鹽酸左旋咪唑中對甲苯磺酰氯雜質測定方法的建立

邢亞非* 錢小燕

（南京白敬宇制藥有限責任公司，江蘇 南京 210038）

鹽酸左旋咪唑中對甲苯磺酰氯雜質測定方法的建立

邢亞非* 錢小燕

（南京白敬宇制藥有限責任公司，江蘇 南京 210038）

目的 建立鹽酸左旋咪唑中對甲苯磺酰氯雜質測定方法并對方法進行驗證。方法 色譜柱：C18（5 μm×4.6 mm×250 mm），流動相：水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺調節pH=4.5）：甲醇=80∶20；檢測波長：200 nm；柱溫：30；進樣量：10 μL；定量限不得低于400 ppm。結果 鹽酸左旋咪唑與對甲苯磺酰氯峰分離度＞1.5，并與相鄰雜質峰分離度＞1.5；在定量限與測定濃度的150%之間呈良好線性關系，相關系數R2≥0.99。結論 該方法專屬性強，重復性好，可用于鹽酸左旋咪唑中對甲苯磺酰氯的定量測定。

鹽酸左旋咪唑；對甲苯磺酰氯；高效液相色譜法

分拆劑是鹽酸左旋咪唑生產原料之一，對甲苯磺酰氯是分拆劑的起始原料這一，生產中對甲苯磺酰氯可能會隨著分拆劑進入到原料藥中，根據EMEA基因毒性雜質指南[1]和EMA關于“基因毒性雜質限度指南”的問答[2]，該物質具有基因毒性警示結構，故在原料藥中需考察是否含有該雜質且應控制在允許限度范圍內。參照HPLC法測定鹽酸左旋咪唑片的含量及溶出度[2]、復方甲苯咪唑粉中鹽酸左旋咪唑含量的測定[3]、HPLC法測定鹽酸左旋咪唑中有關物質[4]，我們擬訂了鹽酸左旋咪唑中對甲苯磺酰氯的測定方法，通過對該方法進行的預試驗，我們確定建立了本文中的測定方法，參照中國藥典附錄ⅩⅨA[5]、美國藥典附錄1226[6]的要求，我們對該方法進行了驗證，確認擬定的方法能有效的檢出鹽酸左旋咪唑中對甲苯磺酰氯。

1 試驗材料

1.1 檢驗儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀（雙檢測器）、XP205電子分析天平。

1.2 對照品：試劑見表1。

表1 試劑表

1.3 藥品：鹽酸左旋咪唑 LV12504。

2 方法和結果

2.1 色譜條件

色譜儀：島津LC-20AT或相當的液相色譜系統。色譜柱：C18（5 μm×4.6 mm×250 mm）。柱溫：30 ℃。流速：1.0 mL/min。進樣量：10 μL。檢測波長：200 nm。檢測器：紫外檢測器、DAD檢測器。流動相：水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺調節pH=4.5）：甲醇=80∶20。

2.2 專屬性/系統適用性試驗

①溶液配制：系統適用性試驗溶液：精密稱取約10 mg對甲苯磺酰氯對照品和鹽酸左旋咪唑對照品置100 mL量瓶中，用2 mL甲醇充分溶解后用流動相稀釋至刻度。②專屬性/系統適用性試驗：鹽酸左旋咪唑與對甲苯磺酰氯峰的分離度為7.82（應≥1.5，各相鄰組分峰的分離度應＞1.5；對甲苯磺酰氯的重復進樣的RSD≤2.0%）。見圖1。

2.3 檢測限與定量限

圖1

2.3.1 試液制備：①預試液配制：精密稱取約20 mg對甲苯磺酰氯對照品置200 mL量瓶中，用2 mL甲醇充分溶解后用流動相稀釋至刻度，再取5 mL置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度。②稀釋液：精密稱取約100 mg鹽酸左旋咪唑置100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度（即供試液濃度1 mg/mL）。

2.3.2 檢測限與定量限：取對照品溶液逐級稀釋，定量限濃度為對甲苯磺酰氯峰信噪比為（10±1）∶1；且定量限濃度時3針所得的對甲茉磺酰氯的重復進樣的RSD≤2.0%。檢測限濃度為對甲苯磺酰氯峰信噪比為（3±1）∶1；檢測限濃度應不＞100 ppm。定時限濃度為：289.7 ppm，檢測限濃度為：97.7 ppm。

