雙唑泰栓中3組分含量測定方法的改進及優化

申蘭慧

江蘇省無錫藥品檢驗所，無錫　214028

雙唑泰栓中3組分含量測定方法的改進及優化

申蘭慧

江蘇省無錫藥品檢驗所，無錫214028

摘要目的：對雙唑泰栓中3組分含量測定方法進行改進及優化。方法：采用HPLC法測定雙唑泰栓中甲硝唑、克霉唑及醋酸氯己定的含量，以CAPCELL PAK C18為色譜柱，甲醇-水-三乙胺（70∶30∶0.3）（含庚烷磺酸鈉10 mmol·L-1,用磷酸調節pH值至6.0）為流動相，流速：1.0 mL· min-1，柱溫：30℃，檢測波長：260 nm；進樣量：20 μL。結果：采用HPLC法，3個成分能很好分離，甲硝唑在53.2～425.6 μg·mL-1范圍內濃度與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為99.69%，RSD為1.32%；克霉唑在70.78～326.24 μg·mL-1范圍內濃度與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為99.64%，RSD為1.27%；醋酸氯己定在1.87～14.93 μg·mL-1范圍內濃度與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9998，平均回收率為99.92%，RSD為1.45%。結論：優化的方法能提高測定方法的精密度和準確性，從而更好地控制產品質量。

關鍵詞雙唑泰栓；優化；HPLC法

雙唑泰栓是由甲硝唑、克霉唑及醋酸氯己定組成的栓劑。組方為：甲硝唑200 mg，克霉唑160 mg，醋酸氯己定8 mg。臨床上主要用于治療各類陰道炎癥，筆者按照《中國藥典》[1]及參考相關文獻[2-5]對該3組分含量測定方法進行改進及優化，詳見表1。

采用藥典方法及文獻方法，3組分提取不充分，重現性差，且醋酸氯己定及克霉唑的測定結果偏低，回收率低。通過方法學驗證，采用優化的HPLC法同時測定甲硝唑、克霉唑及醋酸氯己定含量能提高檢測精密度及準確度，以更好地控制產品質量。

1　儀器與試藥

Waters 2690-996 PDA高效液相色譜儀（Wa ters公司）；Empower 2色譜數據處理軟件（Waters公司）；電子天平（梅特勒公司）；pH計（梅特勒公司）。

雙唑泰栓為湖北某藥業生產（批號：20110306、20111002、20111203），其中20110306的樣品作為考察方法學的樣品。醋酸氯己定對照品、甲硝唑對照品、克霉唑對照品（均自中檢院購得）。乙腈為色譜純；其余所有試劑為分析純；水為純化水。

表1　優化方法、藥典方法及參考文獻的試驗條件

2　方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-三乙胺（70∶30∶0.3）（含庚烷磺酸鈉10 mmol·L-1，用磷酸調節pH值至6.0）；流速：1 mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：260 nm；進樣量：20 μL。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液

對照品混合貯備液：分別精密稱取甲硝唑對照品53.20 mg、克霉唑對照品40.78 mg及醋酸氯己定1.87 mg置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。

對照品混合溶液：精密量取貯備液10 mL置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2供試品溶液的制備取本品10粒，精密稱定，置小燒杯中于70～80℃水浴上溫熱熔融，冷卻至室溫，精密稱取適量（相當于甲硝唑20 mg），置100 mL量瓶中，加流動相約70 mL，置70～80℃水浴上劇烈振搖10 min，再置70～80℃水浴上超聲振搖10 min使供試品溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻2 h，取出迅速濾過，續濾液放至室溫。

2.2.3空白輔料溶液的制備按照處方自制不加3種藥物的空白輔料，精密稱取適量，按“2.2.2”項下操作，制備空白輔料溶液。

2.3專屬性的考察

分別精密吸取空白輔料溶液、對照品溶液、供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，在與對照品色譜相應的位置上，供試品溶液顯相同的色譜峰，見圖1。

圖1　HPLC專屬性考察圖譜

2.4方法學考察

2.4.1線性關系分別精密量取對照品混合貯備液各1、2、3、4、8 mL置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標，對照品的濃度為橫坐標，進行線性回歸，甲硝唑回歸方程Y=21899X-23110，r=0.9999；克霉唑回歸方程Y=4530.4X＋4811.9，r=0.9999；醋酸氯己定回歸方程Y=113926X-4421.7，r=0.9998。結果表明：甲硝唑在53.2～425.6 μg·mL-1范圍內、克霉唑在40.78～326.24μg·mL-1范圍內、醋酸氯己定在1.87～14.93μg· mL-1范圍內，三者濃度與峰面積呈良好的線性關系。

2.4.2儀器精密度考察取對照品混合溶液20 μL注入液相色譜儀，連續進樣6次，以甲硝唑、克霉唑及醋酸氯己定峰計，考察峰面積的變異情況。結果：甲硝唑RSD為0.27%（n=6），克霉唑RSD為0.52%（n=6），醋酸氯己定RSD為0.63%（n=6）。說明儀器精密度良好。

2.4.3重復性試驗稱取本品適量，精密稱定，共6份，按“2.2.2”項下操作，分別精密量取續濾液20 μL注入液相色譜儀，按外標法計算其含量，甲硝唑平均含量為100.51%，RSD為0.30%（n=6）；克霉唑平均含量為99.51%，RSD為0.52%（n=6）；醋酸氯己定平均含量為93.71%，RSD為0.83%（n=6）。說明本法測定3種藥物含量重復性良好。

