqueous extract;Hemostatic;TT;FIB

R-332

A

1003—6350（2014）11—1561—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.11.0607

2013-11-28)