P27KIP1、P21WAF1、Bax在胃腸道間質瘤中的表達及臨床意義

黃 昕，吳云濤，冉龍艷，成元華

(1.貴州電力職工醫院病理科，貴州 貴陽 550002；2.貴州電力職工醫院信息中心，貴州 貴陽 550002；3.貴陽醫學院病理學教研室，貴州 貴陽 550004)

·臨床病理·

P27KIP1、P21WAF1、Bax在胃腸道間質瘤中的表達及臨床意義

黃 昕1，吳云濤2，冉龍艷1，成元華3

(1.貴州電力職工醫院病理科，貴州 貴陽 550002；2.貴州電力職工醫院信息中心，貴州 貴陽 550002；3.貴陽醫學院病理學教研室，貴州 貴陽 550004)

目的探討P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃腸道間質瘤中的表達及其與臨床生物學行為的相關性。方法采用免疫組化法檢測P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃腸道間質瘤中的陽性表達情況，并在良性組、潛在惡性組、惡性病例組之間進行比較。結果55例胃腸道間質瘤中，P27KIP1、P21WAF1和Bax的陽性表達率分別為36.3%、54.5%、60%。P21WAF1、Bax在良性組的表達分別為21.4%、28.6%，而在潛在惡性組、惡性組明顯增高。P27KIP1在良性組的表達率為64.3%，明顯高于潛在惡性組、惡性組(21.4%、29.6%)。P27KIP1、P21WAF1和Bax三者在潛在惡性組、惡性組的表達與良性組比較差異有統計學意義，而潛在惡性組與惡性組之間差異無統計學意義。P27KIP1、P21WAF1和Bax的表達與胃腸道間質瘤患者的性別、年齡、部位、腫瘤大小、有無壞死、組織學分型無關，而與其惡性潛能分級相關。結論P27KIP1的低表達、P21WAF1和Bax的高表達與胃腸道間質瘤臨床惡性潛能密切相關。

胃腸道間質瘤；P27KIP1；P21WAF1；Bax；免疫組織化學

胃腸道間質瘤(Gastrointestinal stromal tumor，GIST)是一種胃腸道最常見的間葉性腫瘤，典型的免疫組化為KIT酪氨酸激酶受體陽性。但從臨床表現而言，從良性，小至中等大小，到明確的肉瘤，其生物學行為難以準確預測，因此，尋找能判斷GIST生物學行為的客觀指標仍然是臨床關注以及病理研究的熱點。本研究通過檢測P27KIP1、P21WAF1、Bax在GIST中的表達，以求探討其與臨床病理特征及生物學行為的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 整理貴陽醫學院附院1995-2006年間術后診斷為胃腸道間葉源性腫瘤的病例，經CD117、CD34、Desmin、SMA、S-100蛋白篩選，結合組織形態學特點，從中確定GIST 55例，其中男性29例，女性26例，中位年齡54.8歲(24～77歲)；病變部位：食管1例，胃23例，小腸10例，結腸6例，直腸8例，盆腔2例，腹壁1例，腹膜后4例。按照Emory等[1]提出的標準將GIST進行分級，其中良性14例，潛在惡性14例，惡性27例。

1.2 檢測方法 (1)取上述存檔的石蠟包埋組織塊，3μm連續切片，常規HE染色和免疫組化染色。(2)檢測P27KIP1、P21WAF1和Bax蛋白采用免疫組織化學—SP法。即用型鼠抗人P27KIP1單克隆抗體(克隆號：ZM-0340)、鼠抗人P21WAF1單克隆抗體(克隆號：ZM-0206)、鼠抗人 Bax單克隆抗體(克隆號ZM-0300)；即用型SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒，以上試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。(3)對照設立。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對照。P27KIP1陽性對照為肺鱗癌上皮、P21WAF1陽性對照為乳腺浸潤型導管癌腺上皮；Bax陽性對照為胃腺癌上皮。

1.3 結果判斷 陽性定位為胞核及胞質出現棕黃色顆粒，且著染細胞數＞10%判斷為陽性，P27KIP1和P21WAF1陽性均定位為細胞核，Bax定位為細胞質。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，計數資料兩樣本率比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

55例GIST組織中，P27KIP1、P21WAF1和Bax的陽性表達率分別為36.3%、54.5%、60%，與臨床病理參數的關系見表1。通過χ2檢驗，不同性別、不同年齡、不同部位、組織學分型、有無壞死之間、腫瘤大小之間，P27KIP1、P21WAF1和Bax的表達差異無統計學意義。良性與潛在惡性之間、良性與惡性之間的陽性表達率差異有統計學意義(P＜0.05)，潛在惡性與惡性之間的陽性表達率差異無統計學意義(P＞0.05)。

表1 P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃腸道間質瘤中的陽性表達[例(%)]

3 討論

P27KIP1通常被認為是一種抑癌基因，具有誘導分化、促進凋亡和抑制增殖的作用。近年研究發現，P27KIP1作為抑癌基因的作用并不表現為基因的缺失或突變，而是以蛋白表達水平的變化起作用，其在蛋白表達水平及活性的改變上與腫瘤形成有關。馮愛強等[2]采用半定量逆轉錄聚合酶鏈方法檢測了乳腺癌組織得出結論P27KIP1的陽性率為51.9%，其表達水平與組織學分級、淋巴轉移程度呈負相關。本實驗發現：P27KIP1的表達隨著惡性程度的增加，P27KIP1蛋白表達明顯降低，由64.3%降為21.4%，36.3%，良性組與潛在惡性組、惡性組之間陽性表達差異有統計學意義。結果證實P27KIP1蛋白的低表達提示GIST惡性潛能的增加，應用免疫組化技術測定GIST中P27KIP1蛋白的表達情況，可作為判斷腫瘤的惡性程度的參考指標。