2.4.4穩定性考察取供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12 h測定，記錄色譜圖，結果甲硝唑RSD為0.21%（n=6），克霉唑RSD為0.25%（n=6），醋酸氯己定RSD為0.80%（n=6）。結果表明，供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.4.5回收率試驗精密稱取本品適量（相當于甲硝唑10 mg），按照80%、100%及120%的比例分別加入對照品適量各3份，按“2.2.2”項下操作，精密量取續濾液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另取對照品溶液，同法測定，計算甲硝唑的平均回收率為99.69%，RSD為1.32%（n=9）；克霉唑的平均回收率為99.64%，RSD為1.27%（n=9)，醋酸氯己定的平均回收率為99.92%，RSD為1.45%（n=9)。結果表明，本法測定3種藥物回收率良好。

2.5優化方法對樣品的檢驗結果與藥典方法測得的結果進行比較

抽取該企業樣品3批，按優化的HPLC法測定，將HPLC法測得的三組分的含量與按藥典方法測定的三組分的含量進行比較，兩種方法各測定3次，含量比較見表2。

從表2可以看出，優化的HPLC法測得的結果與采用藥典法測定雙唑泰栓中三組分含量相比，方法的精密度提高，且重現性良好。

3　討論

3.1提取方法的注意事項

由于雙唑泰栓是油性基質，很容易將藥物成分包裹，因此需在70～80℃溫熱熔融，不斷攪拌下冷卻至室溫，應將10粒栓劑內容物完全熔融，且在熔融完全后，需在熱水浴中不斷攪拌2 min后，攪拌下冷卻至室溫，注意樣品的均勻性。

3.2pH值及離子對濃度對測定的影響

對流動相的pH值及庚烷磺酸鈉離子對濃度進行考察，分別考察流動相的pH值3.0、4.0、5.0、6.0、6.5，庚烷磺酸鈉離子對濃度5、10、15 mmol·L-1；同時采用甲醇-水、各流動相進行提取樣品，通過試驗發現當離子對濃度為10 mmol·L-1，流動相pH值為6.0時，樣品的峰形良好，各組分分離度良好，保留時間適中，且發現樣品中3組分采用該流動相提取效率高，經方法學驗證，回收率高，重現性良好。

表2　2種含量測定方法的比較（標示量%±SD）（n=3）

3.3色譜柱類型的選擇

對C8及C18兩種色譜柱類型進行考察，C18柱端基峰尾良好，3組分分離度良好，峰形好，分析時間適中，故建議采用常規易得的C18柱。

3.4干擾性試驗

分別配制甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定與空白輔料溶液，按照色譜條件進行試驗，結果表明輔料不干擾各組分測定。

3.5由于醋酸氯己定含量較低（每粒標示量8 mg），不易在基質中混勻，導致結果不均勻，測定數據波動大，故建議標準中增加醋酸氯己定的含量均勻度檢查項。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：71.

[2] 李博，楊興官，李紅玉.HPLC同時測定復方替硝唑載體栓3個組分的含量[J].中國現代應用藥學，2012，29（11）：1015-8.

[3] 何雯，丁韜.高效液相色譜法測定雙唑泰栓主藥含量[J].上海醫藥，2000，21（1）：36-7.

[4] 黃東萍，王立生.反相高效液相色譜法測定雙唑泰栓中甲硝唑、克霉唑和醋酸氯己定的含量[J].藥物分析雜質，2002，22（2）：129-31.

[5] 劉曉琳，童成亮，吳小英，等.RP-HPLC法測定雙唑泰栓中3種成分的含量[J].中國藥品標準，2003，4（3）：38-9.

中圖分類號R927.2

文獻標志碼A

文章編號1673-7806（2014）05-419-03

作者簡介申蘭慧（1979-），女，碩士，副主任藥師，從事質量檢驗和標準的研究E-mail:slh205906@sina.com

收稿日期2014-04-03修回日期2014-05-06

Optimization of Determination Method for Three Components in Metronidazole,Clotrimazole and Chlorhexidine Acetate Suppositories

SHEN Lan-hui
Wuxi Institute for Drug Control,Jiangsu Province,Wuxi 214028

ABSTRACTObjective：To optimize the determination method for three components in metronidazole, clotrimazole and chlorhexidine acetate suppositories.Methods：An optimizative HPLC was used to determine three components in metronidazole,clotrimazole and chlorhexidine acetate suppositories.The CAPCELL PAK C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used.The mobile phase consisted of methanol-water-triethylamine(70∶30∶0.3)(consisted sodiumheptanesulphonate 10 mmol·L-1,adjusted by phosphoric acid to pH 6.0),The flow rate was 1.0 mL·min-1and the column temperature was 30℃.The UV detection wavelength was set at 260 nm.Results：Optimizing studies showed that the three components had good resolutions. The linear ranges were 53.2～425.6 μg·mL-1for metronidazole,70.78～326.24 μg·mL-1for clotrimazole and 1.87～14.92 μg·mL-1for chlorhexidine acetate with the correlation coefficient 0.9999,0.9999 and 0.9998, respectively.The average recoveries were 99.69%with 1.32.%,99.64%with 1.27%and 99.92%with 1.45%(n=9).Conclusions：The optimized method can improve the precision and accuracy of the determination method to achieve better quality control.

KEY WORDSClotrimazole and chlorhexidine acetate suppositories;Optimization;HPLC