ELISA法與HI法檢測雞新城疫抗體的比較

雷莉輝 喬立東 關文怡 于鳳芝 （北京農業職業學院 北京 房山 102442）

ELISA法與HI法檢測雞新城疫抗體的比較

雷莉輝 喬立東 關文怡 于鳳芝*（北京農業職業學院 北京 房山 102442）

應用商品化酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒和血凝抑制試驗(HI)同時測定162份免疫雞血清樣品。研究ELISA方法檢測雞血清的相關關系，結果表明，ELISA和HI兩種方法的陽性符合率為97.3%，陰性符合率為95.2%，陰陽性總體符合率為96.9%。這說明ELISA方法作為一種敏感、特異、快速的血清學診斷方法，適用于臨床大規模雞場新城疫的檢測。

雞新城疫 抗體 檢測

雞新城疫(newcastl disease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的雞呼吸道、消化道黏膜出血為典型病變的一種急性、高度接觸性及致死性傳染病，目前已成為危害養雞業的主要疾病之一[1]。在接種新城疫疫苗或受到新城疫病毒野毒攻擊后一段時間內，雞體內會產生中和性抗體和血凝抑制抗體。多種血清學方法可用來檢測雞血清中產生的抗NDV抗體，如血凝抑制試驗(HI)、瓊脂擴散試驗(AGP)、病毒中和試驗(VN)及酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等。隨著近年來酶免疫技術的快速發展，用ELISA方法代替傳統的HI法來檢測NDV抗體已經成了必然的趨勢。本研究中，采用ELISA方法對162份HI滴度不同的血清標本和ND的標準陰性、陽性血清進行了NDV抗體檢測，進而分析了HI法和ELISA法檢測雞血清中NDV抗體的相關關系。

1 材料與方法

1.1 試劑材料

雞新城疫血凝抑制試驗抗原、陽性血清、陰性血清，購自青島易邦生物工程有限公司；禽新城疫抗體檢測試劑盒，購自北京愛德士元享生物科技有限公司； 待檢血清162份，血清來平谷、懷柔、房山、延慶、密云等6個區縣，均從消毒過的翅靜脈采集，每份3～4ml，分離血清置-20℃條件下備用。

1.2 方法

1.2.1 HI試驗方法 采用微量血凝抑制試驗，按GB/16550-2008進行操作。只有當陰性血清與標準抗原對照的HI滴度不大于2log2，陽性血清與標準抗原對照的HI滴度與已知滴度相差在一個稀釋度范圍內，并且所用的陰、陽性血清都不發生自凝的情況下，HI試驗結果方判定有效。

1.2.2 ELISA方法 按禽新城疫抗體檢測試劑盒說明書進行操作。正常情況下，當陰性對照孔OD值≤0.1，陽性對照孔OD值≥0.6時試驗成立。

1.3 ELISA和HI方法的檢測符合率分析[2]

HI法檢測為陽性的雞血清樣品中ELISA方法的陽性檢出率為二者的陽性符合率，HI法檢測為陰性的雞血清樣品中ELISA方法的陰性檢出率為二者的陰性符合率，兩種檢測方法同為陰性或陽性的血清樣品數占總檢測樣品數的比率為二者的總體符合率。

1.4 待檢樣品的檢測

利用兩種方法對162份HI滴度不同的樣品(其中124份陽性血清樣品和38份陰性血清樣品)進行檢測，利用統計學方法對檢測結果進行相關性分析。

2 結果與分析

按照ELISA試劑盒提供的臨界點判定值，用ELISA方法與HI法分別對162份常規血清樣品進行檢測，結果見附表。

附表 ELISA方法對HI血清樣品的檢測結果 (%)

由表中可以看出，ELISA和HI兩種方法的陽性符合率為97.3%，陰性符合率為95.2%，陰陽性總體符合率96.9%。

3 討論

ELISA方法和血凝抑制試驗方法簡單易學，對養雞場及中小規模養殖戶來說，掌握適合自己的一種方法，就可以節約雞新城疫抗體檢測的成本，并且能實時監測本場雞新城疫病免疫狀況，在臨床上對雞場雞新城疫病的流行起著很好的預防效果。本文采用ELISA方法和血凝抑制試驗(HI)對北京市延慶、懷柔、密云等5 個區縣種雞場的162 份蛋雞血清進行了新城疫抗體檢測，檢測結果顯示各雞場的抗體水平不盡相同。本研究得出的間接ELISA和HI兩種方法檢測ND抗體效價的符合率較高，陽性符合率為97.3%，陰性符合率為95.2%，總體符合率為96.9%，表明這兩種檢測方法顯著相關，這與陳福勇等[3]的研究結果是一致的。而比張國中等[2]研究得出的相關性要高一些。

在養禽生產中，各養禽場通常都是以HI抗體效價作為對ND的免疫力指標，許多有用的試驗數據也都是根據HI試驗而得到的，比如當前認為HI抗體效價大于或等于8log2時可以基本保證雞群在ND強毒攻擊下獲得完全的保護，HI抗體效價大于12log2時的具有疾病診斷意義，提示雞群發生或曾經發生過ND感染等等[4]。這些有用的試驗數據對于養禽生產和日常免疫具有重要的臨床指導意義，因此ELISA要想取代HI方法作為ND抗體檢測的主要方法，其具有保護意義的ELISA臨界值、能夠區分感染與免疫的臨界值等指標都需要在實踐中不斷的通過具體的試驗和詳實的數據來進行探索和求證。

本研究得出的間接ELISA和HI兩種方法檢測的抗體是有所不同的，HI試驗檢測的主要是NDV血凝素抗體，而ELISA試驗檢測的是NDV全抗體，包括血凝素(HA)融合蛋白9F)、基質蛋白(M)、核蛋白(NP)等等[8]，兩種方法相比ELISA可能更有助于真實地反映機體的全部免疫應答效果。試驗中對162份臨床樣本進行了平行檢測，得出兩種方法檢測NDV抗體的陰陽性總體符合率為96.9%。其中用ELISA 和HI方法檢測的162份樣本中僅有5份檢測結果出現不同，這也說明在一定范圍內間接ELISA和HI兩種方法有著較好的對應關系。結論表明HI法檢測ND抗體方法耗時長、靈敏度低，且經驗依賴性強。ELISA法檢測ND抗體，方法更簡便實用，其特異性、敏感性均優于HI檢測方法，是一種敏感、特異、快速的血清學診斷方法，適用于臨床樣本的大規模檢測。

[1] 唐慧穩. 非典型雞新城疫的特點及防制研究[J]. 畜牧獸醫科技信息, 2007, 32-34.

[2] 張國中, 胡旭東, 秦春芝等. 間接ELISA與HI檢測雞新城疫病毒抗體的相關性分析[J]. 中國家禽, 2007, (4)∶ 14-16.

[3] 陳福勇, 吳玉萍等. 間接ELISA法與HI法檢測雞新城疫抗體相關性[J]. 動物醫學進展, 2004, 25(3)∶ 88-90.

[4] 黎豢洪, 櫥克軍. 雞新城疫的預防與控制[J]. 養禽與禽病防治, 2006(11)∶ 34-35.

[5] 胡率領, 郜國濤, 夏曉惠等. 免疫雞群發生新城疫的原因分析及防制措施[J]. 河南農業科學, 2006(12)∶ 95-97.

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1007-1733(2014)04-0009-02

2014–01–06）

北京農業職業學院技術研發與示范推廣(項目編號：XY-YF-13-24)

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