甘肅道地中藥大黃、黃芩對(duì)多重耐藥菌的抑菌活性

梁 勤，喬登嫣，馬小明，羅向霞，李喜香，周思彤，竇嬌瑩

甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050

方 藥·道地藥材

甘肅道地中藥大黃、黃芩對(duì)多重耐藥菌的抑菌活性

梁 勤，喬登嫣△，馬小明，羅向霞，李喜香，周思彤，竇嬌瑩

甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050

目的：觀察甘肅道地中藥材大黃、黃芩的體外抑菌活性，為臨床中藥治療耐藥菌感染提供參考。方法：采用煎煮法制備大黃、黃芩中藥原液，用肉湯稀釋法測(cè)定兩種藥液對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌濃度。結(jié)果：大黃對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸桿菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌濃度分別為250mg/mL和125mg/mL。黃芩對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（M RSA）的最小抑菌濃度為250 mg/mL；對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸桿菌未見(jiàn)明顯抑菌作用。結(jié)論：大黃、黃芩對(duì)臨床常見(jiàn)的多重耐藥菌有不同程度的抑菌活性，且大黃的抑菌活性優(yōu)于黃芩；大黃對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性優(yōu)于大腸埃希菌。

大黃；黃芩；多重耐藥菌；抑菌

多重耐藥細(xì)菌感染的治療是臨床棘手問(wèn)題，而細(xì)菌的耐藥性多來(lái)自于耐藥質(zhì)粒的傳播。中藥不易產(chǎn)生藥物殘留，可避免產(chǎn)生耐藥性，也不會(huì)造成環(huán)境污染，且種類繁多，資源豐富，屬天然植物藥，具有毒副作用小、應(yīng)用安全、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)。相關(guān)研究顯示，中草藥對(duì)耐藥（R）質(zhì)粒有消除作用［1-6］，本研究選取甘肅省道地中藥中的大黃和黃芩，檢測(cè)二者對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌及耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的抑菌活性，以期為中藥治療耐藥菌感染提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株 本組產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌菌株均由甘肅省中醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物室依照CLS I文件要求從臨床標(biāo)本中分離并鑒定。

1.2 器材 M-H（Muellle r-Hinton）瓊脂平板（麥迪公司提供）；M-H肉湯、營(yíng)養(yǎng)肉湯、營(yíng)養(yǎng)瓊脂干粉（均由杭州微生物有限公司生產(chǎn)）；XK96-A快速混勻器（姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)）；7 2 1分光光度計(jì)（山東高密彩虹分析儀器有限公司生產(chǎn)）。

1.3 中藥的選擇與提取 兩種中藥制劑均由甘肅省中醫(yī)院藥劑科用煎煮法制備。大黃、黃芩濃縮提取，濃度均為1g/m L，經(jīng)121℃下滅菌2 0分鐘，-2 0℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 藥液制備 排列無(wú)菌試管10支，于第2～10管中各加無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯5mL，取大黃10mL，于第一管中加入5mL，第2管中加入5mL，將第2管中溶液混合后取出5mL，加入第3管，再混合后取出5mL，加入第4管，如此連續(xù)稀釋至第9管，取出5mL棄掉，第10管僅為無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯做對(duì)照，則第1～10管為不同濃度藥液5mL。黃芩制備方法同大黃。最終每支試管的藥物濃度為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.82、3.91、0mg/m L。

1.5 菌液制備 將兩種菌株分別用M-H肉湯35℃培養(yǎng)2～6小時(shí)，用M-H肉湯稀釋菌液到0.5麥?zhǔn)媳葷峁軡岫龋?21分光光度計(jì)625 n m吸光度為0.08～0.10），約含菌1～2×108cfu/m L。

1.6 抑菌實(shí)驗(yàn) 將“1.4”項(xiàng)下配好的菌液分別加入“1.5”項(xiàng)下稀釋的兩種藥液中，每管加菌液1mL，置3 5℃孵廂培養(yǎng)24～48小時(shí)，于24、48小時(shí)時(shí)分別吸取0.1mL轉(zhuǎn)種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板一次，置35℃孵廂培養(yǎng)4 8小時(shí)觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，判斷中藥的最小抑菌濃度。

2 結(jié)果

大黃對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌濃度分別為25 0mg/mL和125m g/m L；黃芩對(duì)MRSA的最小抑菌濃度為250mg/m L；對(duì)ESBLs大腸桿菌未見(jiàn)明顯抑菌作用，見(jiàn)表1。

表1 大黃、黃芩對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的M ICmg/mL

3 討論

相關(guān)報(bào)告數(shù)據(jù)顯示引起醫(yī)院感染的病原菌分離率最高的革蘭氏陰性菌是大腸埃希菌，陽(yáng)性菌為金黃色葡萄球菌，且高耐抗生素的產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌和MRSA分離率高達(dá)70.4%和56.5%［7］。所以尋求有良好抑菌作用的中藥成為目前研究的熱點(diǎn)。