P21WAF1作為腫瘤抑制基因，在腫瘤的發生發展中起重要作用。其與多種腫瘤的發生、發展及預后有關，但P21WAF1的表達在不同組織表達有所差異。李蓉等[3]報道P21在非萎縮胃炎、萎縮胃炎、疣狀胃炎及胃癌組織的表達分別為0、22.5%、35%、60%，金建云等[4]報道結直腸癌中正常、癌前、癌旁、癌分別為23.43%、21.78%、26.91%和12.82%。本實驗發現：P21WAF1表達與GIST患者性別、年齡、腫瘤部位、組織學分型、大小、有無壞死無關，隨著惡性程度的增加，P21WAF1蛋白表達增高，由良性的21.4%增為潛在惡性的64.2%，惡性的66.7%。在良性和潛在惡性或惡性GIST之間P21WAF1的陽性表達率差異有統計學意義，P21WAF1表達高可能有助于遏制GIST中腫瘤細胞的無限增生。因此，檢測GIST組織中P21WAF1表達水平有助于了解GIST的生物學行為。

Bax作為促細胞凋亡基因蛋白，既可以直接影響線粒體功能，又可以間接通過降低某些化療藥物對細胞凋亡的耐受力，而誘導細胞凋亡。盧明書等[5]報道胃癌組織中高分化腺癌的細胞凋亡指數顯著高于低分化腺癌和黏液癌，胃癌組織中Bax表達為35.1%，明顯低于非癌組織。本研究表明，Bax的表達與胃腸道間質瘤患者的性別、年齡、部位、腫瘤大小、有無壞死、組織學分型無關，隨著惡性程度的增加，表達增高，其表達率在良性組和潛在惡性、惡性組之間差異有統計學意義，這對我們判斷惡性潛能有輔助意義，因此檢測GIST組織中Bax表達水平有助于了解GIST的生物學行為。

通過本研究，我們發現隨著胃腸道間質瘤惡性潛能的增加，P27KIP1的表達會明顯減少、P21WAF1和Bax的表達會顯著增加，而且其蛋白水平的改變與GIST患者的性別、年齡、部位、腫瘤大小、有無壞死、組織學分型無相關性，這對日常臨床病理診斷工作判斷其生物學行為、評估預后有較好的提示作用，并且對實驗室而言，免疫組織化學染色方法容易開展，臨床病理診斷中可通過免疫組化測定其表達情況，作為判斷惡性潛能的輔助指標。

[1]Emory TS,Sobin LH,Lukes L,et al.Prognosis of gastrointestinal smooth muscle(stromal)tumors:dependence on anatomic site[J]. Am J Surg Pathol,1999,23(1):82-87

[2]馮愛強,李蕾蕾.SKP2和P27KIP1在乳腺癌組織中的表達及其相關性的研究[J].天津醫藥,2012,40(5):424-426.

[3]李 蓉,趙夢云,張永紅,等.不同類型的胃炎和胃癌組織中p21、p16蛋白的表達及臨床意義[J].海南醫學,2013,24(20):2968-2969.

[4]金建云,王海波.Cyclin D1、P21WAF1在結直腸癌中的表達及其臨床意義[J].山東醫藥,2011,51(49):82-83

[5]盧書明,張竹青,潘 科,等.胃癌組織p57kip2和Bax蛋白的表達及其凋亡的關系[J].臨床腫瘤學雜志,2011,16(12):1084-1087.

Expression and significance of P27KIP1,P21WAF1,Bax in gastrointestinal stromal tumors.

HUANG Xin1,WU Yun-tao2,RAN Long-yan1,CHEN Yuan-hua3.
1.Department of Pathology,Guizhou Hospital of Electricity Power,Guizhou 550002,Guiyang,CHINA;2.Information Center,Guizhou Hospital of Electricity Power,Guizhou 550002,Guiyang, CHINA;3.Department of Pathology,Guiyang Medical School,Guizhou 550004,Guiyang,CHINA

ObjectiveTo investigate the correlation between biological behavior and expression of P27KIP1, P21WAF1and Bax in gastrointestinal stromal tumors.MethodsImmunohistochemical method was used to detect P27KIP1,P21WAF1and Bax expression in 55 cases of GIST,which were compared among benign GIST,potential malignant GIST,and malignant GIST.ResultsIn 55 cases of GIST,the positive expression rates of P27KIP1,P21WAF1and Bax were 36.3%,54.5%,60%.The expression rate of P21WAF1and Bax were 21.4%,28.6%in benign GIST,which were significantly increased in potential malignant GIST and malignant GIST.The expression rate of P27KIP1in benign GIST(64.3%)was significantly higher than that in potential malignant GIST(21.4%)and malignant GIST(29.6%). The expression rate of P27KIP1,P21WAF1and Bax showed statistically significant difference between benign GIST and potential malignant GIST,malignant GIST,but showed no statistically significant difference between potential malignant GIST and malignant GIST.The expressions of P27KIP1,P21WAF1and Bax showed no correlation with age,sex,location, size,necrosis and histological scheme,but they were related with the malignant progression.ConclusionThe low expression of P27KIP1,the high expression of P21WAF1and Bax are closely related to clinical malignant potential of GIST.

Gastrointestinal stromal tumors;P27KIP1;P21WAF1;Bax;Immunohistochemistry

R735

A

1003—6350（2014）24—3717—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.24.1448

2014-05-14)

黃 昕。E-mail：380666970@qq.com