麝香接骨膠囊中非法添加松香酸檢測方法的建立

楊 芳

（湖南省常德市藥品檢驗所，湖南 常德 415000）

麝香接骨膠囊中非法添加松香酸檢測方法的建立

楊 芳

（湖南省常德市藥品檢驗所，湖南 常德 415000）

目的 建立麝香接骨膠囊中非法添加松香酸的快速篩選方法。方法 采用薄層色譜法（TCL）結合高效液相色譜法（HPLC）進行篩選分析。結果 該薄層色譜法（TCL）結合高效液相色譜法（HPLC）測定麝香接骨膠囊中非法添加的松香酸穩定性和重復性好。結論TCL結合HPLC的方法簡便、可靠、快速、重現性好，能有效地檢查麝香接骨膠囊中是否摻有松香酸。

麝香接骨膠囊；松香酸；薄層色譜法；反相高效液相色譜法；含量測定

麝香接骨膠囊主要由血竭、赤芍、麻黃（蜜制）等22味中藥組成。處方中未含有松香及含松香酸成分的物質。但在檢驗過程中常常檢出松香酸。因不法分子為了牟取暴利常在加工過程中加入松香來代替血竭造假。松香中的松香酸對局部組織有刺激性，大量內服吸收后中樞神經先興奮后麻醉，對身體造成極大的損害。而現行標準中沒有松香酸的檢查。為了維護患者用藥安全有效，提高質量標準，筆者采用薄層色譜法（TCL）結合高效液相色譜法（HPLC）建立了麝香接骨膠囊中非法添加的松香酸的快速檢驗方法，為更好打擊不法行為提供可靠的技術保障，為完善該制劑質量標準提供了依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waterse2695高效液相色譜儀（包括Waters2489紫外檢測器、四元梯度泵、在線脫氣裝置、柱溫箱、EMPOWER色譜工作站；溶劑過濾系統），梅特勒一托利多AG135型天平（德國Sartorius），KQ2200E型超聲波清洗器。所用儀器和量具均進行校正和檢定。

1.2 試劑

水為一級水，乙腈為色譜純，甲醇、石油醚、乙酸乙酯、冰醋酸均為分析純；松香酸對照品（批號：110805-200306），購于中國藥品生物制品檢定所。

圖2 對照品溶液（A），未檢出松香酸的樣品溶液（B），陰性樣品溶液（C）、檢出松香酸（陽性）樣品溶液（D）的HPLC色譜圖

1.3 試藥

供試品：市場上銷售的10批麝香接骨膠囊；參照樣品粉末：按標準中提供的處方及制法制備。陰性樣品粉末：按標準中提供的處方，去血竭后依法制備。

2 方法與結果

2.1 TLC法

分別取樣品的內容物、陰性樣品、2.0 g，置錐形瓶中，加石油醚（60～90 ℃）20 mL，超聲處理30 min，濾過，取濾液置水浴蒸干，殘渣加甲醇2 mL溶解，作為供試品溶液。另取松香酸對照品適量，加石油醚（60～90 ℃）制成每1mL含松香酸1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取供試品溶液5 μL，對照品溶液5 μL，分別點于同一硅膠GF254 薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（28∶5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈（254 nm）下檢視。見圖1。

圖1 麝香接骨膠囊的TLC圖

3 HPLC法檢查

3.1 供試液的制備

3.1.1 對照品溶液的配制

精密稱定松香酸對照品10.00 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為儲備液；精密量取1 mL置20 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

3.1.2 樣品溶液的制備

取裝量差異項下的樣品內容物，研細，稱取1.000 g，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.1.3 陰性樣品溶液的制備

取陰性樣品粉末（除血竭藥材外，將其他藥按處方中藥味的比例）0.5 g，再按樣品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

3.1.4 參照樣品溶液的制備

取參照樣品粉末（按標準中提供的處方）0.5 g，再按樣品溶液的制備方法制成參照樣品溶液。

3.1.5 陽性樣品溶液的制備

取陰性樣品粉末0.5 g，加松香酸對照品5.00 mg，混勻，按樣品溶液的制備方法制成陽性樣品溶液。

3.2 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：十八烷基硅烷健合硅膠為填充柱（ODS-2 Hypersil C18，250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%甲酸溶液（75∶25）；流速：1.0 mL/min，檢測波長：241 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。采用外標法定量。理論板數按松香酸計算應不低于5000[1]。見圖2。

