前列腺癌組織BSP表達與骨轉移的相關性探討

余書勇，朱其聰，毛高才，呂 揚，王亞輝，楊 琳

（中國人民解放軍第187醫院腫瘤中心1、病理科2、檢驗科3，海南 海口 571159）

前列腺癌組織BSP表達與骨轉移的相關性探討

余書勇1，朱其聰1，毛高才2，呂 揚3，王亞輝1，楊 琳1

（中國人民解放軍第187醫院腫瘤中心1、病理科2、檢驗科3，海南 海口 571159）

目的探討前列腺癌(PCa)組織中骨唾液酸蛋白(BSP)的表達與骨轉移的關系。方法收集2006年1月1日至2013年6月30日間我院收治的PCa患者68例，以良性前列腺增生（BPH）患者22例作為對照組，采用免疫組織化學SP法檢測PCa或前列腺增生組織BSP表達，并結合腫瘤的病理學行為和臨床隨訪資料進行分析。結果PCa組織的BSP表達陽性率為76.47%，顯著高于BPH組織的13.64%，差異有統計學意義(P＜0.001)。PCa組織的BSP表達與腫瘤病理分期(χ2=9.338，P=0.009)、遠處轉移(χ2=6.38，P=0.012)密切相關，而與患者年齡(χ2= 0.593，P=0.441)、病理分級(χ2=0.057，P=0.972)、淋巴結轉移(χ2=0.126，P=0.722)均無相關。52例BSP表達陽性的PCa患者術前血清總前列腺特異性抗原(tPSA)含量為(69.06±25.52)μg/L，16例BSP陰性患者血清tPSA含量為(38.00±21.64)μg/L，兩者差異有統計學意義(F=19.355，P＜0.001)。BSP表達陽性的PCa患者骨轉移發生率(71.15%，37/52)高于BSP陰性患者(25.0%，4/16)(χ2=10.887，P=0.001)。結論前列腺癌BSP表達與其骨轉移密切相關，其有可能作為預測PCa骨轉移的標志物。

PCa；骨唾液酸蛋白；骨轉移；免疫組織化學

前列腺癌(Prostate cancer，PCa)在疾病發展過程中有65%～75%的患者將發生骨轉移，但有約80%的骨轉移患者因無臨床表現而影響了早期診斷。目前診斷PCa骨轉移主要是根據影像學檢查，缺乏有效的骨轉移生化標志物。近年來，骨唾液酸蛋白(Bone sialoprotein，BSP)作為新的骨代謝標志物在骨轉移癌早期診斷中得到廣泛研究。本研究旨在探討BSP在PCa中的表達與骨轉移的關系，以期對高危人群予以預防性治療，防治骨轉移的發生，從而降低PCa骨轉移的發生率，提高患者的生活質量。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2006年1月1日至2013年6月30日間我院前列腺根治手術摘除或者經尿道前列腺電切術切除，經病理檢查證實為PCa的蠟塊標本68例?；颊呔鶠槌踔握撸g前未經內分泌治療或放療，年齡46～81歲，中位年齡65歲。病理分級采用2005年國際泌尿病理協會修訂的Gleason分級系統，其中分化良好癌16例，中等分化癌40例，分化不良癌12例。病理分期按國際TNM(AJCC，2002年)分期標準，其中pT2 37例，pT3 21例，pT4 10例。選取我院同期手術切除的良性前列腺增生(Benign prostatic yperplasia，BPH)組織蠟塊標本22例作為對照，患者年齡47～75歲，中位年齡64歲。68例PCa患者術后隨訪6個月～6年，有淋巴結轉移45例，遠處轉移47例；其中骨轉移41例，無骨轉移27例。

1.2 主要儀器與試劑 主要試劑：兔抗人單克隆BSP抗體(濃縮液)購自英國Abcam公司，即用型SP試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司，濃縮型DAB顯色試劑盒(20X)購自福州邁新生物技術開發有限公司。主要儀器：OlympysCX31光學顯微鏡，日本Olympys公司產品。