本研究結(jié)果表明，大黃對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌和MRSA有較好的抑制作用，與費(fèi)娜等［8］研究結(jié)果相符。黃芩對(duì)MRSA有抑制作用，與蘇廣珠等［9］的研究結(jié)果類似；對(duì)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌未見(jiàn)明顯抑菌作用，說(shuō)明不同藥物在MRSA最小抑菌濃度方面差異明顯；同一種藥物對(duì)MRSA和產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌可表現(xiàn)出不同的抑菌濃度；經(jīng)稀釋的黃芩沒(méi)有表現(xiàn)出明顯抑菌濃度，其原因可能是本實(shí)驗(yàn)采用的煎煮方法不利于提取其有效抑菌成分。需要強(qiáng)調(diào)的是，中藥對(duì)厭氧菌的藥物敏感性實(shí)驗(yàn)還沒(méi)有制定統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，且需要進(jìn)一步規(guī)范中藥的品種、產(chǎn)地、炮制方法，以便為中藥治療厭氧菌感染提供更科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)［10］。近年來(lái)隨著抗生素的廣泛使用，由金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的院內(nèi)感染的發(fā)生率也逐年升高，臨床多可出現(xiàn)對(duì)多種抗菌藥物耐藥，且此細(xì)菌分布廣、傳播快，故臨床對(duì)其感染者的治療較為困難。本研究結(jié)果表明黃芩、大黃對(duì)常見(jiàn)院內(nèi)感染細(xì)菌具有抑制作用。

［1］鞠洪濤，韓文瑜.中草藥消除大腸埃希氏菌耐藥性及耐藥質(zhì)粒的研究［J］.中國(guó)獸醫(yī)科技，2000，30（3）：27-29.

［2］彭元麗，鄒坤，陳國(guó)華.中藥消除大腸桿菌耐藥質(zhì)粒研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（1）：139-140.

［3］黃金珠，雍剛，廖菁，等.土茯苓加減方對(duì)淋病奈瑟菌耐藥質(zhì)粒的消除作用［J］.實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2010，7（6）：35-37.

［4］肖瀟，李英倫，楊銳.復(fù)方蒲公英對(duì)金黃色葡萄球菌耐藥質(zhì)粒的體外消除試驗(yàn)［J］.中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2010，40（3）：307-311.

［5］王永芬，席磊，邊傳周，等.豬致病性大腸桿菌耐藥質(zhì)粒檢測(cè)及其中藥消除作用研究［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，33（12）：932-935.

［6］陳世彪.3種中藥對(duì)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶金黃色葡萄球菌R質(zhì)粒的消除作用［J］.畜牧與獸醫(yī)，2010，42（1）：81-83.

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［9］蘇廣珠，賀坤，裴鳳艷.6種中草藥抑菌活性的研究［J］.中國(guó)臨床研究，2012，25（8）：801-802.

［10］史躍杰.黃芩黃連水煎劑對(duì)厭氧菌的體外抑菌活性［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（17）：226-227.

Antibacterial Activity of Gansu Genuine Herbs DaHuang and HuangQin on Multiple Resistant Bacteria

LIANG Qin，QIAO Dengyan△，MA Xiaoming，LUO Xiangxia，LI Xixiang，ZHOU Sitong，DOU Jiaoying
Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China

Objective：To provide reference for herbs in treating drug resistant bacteria infection by observing antibacterial activity of Gansu genuine herbs DaHuang（Rheum palmatum L.）and HuangQin（Scutellaria Baicalensis）in vitro.Methods：The decoctions of DaHuang and HuangQin were prepared，the minimum antibacterial concentrations of two kinds of decoctions for extended spectrum β lactamases（ESBLs）E.coli and methicillin-resistant staphylococcus aureus（MRSA）were detected with broth dilution method.Results：The minimum antibacterial concentrations of DaHuang for producting ESBLs E.coli and MRSA were 250mg/mL and 125 mg/mL.The minimum antibacterial concentrations of HuangQin for producting MRSA were 250mg/mL，and it didn′t show notable antibacterial function to ESBLs E.coli.Conclusion：DaHuang and HuangQin show different degrees of antibacterial activity to common multiple resistant bacteria，and antibacterial activity of DaHuang is superior to that of HuangQin；antibacterial activity of DaHuang to MRSA is superior to that of ESBLs E.coli.

DaHuang；HuangQin；multiple resistant bacteria；antibacterial Activity

R284

A

1004-6852（2014）05-0005-03

2014-01-10

梁勤（1972—），女，副主任檢驗(yàn)師。研究方向：臨床檢驗(yàn)及微生物學(xué)檢驗(yàn)。

△通訊作者：?jiǎn)痰擎蹋?973—），女，副主任檢驗(yàn)師。研究方向：臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)。