3.3 線性關系考察

標準曲線的制備：分別精密吸取松香酸對照品儲備溶液1、5、10、15、25 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，分別進樣10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積與進樣量，以峰面積積分值為縱坐標，以對照品進樣量（μg）為橫坐標，進行線性回歸。得松香酸對照品的回歸方程分別為Y=2506X+5469，r=0.9998；結果松香酸線性范圍為8～200 μg/mL。

3.4 精密度試驗

分別精密吸取同一對照品溶液，重復連續進樣6次。分別測定峰面積值，結果松香酸峰面積的RSD為0.9%（n=6），表明此儀器精密度良好。

3.5 穩定性試驗

精密吸取取同一樣品溶液，分別于0、5、10、20、30、48 h，分別進樣10 μL，記錄色譜圖，結果松香酸峰面積的RSD為1.3%（n=5），表明供試品溶液在48 h內穩定。

3.6 重復性試驗

取樣品6份，依法制備供試品溶液，以峰面積外標法測定。結果松香酸峰面積的RSD分別為1.0%，表明該方法重復性好。

3.7 加樣回收率試驗

精密稱取上述含松香酸的供試品9份（0.200 mg/g），分別精密量取對照品儲備溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。分別精密量取3、3、3、5、5、5、10、10、10 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，配制高、中、低3組濃度的溶液，每一濃度3份，上述色譜條件測定，松香酸平均回收率為100.0%；（n=9）。試驗結果見表1。回收率=（測得含量-樣品含量）/加入量×100%。

3.8 樣品含量測定

取麝香接骨膠囊樣品，按“3.1”項下方法制備溶液，按“3.2”項下色譜條件下進樣測定，記錄色譜圖，并用外標法計算松香酸的含量，測定少部分檢出了松香酸。

4 討 論

4.1 供試液的制備過程中參考文獻[1-9]分別對提取方法進行了考察，以甲醇超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30、60 min進行考察，結果表明：超聲處理30 min和60 min松香酸含量相差不大，故選擇超聲處理30 min。

表1 松香酸回收率測定結果（n=9）

4.2 供試液的制備過程中參考文獻[1-9]分別對提取方法進行了考察，分別選擇乙酸乙酯、乙醇、甲醇作為提取溶劑進行考察，結果以甲醇魏提取溶劑提取效果最好。

4.3 本實驗在選擇流動相時，分別選用了乙腈與0.05%甲酸，甲醇與0.05%甲酸等不同比例的流動相試驗。但均不能達到滿意效果，參考文獻[1-9]采用乙腈一0.1%甲酸溶液（75∶25），各物質間分離良好無干擾，保留時間穩定，重現性好。

4.4 對于檢出松香酸的樣品，采用LC-MS/MS方法進行了進一步的驗證：色譜條，干燥氣壓力20psi，毛細管壓力45V，檢測器壓力1.5KV。結果樣品的質譜圖中，出現與對照品保留時間一致的樣品。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[S].北京:化學工業出版社,2010.

[2] 國家藥品督督管理局,藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件匯編[S].2003-2008:176-177.

[3] 李莉.麝香接骨膠囊中摻假物松香酸的檢查[J].藥學與臨床研究,2010,18(5):499-500.

[4] 李霞.四黃瀉火片、麻仁丸中非法添加土大黃苷檢測方法的建立[J].中國當代醫藥,2010,17(34):52-53.

[5] 衛生部頒藥品標準(中藥成方制劑第五冊)[S].

[6] 仇雅靜.高效液相色譜法檢查骨筋丸膠囊中非法添加的松香酸[J].中國藥業,2011,20(4):39-40.

[7] 肖聰,饒偉文,鐘名誠.沒藥摻偽品中松香酸的檢測方法研究[J].中藥材,2012,35(8):1237-1241.

[8] 李富賢,米彩峰,石會麗.RP-HPLC測定清毒素膠囊中松香酸的含量[J].中國中藥雜志,2008,33(9):1086-1087.

[9] 趙江紅.高效液相色譜法鑒定29批血竭中非法添加的3種化學成分[J].中醫研究,2011,24(8):17-19.

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1671-8194（2014）19-0108-03