1.3 方法

1.3.1 BSP檢測實驗步驟 采用SP二步法進行BSP的免疫組織化學染色。石蠟切片常規脫蠟至水，3%H2O2室溫孵育20 min，以消除內源性過氧化物酶活性，蒸餾水沖洗5 min×2次，放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液(即抗原修復液)的抗原修復盒中，微波爐內進行抗原修復20 min，冷卻至室溫。PBS沖洗5 min×2次。滴加兔抗人單克隆BSP抗體(一抗)，工作濃度：l: 300，4℃過夜；次日PBS沖洗，5 min×3次；滴加即用型酶標羊抗兔IgG聚合物(二抗)，37℃孵育25 min；PBS沖洗，5 min×3次。DAB顯色劑(工作液)顯色。自來水充分沖洗，復染，封片。對照染色：以已知BSP的陽性切片作為對照，以0.0l mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為每次染色的陰性對照。

1.3.2 血清總前列腺特異性抗原(tPSA)測定 清晨空腹采集外周血，分離血清置-20℃保存待測。采用電化學發光法檢測PCa患者術前血清tPSA的含量。tPSA試劑盒購自德國Roche Diagnostic GmbH公司，按說明書進行操作。

1.4 研究方法 采用實驗法來探討前列腺癌BSP表達及其與骨轉移的相關性。

1.5 結果判定 每張切片觀察5個高倍視野，BSP表達陽性細胞染色為胞漿明顯棕黃或棕褐色，陽性細胞數≤25%為陰性；25%～80%為弱陽性(+)；≥80%為強陽性(++)。

1.6 統計學方法 采用SPSS10.0軟件進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗。計量資料以均數±標準差()表示，采用方差分析(One-Way ANOVA)進行多組間比較，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 BSP在PCa與BPH組織中的表達情況 68例PCa石蠟標本切片后，常規SP法免疫組織化學染色發現52例(76.47%)標本均有+～++的陽性染色，染色部位主要位于癌細胞胞漿，大多數為均質性(見圖1)，也有少數為顆粒狀(見圖2)，而周邊正常腺組織無或低表達BSP(見圖3)。22例BPH患者標本中有3例(13.64%)呈低表達BSP，其余均無表達BSP。BSP表達率在PCa與BPH間比較差異有統計學意義(χ2= 27.614，P＜0.001)。

圖3 BSP染色呈陰性（SP×400）

2.2 PCa組織中BSP的表達及其與年齡、病理分級、病理分期、轉移、血清tPSA的關系 68例PCa組織中，BSP表達率與年齡、病理分級、有無淋巴結轉移無關(P＞0.05)；而與病理分期、遠處轉移有關(P＜ 0.05)，見表1。52例BSP陽性表達的PCa患者術前血清tPSA含量為(69.06±25.52)μg/L，16例BSP陰性患者血清tPSA含量為(38.00±21.64)μg/L，兩者差異有統計學意義(F=19.355，P＜0.001)。

表1 BSP在PCa組織中的表達及其與臨床有關參數的相關性（例）

2.3 BSP表達與骨轉移的關系 52例BSP表達陽性的PCa患者骨轉移發生率為71.15%，16例BSP陰性患者骨轉移發生率為25.0%，兩者差異有統計學意義(χ2=10.887，P=0.001)。

3 討論

PCa是最易發生骨轉移的惡性腫瘤之一，死于PCa的患者中85%～100%合并骨轉移。據統計局限性無轉移的PCa患者90%生存期可超過10年，而發生骨轉移后生存期平均不超過3年。故探尋腫瘤骨轉移的生物標記物，對骨轉移進行早期診斷、早期治療是目前研究的方向。PSA已被廣泛應用于PCa的早期篩查[1]，每年普查1次血清PSA和直腸指檢，使PCa患者的轉移率下降了75%，同時也提高了隱匿性PCa的發現率[2]，盡管這種簡便的PCa篩查方法有其不可替代的優越性，也存在很多不足，需要辨證考慮其臨床實際意義。臨床上若能結合其他標志物檢測，對PCa診療更具有指導意義。目前，國內外研究較多的其他標志物中，BSP最可能成為一種骨轉移的標志物。

BSP是細胞外基質中的一種酸性糖蛋白，主要由成骨細胞、破骨細胞及軟骨細胞合成，其分布相對局限，主要在礦化組織特異性表達[3]，在胎盤滋養層細胞、血小板和多種骨轉移瘤中也能檢測到BSP的表達。正常人群血清BSP濃度為2～24 ng/ml[4]。BSP是通過與整合素家族中受體識別，介導細胞粘附和細胞遷移作用[5-6]。整合素是BSP的主要受體，是一類細胞膜表面的糖蛋白受體家族分子。BSP也是一種重要的細胞因子，在介導細胞擴散、移動，與基質間的粘附、骨組織礦化與重建、免疫調節、信號轉導等過程中發揮重要作用[7-8]。