2.4 線性范圍

定量限至限度的150%。①線性濃度（表2）。②線性結果：上述各濃度溶液各進樣3針，計算各濃度對甲苯酰氯的峰面呈積平均值，以濃度為橫坐標，對甲苯磺酰氯平均峰面積為縱坐標，計算對甲苯磺酰氯濃度與平均峰面積的線性系數R2為：0.9977。線性范圍：300～600 ppm。

表2 線性濃度表

2.5 精密度

①稀釋劑：精密稱取約30 mg對甲苯磺酰氯置100 mL量瓶中，先加2 mL甲醇溶解用流動相稀釋至刻度，取該溶液1 mL于100 mL量瓶中用流動相稀釋至刻度（即供試液濃度0.003 mg/mL）。②供試液：精密稱取供試品100 mg置100 mL量瓶中用上述稀釋劑稀釋至刻度。③精密度結果：由化驗員A平行配制6份用儀器A每份供試液各進樣1針，6次所得的對甲苯酰氯的含量的RSD為0.81%（應≤2.0%）。

峰表 檢測器 A Ch1 200nm

2.6 中間精密度：由化驗員B平行按2.4項下精密度配制6份用儀器B每份供試液各進樣1針，6次所得的對甲苯酰氯的含量的RSD為0.33%（應≤2.0%）且12份樣的RSD為0.93%（應≤2.0%）

2.7 準確度：分別取定量限濃度、測定濃度的80%、100%、120%4個濃度溶液，測定各濃度樣品中對甲苯磺酰氯的量的平均值，計算回收度，每個濃度的回收率應為80%～120%，測得結果見表3。

表3 準確度表

2.8 耐用性

2.8.1 試液制備

①供試液：按檢驗方法配制供試液，加入對甲苯磺酰氯對照品使其濃度為300 ppm。② 稀釋液：精密稱取約100 mg鹽酸左旋咪唑置100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度（即供試液濃度1 mg/mL）。

2.8.2 耐用性條件變更信結果

①耐用性條件變更：柱溫分別由30變更為25、35；流動相比例由80：20變更為85∶15、75∶25；色譜柱更換為另一根同廠家的型號的色譜柱。②耐用性結果：兩條件下對甲苯磺酰氯含量所得結果計算RSD≤30.0%，兩根色譜柱對甲苯磺酰氯、鹽酸左旋咪唑保留時間相對偏差分別為0.08、0.04。

3 討 論

3.1 流動相的選擇：試驗通過對幾種流動相的試驗比較，結果以水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺調節pH=4.5）：甲醇=80∶20，對甲苯磺酰氯的峰形較好且與鹽酸左旋咪唑峰的分離度也好，故采用其作為試驗的流動相。

3.2 檢測波長的選擇：利用DAD檢測器對對甲苯磺酰氯和鹽酸左旋咪唑波長進行全波長分析，對甲苯磺酰氯在200 nm有最大吸收，鹽酸左旋咪唑在200 nm也有較強吸收，故選200 nm為測定波長。

3.3 溶液穩定性考察：經對照品溶液穩定性考察和供試品溶穩定性考察試驗，對照品溶液在2～8 ℃下可貯存4 d；供試品溶液在室溫下可貯存8 h。

[1] 人用藥品委員會.EMEA基因毒性基因雜質指南[S].2006-07-28.

[2] 人用藥品委員會.EMA基因毒性基因雜質指南問答[S].2010-09-23.

[3] 曾建亭,鐘小燕.HPLC法測定鹽酸左旋咪唑片的含量及溶出度[J].中國熱帶醫學,2010,10(5):21-22.

[4] 左文霞,李洽,任偉,等.復方甲苯咪唑粉中鹽酸左旋咪唑含量的測定飼料研究[J].飼料研究,2011,(8):41-42.

[5] 郭江紅,趙亞萍,吳蔚.HPLC法測定鹽酸左旋咪唑中有關物質[J].中國藥師,2012,(4):512-514.

[6] 中國藥典附錄ⅩⅨ A.藥品質量標準分析方法指導原則[S].

R927.2

B

1671-8194（2014）19-0107-02

*通訊作者