水貂犬瘟熱抗體檢測及其分析

戴秀美 王清明 惠涌泉 王秋菊 常維山*

（①山東農業大學動物科技學院 山東 泰安 271018 ②山東菁華農牧發展有限公司 山東 諸城③ 山東諸城市皮毛動物研究所）

犬瘟熱是犬類、毛皮動物和部分海洋哺乳動物的一種多發性、高度接觸性烈性傳染病[1]，病死率差異很大，為30%～80%。早期以雙相熱、結膜炎、支氣管炎、卡他性肺炎、胃腸炎為特征，后期出現明顯的神經癥狀，部分病例足墊過度角質化。自1973年我國首次發現犬瘟熱以來，該病已給毛皮動物養殖業帶來了巨大的經濟損失，是毛皮動物養殖三大疫病之一。雖然犬瘟熱疫苗在中國毛皮動物養殖業中得到了推廣應用，但犬瘟熱引起貂、狐和貉等毛皮動物死亡率仍然較高(平均23.2%)[2]。雖然有犬瘟熱疫苗出售，但仍存在免疫失敗現象。為了解使用激素后水貂犬瘟熱免疫效果，2013年9～10月筆者對大連市、諸城市部分水貂養殖場進行了CDV血清學調查與分析。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集 2013年9～10月水貂出欄期間對諸城市和大連市部分水貂養殖場進行隨機心臟采血取樣，共100份血清。其中諸城市50份，大連市50份。水貂養殖場均使用齊魯動物保健廠CDV-11株犬瘟熱活疫苗進行犬瘟熱的免疫。

1.1.2 主要試劑及儀器 CDV-Ab ELISA 48孔和96孔檢測試劑盒(美國RB公司生產)、酶標儀、50ml移液槍、50ml排槍、300ml排槍、37℃溫箱、濕盒、黃白槍頭等。

1.2 方法

1.2.1 采血和血清分離 隨機采集的100份血樣，心臟采血后將離心管靜置放置20min，后3000r/min離心3～5min，收集血清置于-20℃備用。

1.2.2 酶聯免疫吸附試驗(ELISA) 按照美國RB公司CDV-Ab ELISA 檢測試劑盒使用說明步驟進行，以96孔板為例，每板設置陰陽性對照8孔，并加入陰陽性各50ml；待測樣本孔加待測樣本10ml，再加樣本稀釋液40ml；然后陰陽性對照孔和樣本孔每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100ml，用封板膜封住反應板，37℃溫箱孵育60min。棄去液體，在吸水紙上拍干，每孔加入200ml洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，洗板5次。每孔加入底物A、B各50ml，37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50ml，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。結果判定：臨界值= 陰性對照孔平均值+0.15；陰性判定: 樣品D450nm值<臨界值者為犬瘟熱病毒(CDV)抗體陰性；陽性判定：樣品D450nm值>臨界值者為犬瘟熱(CDV)抗體陽性。

2 結果

諸城市部分地區采集的50份激素貂血清，CDV抗體平均陽性率為36%，本地區陽性率見表1。大連莊河市部分地區采集的50份出欄水貂血清，CDV抗體平均陽性率為32%，本地區陽性率見表2。

表1 山東諸城市部分地區CDV抗體陽性率 (%)

表2 大連莊河市部分地區CDV抗體陽性率 (%)

3 小結與討論

犬瘟熱是困擾毛皮動物養殖業發展的三大疫病之一，對使用過激素的水貂進行犬瘟熱抗體的監測能夠對犬瘟熱免疫效果有比較直觀的了解。于2013年9～10月間對山東諸城市和大連莊河市激素貂的100份血清進行了犬瘟熱抗體ELISA檢測。結果表明山東諸城市和大連莊河市激素貂的CDV抗體平均陽性率相近，為30%左右。在使用相同疫苗免疫的條件下，犬瘟熱抗體陽性率與犬瘟熱疫苗的免疫次數密切相關，已完成犬瘟熱二次免疫的水貂養殖場的抗體陽性率明顯高于只進行過一次免疫及未進行過免疫的。大連莊河市藍店鄉雖然進行過2次犬瘟熱疫苗免疫，但其抗體陽性率仍然較低，主要原因可能是二次免疫時機不對，不能很好地掌握二次免疫間隔時間，導致免疫空白期的出現，造成免疫失敗，犬瘟熱抗體產生量低。

總之，犬瘟熱的有效控制需要合理的疫苗免疫程序。本研究提醒水貂養殖戶：規范、合理、嚴格的免疫接種至關重要，且一定要重視二次免疫，只有這樣才能產生堅實的疫苗保護力，防止犬瘟熱暴發造成不必要的經濟損失。

[1]Martella V，Elia G，Buonavoglia C.Canine distemper virus [J]Vet Clin North Am Small Anim Pract, 2008, 38(4): 787-797.

[2]王珺瑋.貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學特性研究[D].南京: 南京農業大學, 2008