自1994年Bellahcène等[9]首次闡述了BSP在人乳腺癌轉移組織中表達以來，許多臨床及試驗研究均證實，BSP與腫瘤的發生及侵襲轉移密切相關[10]，其在乳腺癌、肺癌、甲狀腺癌、多發性骨髓瘤、黑色素瘤等腫瘤組織中高表達，而且在乳腺癌或PCa的骨轉移腫瘤中BSP表達顯著高于其他內臟轉移腫瘤[11]。BSP在骨轉移中起著重要作用，其可調節破骨細胞粘附能力，激活破骨細胞功能，促進腫瘤細胞向骨組織侵襲、遷移、粘附和增殖。血清BSP含量可反映破骨細胞活性和骨吸收過程。國內何建軍等[12]研究發現PCa骨轉移患者外周血清中BSP含量明顯高于無骨轉移者，通過測定血清BSP含量用來診斷骨轉移的特異度和靈敏度分為72.8%和71.12%；鄧立春等[13]也報道BSP診斷骨轉移的特異性和敏感度分別為71.4%和84.20%。國外Jain等[14]研究102例PCa患者在晚期階段血清BSP濃度顯著增高。因此，BSP被認為是一種可用于評價骨轉移的早期、獨立的標志物，而且，在眾多的骨轉移標志物中，BSP是最有希望成為靶向治療的骨轉移標志物。

本研究發現大多數PCa高表達BSP，其陽性率為76.47%，且BSP表達與PCa病理分期、術前tPSA、周圍淋巴結的轉移、遠處轉移顯著相關，而與患者年齡、病理類型均無相關。BSP表達陽性PCa患者，術后骨轉移發生率顯著增高，這與國內外研究結果一致。

綜上所述，BSP在PCa中高表達，其在PCa的發生、發展、臨床進展和浸潤轉移的病理過程中起著重要作用，尤其與骨轉移密切相關，有助于PCa的診斷、惡性程度的評估，并能為臨床醫生判斷患者預后提供重要的線索，可作為預測PCa骨轉移的標志物，但其價值尚待擴大樣本量進行更進一步的探索。

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Association between the BSP expression and bone metastasis in prostate cancer tissue.

YU Shu-yong1,ZHU Qi-cong1,MAO Gao-cai2,LV Yang3,WANG Ya-hui1,YANG Lin1.Department of Oncology1,Department of Pathology2, Department of Clinical Laboratory3,the 187thHospital of Chinese PLA,Haikou 571159,Hainan,CHINA

ObjectiveTo explore the association between the expression of bone sialoprotein(BSP)and bone metastasis in prostate cancer tissue.MethodsSixty-eight patients with prostate cancer(PCa)between January 1,2006 and June 30,2013 in our hospital were selected as the experimental group,and 22 cases of patients with benign prostatic hyperplasia(BPH)as the control group.Immunohistochemical SP method was used to detect the BSP expression of PCa or BPH tissues.Analysis was conducted by combining information of pathological behavior and clinical follow-up survey.ResultsThe expressing rate of BSP in prostate cancer tissues(76.47%)was higher than that in BPH tissues(13.64%),and the difference was statistically significant(P＜0.001).The BSP expression in prostate cancer tissues was closely related to the tumor pathological stage(χ2=9.338,P=0.009),distant metastasis(χ2=6.38, P=0.012),while no association was found between BSP expression and age(χ2=0.593,μ=0.441),pathological grade(χ2= 0.057,P=0.972)and lymph node metastasis(χ2=0.126,P=0.722).Before surgery,the serum tPSA concentration of 52 BSP positive cases was higher than that of 16 BSP negative cases,and the difference was statistically significant [(69.06±25.52)μg/L vs(38.00±21.64)μg/L,F=19.355,P＜0.001].The bone metastases rate of BSP positive was significantly higher than that of BSP negative[(71.15%,37/52)vs(25.0%,4/16),(χ2=10.887,P=0.001)].ConclusionThe expression of BSP is closely related to bone metastasis in prostatic cancer.It might be a potential indicator for the prediction of bone metastasis in prostate cancer.

Prostate cancer;Bone sialoprotein(BSP);Bone metastasis;Immunohistochemistry

R737.25

A

1003—6350（2014）23—3461—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.23.1353

2014-05-15)

海南省衛生基金資助項目（編號：瓊衛2011-98號）

朱其聰。E-mail：zhuqicong1234@163.com