鼻內糖皮質激素對鼻息肉組織中EGF和EGFR表達的影響

劉志標，劉收厚，湯 晨，馬永馳

(南京醫科大學附屬淮安第一醫院耳鼻喉科，江蘇 淮安 223300)

鼻內糖皮質激素對鼻息肉組織中EGF和EGFR表達的影響

劉志標，劉收厚，湯 晨，馬永馳

(南京醫科大學附屬淮安第一醫院耳鼻喉科，江蘇 淮安 223300)

目的探討鼻內應用糖皮質激素對鼻息肉組織中表皮細胞生長因子(EGF)和表皮細胞生長因子受體(EGFR)表達的影響。方法鼻息肉患者42例，隨機分為激素組(布地奈德鼻噴霧劑128 μg/次，2次/d，療程12周)和對照組(生理鹽水噴鼻，2次/d，療程12周)，每組21例，采用鼻息肉內鏡評分評估鼻息肉治療效果，同時采用免疫組織化學染色方法檢測兩組鼻息肉組織中EGF和EGFR的表達情況。結果與對照組比較，激素組鼻息肉內鏡評分下降(P＜0.05)，黏膜上皮細胞EGF[(0.15±0.04)vs(0.24±0.06)]的表達減少(P＜0.05)，EGFR的表達無差異無統計學意義(P＞0.05)。結論糖皮質激素能抑制鼻息肉黏膜上皮細胞EGF的表達，對EGFR的表達無影響，這可能是其治療鼻息肉的作用機制之一。

糖皮質激素；鼻息肉；表皮細胞生長因子；表皮細胞生長因子受體

糖皮質激素是臨床治療鼻息肉的最有效藥物，能顯著改善患者的臨床癥狀，但具體作用機制未能完全闡明[1]。研究證實鼻息肉組織中高表達的表皮細胞生長因子(EGF)和表皮細胞生長因子受體(EGFR)與鼻息肉的發生和發展有關[2]。為了研究糖皮質激素對鼻息肉的治療機制，筆者采用免疫組織化學染色的方法，檢測糖皮質激素對鼻息肉組織中EGF和EGFR表達的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2013年1月在我院門診被確診為慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉的患者42例，其中男性29例，女性13例；年齡16～56歲，平均(31.7±2.5)歲；病程6個月至12年，平均(1.2±0.6)年。以數字表法將患者隨機分成激素組和對照組各21例。其中激素組中男性15例，女性6例；年齡16～55歲，平均(30.7±2.2)歲；病程6個月至8年，平均(1.8±0.5)年。對照組中男性14例，女性7例；年齡18～56歲，平均(32.5±2.8)歲；病程7個月至12年，平均(1.6±0.7)年。兩組患者在性別、年齡及病程等方面比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法 所有患者治療前均充分交代病情及治療方案。于治療開始前行鼻內鏡檢查并對鼻息肉大小進行評估。激素組治療開始后給予鼻腔應用布地奈德鼻噴劑鼻治療(128 μg/次，2次/d)，對照組治療開始后給予鼻腔應用生理鹽水噴鼻(2次/d)，療程12周結束后行鼻內鏡檢查并對鼻息肉大小進行評估，同時經門診或手術室取小塊鼻息肉組織標本制成石蠟塊。實驗前一個月全身或局部使用免疫抑制劑、任何其他種類鼻噴劑患者及有糖皮質激素使用禁忌患者都被排除在外。

1.3 免疫組織化學染色 石蠟塊連續切片后行HE染色和免疫組織化學染色。免疫組織化學染色采用ELIVISON二步法，所用一抗Rabbit Anti-EGF、Rabbit Anti-EGFR購自武漢博士德生物工程有限公司，ELIVISON試劑盒購自北京中杉生物技術開發公司。以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗設立陰性對照，以排除非特異性染色。以鼻息肉組織中胞漿呈現棕黃染色為陽性細胞，觀察EGF和EGFR在實驗組和對照組中的表達情況，采用ImageJ醫學圖像處理軟件，計算圖像的灰度值，依據公式計算吸光度[3]，以吸光度的大小代表陽性細胞EGF和EGFR分子的表達強度。隨機抽取同一標本的2張切片，每張切片上隨機取5個400倍視野，分別計算黏膜上皮細胞、炎癥細胞、腺體細胞的吸光度，取平均值。

