培養基保存方法的改善

王開校

（新沂市疾病預防控制中心，江蘇 新沂 221400）

培養基保存方法的改善

王開校

（新沂市疾病預防控制中心，江蘇 新沂 221400）

目的 探索培養基（液）有效期更長的適宜保存方法。方法 通過細菌生長實驗和培養基（液）稱量實驗對兩種方法進行對比。結果 塑料袋扎口法保存的培養基（液）有效期更長。結論 塑料袋扎口法簡單、經濟、實用、有效，適合基層疾病預防控制中心。

培養基；保存；改善

近年來，隨著經濟的發展和國家的重視，尤其自2003年“非典”之后，各級政府加大投入，很多疾病預防控制中心軟、硬件建設得到了很大提高。然而，在基層單位，微生物檢驗的軟硬件提高幅度不大。微生物檢驗工作面廣量大、專業性強、質量要求高，并且具有突發性和臨時性，尤其在進行微生物檢驗最基本的步驟—培養基（液）的配制及保存時極為重要[1]。常規方法保存時效短，無法解決相對配制量大和實驗利用率小的矛盾。為了解決這個矛盾，結合基層單位實際，我們在實際工作中用塑料袋扎口法保存平皿和試管類培養基（液），經實驗觀察發現效果良好。

1　實驗結果

1.1培養基（液）水分濃縮對細菌生長的影響

只要在適宜的溫度下保存，無論何種培養基在一定的時間內均可以保持穩定的作用。但是，水分的減少改變了培養基內各種成分的濃度，這是培養基失效的主要原因[2]。本次實驗，我們選擇最常用的營養瓊脂培養基和SS培養基，通過細菌生長實驗觀察：培養基水分濃縮在5%～10%對實驗細菌生長沒有明顯影響。因此，我們認為，一般情況下，水分濃縮率不超過10%的培養基均有效、可用，見表1。

1.2平皿類培養基塑料袋扎口法與紙包法的比較

首先選擇平皿培養基做實驗，根據平皿培養基稱量實驗，平皿類培養基常規保存，水分濃縮率不超過10%，一般為3～7 d[3]；塑料袋扎口法可達到21 d以上。結合細菌生長要求，我們認為培養基常規保存有效期為3～7 d；塑料袋扎口法保存平皿類培養基有效期至少為3周。見表2。

表2　SS瓊脂平皿培養基保存效果觀察結果

1.3試管類培養液塑料袋扎口法與紙包法的比較

對于試管類培養基，同理做水分減少率實驗，試管類培養液，冰箱保存常規法水分濃縮率不超過10%，一般為7～14 d，而塑料袋扎口法冰箱保存可達50 d以上[4]。結合細菌生長要求，我們認為試管類培養液，常規保存有效期為7～14 d；塑料袋扎口法保存有效期至少為50 d，見表3。

表1　培養基水分濃縮對細菌生長的影響

表3　試管類培養液兩種方法保存效果

2　討 論

2.1影響微生物檢驗質量因素很多，有原材料、水質、滅菌效果、pH及其他。但是，有效的培養基是關鍵。培養基的配制、保存尤為重要。無論何種培養基（液），水分的改變既改變了各種成分的比例、pH，也改變了其外觀性狀（如固體培養基硬度），從而改變了所需培養的微生物的適宜生長、繁殖必需條件，這是培養基（液）失效的主要原因。因而，在日常工作中，我們只有使用有效期內的培養基（液），才能有效、準確地進行微生物的培養、分離、鑒定；才能保證微生物檢驗工作的質量。GB/T27405-2008《實驗室質量控制規范 食品微生物檢測》[2]中對培養基有很詳細的規定，我們應該將培養基的質量控制納入質量管理體系進行嚴格管理。

2.2保存培養基（液）的冰箱無法達到無菌和密閉，有一定空氣流通。因而，常規法保存培養基（液），空氣流通可加速培養基（液）中水分的流失，從而改變各種成分的比例、pH和其外觀性狀（如固體培養基硬度）；也增加空氣中微生物對其污染[5]。塑料袋扎口法，減少了空氣的流通，從而，既減少培養基（液）中水分的流失，也減少空氣中微生物對其污染，保存有效期相對更長[6]。

2.3盡管“非典”以后，國家及各級政府都加大投入，疾病預防控制機構的軟硬件建設得到一定提高。但是，由于疾病預防控制工作的性質及各種因素的影響，衛生檢驗工作受到很大的沖擊。尤其是很多基層單位，在微生物檢驗方面投入甚微。近年來，工作量呈逐年增長趨勢，檢驗人員卻逐年減少，許多需要開展的工作受到了嚴重影響。塑料袋扎口法雖然簡單，但是經濟、實用、有效；尤其對基層疾病預防控制中心來說，既大大節省了大量重復勞動量，提高了工作效率，解決了工作量大和相對人員偏少的矛盾；又充分體現小投入大產出，解決了基層疾病預防控制中心培養基相對配制量多和實際利用少的大矛盾。

[1] 吳清平,孟凡亞,蔡芷荷,等.微生物培養基質量控制技術和標準[J].微生物學通報,2006,33(6):128-132.

[2] 孫燕萍,凌霞,彭浩,等.1份半固體培養基保存的模擬肛拭樣品鑒定結果分析[J].現代預防醫學,2009,36(23):4542-4543.

[3] Lopes CAP,dos Santos RR,Celestino JJH,et al.Short-term preservation of canine preantral follicles: Effects of temperature,medium and time[J].Anim Reprod Sci,2009,115(1):201-214.

[4] Onuma K,Urabe K,Naruse K,et al.Cold preservation of rat osteochondral tissues in two types of solid organ preservation solution, culture medium and saline[J].Cell Tissue Bank,2009,10(1):1-9.

[5] Isachenko E,Isachenko V,Nawroth F,et al.Human ovarian tissue preservation: is vitrification acceptable method for assisted reproduction?[J].Cryoletters,2008,29(4):301-314.

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1671-8194（2014）19-0110-02