1.4 療效評估 鼻息肉治療效果采用鼻息肉內鏡評分：0=無息肉，1=小息肉不超過下鼻甲上緣，2=息肉位于下鼻甲上緣和下緣之間，3=鼻息肉超過下鼻甲下緣，雙側鼻內鏡評分之和為該患者鼻息肉內鏡評分。為了方便對療效的評估，將鼻息肉內鏡評分分為三個等級：1～2分為Ⅰ級，3～4分為Ⅱ級，5～6分為Ⅲ級，以內鏡評分下降一級表示有效[4]。對治療前以及治療后12周時患者的評分情況實施統計并對比。

1.5 統計學方法 應用SPSS11.5軟件包對結果數據進行統計學分析，計量資料以均數±標準差()表示，采用兩獨立樣本的t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 鼻息肉內鏡評級結果 激素組鼻息肉內鏡評級治療有效10例，無效11例，有效率為47.62%；對照組內鏡評級鼻息肉內鏡評級治療有效3例，無效18例，有效率為14.29%。激素組的療效高于對照組(P＜0.05)。鼻息肉大小對鼻內糖皮質激素治療效果有影響，鼻內鏡評級為Ⅱ級的鼻息肉的療效(61.54%)高于Ⅰ級(0%)和Ⅲ級(50%)，差異具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 免疫組織化學染檢測結果 免疫組織化學染色顯示EGF在兩組鼻息肉組織上皮細胞、炎癥細胞、腺體細胞的胞漿中均有表達，陽性細胞被染成棕黃色。EGF在激素組黏膜上皮細胞的表達低于其在對照組黏膜上皮細胞的表達，兩組的差異具有統計學意義(P＜0.05)。EGF在兩組鼻息肉黏膜下固有層的炎癥細胞、腺體細胞表達差異無統計學意義(均P＞0.05)。結果見表2、圖1～圖2。

表1 治療前后鼻息肉內鏡評級(例)

表2 兩組EGF、EGFR的表達()

表2 兩組EGF、EGFR的表達()

21 21對照組激素組t值P值0.24±0.06 0.15±0.04 7.80＜0.05 0.14±0.04 0.11±0.03 1.34 0.05 0.16±0.01 0.09±0.02 1.93＞0.05 0.12±0.04 0.10±0.03 1.23＞0.05 0.10±0.03 0.08±0.02 0.85＞0.05

圖1 激素組鼻息肉EGF染色(×200)

圖2 對照組鼻息肉EGF染色(×200)

免疫組織化學染色顯示EGFR在兩組鼻息肉組織上皮細胞、腺體細胞的胞漿中均有表達，陽性細胞被染成棕黃色，差異無統計學意義(均P＞0.05)。結果見表2、圖3～圖4。

圖3 激素組鼻息肉EGFR染色(×200)

圖4 對照組鼻息肉EGFR染色(×200)

3 討論

鼻內糖皮質激素是臨床治療慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉的有效藥物，推薦治療時間不少于12周[5]，在治療劑量下長期使用，幾乎無全身不良反應，局部不良反應也極輕微[6]。使用鼻內糖皮質激素能縮小鼻息肉的體積，改善患者的主、客觀癥狀[7-8]。本研究在給予糖皮質激素治療后，有47.62%的患者鼻息肉體積縮小，但縮小的程度有限，12周的治療只能降低鼻息肉體積一個級別，且沒有發現鼻息肉根治的病例。同時還發現鼻腔局部使用糖皮質激素療效受鼻息肉體積影響比較大，鼻內鏡評級Ⅱ級的鼻息肉的療效最佳，Ⅲ級鼻息肉治療效果較差，這可能與鼻腔內鼻息肉體積較大，妨礙了藥物進入鼻腔深部有關。雖難目前糖皮質激素治療鼻息肉的療效得到了肯定，但是對于鼻內糖皮質激素縮小鼻息肉的體積的機制仍不十分清楚。

Soyka等[9]發現鼻黏膜上皮細胞在鼻息肉的發病過程中發揮了重要作用。在鼻息肉形成過程中，上皮細胞的完整性被破壞，出現上皮細胞缺損。上皮缺損使上皮細胞的增殖活性增強，損傷周圍區域未分化的基底層細胞會沿著暴露的基底膜向缺損中央遷移，并增殖分化為纖毛柱狀上皮細胞、無纖毛柱狀上皮細胞、杯狀細胞等。這一過程需要多種細胞因子和生長因子的參與和調節[10-11]。肖軍等[2]和Ding等[12]的研究證實EGF和EGFR參與了這一過程，鼻息肉組織黏膜纖毛上皮細胞能大量合成和分泌EGF，相應的鼻息肉組織中基底層細胞EGFR表達也增強，纖毛上皮細胞分泌的EGF與基底層細胞的EGFR結合，促進基底層細胞分裂和生長，同時基底層細胞在標準型白細胞分化抗原44(CD44s)等粘附分子的作用下，向損傷中心遷移，從而完成整個修復過程。

鼻息肉上皮細胞存在糖皮質激素受體，糖皮質激素結合受體后，能抑制鼻息肉上皮細胞的增殖[13-14]，而鼻息肉上皮細胞的增殖活性和EGF和EGFR有關，因此筆者采用免疫組織化學的方法研究糖皮質激素治療對鼻息肉組織中EGF和EGFR表達的影響。結果發現在鼻息肉上皮細胞、腺體細胞均有EGF和EGFR的表達，炎癥細胞中只有EGF的表達，使用鼻內糖皮質能抑制鼻息肉上皮細胞的EGF的表達，但對腺體細胞、炎癥細胞的EGF和上皮細胞、腺體細胞的EGFR表達不產生抑制作用。鼻內糖皮質激素僅對鼻息肉上皮細胞EGF產生抑制作用，推測這可能和鼻息肉組織上皮細胞存在糖皮質激素受體且接觸鼻內糖皮質激素劑量最大有關。

本研究結果表明鼻內糖皮質激素對鼻息肉具有一定的治療效果，其機制可能是通過抑制鼻息肉上皮細胞EGF的表達進而抑制上皮細胞的增殖活性。但是對于糖皮質激素對上皮細胞EGF的抑制作用是通過減輕炎癥對黏膜上皮的損傷從而減少EGF分子的表達，還是直接抑制EGF的合成，具體還不清楚，需要以后進一步的研究。

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Effects of intranasal glucocorticoid on the expression of EGF and EGFR in nasal polyps.

LIU Zhi-biao,LIUShou-hou,TANG Chen,MA Yong-chi.

Department of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery,Huai'an First People's Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huai'an 223300,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo explore the effects of intranasal glucocorticoid on the expression of epidermal growth factor(EGF)and epidermal growth factor receptor(EGFR)in nasal polyps.MethodsForty-two patients with nasal polyps were equally randomized divided into two groups:group A(n=21,treated with budesonide 128 μg, BID,12 weeks)and group B(n=21,normal saline,BID,12 weeks).The expression of EGF and EGFR in nasal polyps were detected with immunohistochemistry and the therapeutic effect of nasal polyps were evaluated with the nasal endoscopic score system.ResultsThe expression of EGF in the epithelial cells[(0.15±0.04)vs(0.24±0.06)]and endoscopic staging of nasal polyps were significantly lower in group A than that in group B(P＜0.05).The expression of EGFR in group B did not differ significantly from group A(P＞0.05).ConclusionInhibiting the expression of EGF and not EGFR in the epithelial cells of nasal polyps may be one of mechanisms for the therapeutic effect of intranasal glucocorticoid on the nasal polyps．

Glucocorticoid;Nasal polyps;Epidermal growth factor(EGF);Epidermal growth factor receptor (EGFR)

R765.25

A

1003—6350（2014）24—3643—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.24.1420

2014-05-02)

劉志標。E-mail：liuzhibiao321@126.com