臭菘提取物對(duì)癌細(xì)胞的體外抑制作用研究

摘要：為了研究臭菘提取物對(duì)癌細(xì)胞的體外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同極性提取物，針對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞抑制作用，結(jié)果顯示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞抑制活性。

關(guān)鍵詞：臭菘；提取物；癌細(xì)胞；抑制活性

中圖分類(lèi)號(hào)： R979.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-06-21-1

臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]別名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘屬草本植物[1]。作為中草藥，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。許多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本實(shí)驗(yàn)研究臭菘抑制癌細(xì)胞活性，為對(duì)臭菘臨床等實(shí)驗(yàn)研究，提供有利依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料、設(shè)備與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 一是提取臭菘不同極性溶劑的提取物；二是人結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2（吉林大學(xué)動(dòng)植物實(shí)驗(yàn)室提供）。

1.1.2 試劑與儀器 SW-CJ-2D型超凈工作臺(tái) 蘇州技術(shù)有限公司；酶標(biāo)儀 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型細(xì)胞培養(yǎng)箱 SETECAT公司；Millex33mm 無(wú)菌高溫過(guò)濾器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球計(jì)數(shù) 上海通用儀器廠等。

環(huán)磷酰胺 山西藥業(yè)有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培養(yǎng)液 BICO公司；胎牛血清等。

1.1.3 配置培養(yǎng)基和溶液 MTT溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)量MTT1克，然后加入200毫升的PBS緩沖溶液，將其攪拌溶解除菌過(guò)濾，得到濃度為0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。

PBS緩沖溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超純水1000毫升， pH值調(diào)節(jié)至7.4，高壓滅菌之后常溫保存。

胰酶細(xì)胞消化液：準(zhǔn)確稱(chēng)量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。

DMEM培養(yǎng)液：稱(chēng)取DMEM粉末溶于700毫升超純水，溶解后進(jìn)行除菌，再加入10%的胎牛血清和已經(jīng)配好的1%谷氨酰胺溶液。

1.2 受試的藥品配制

稱(chēng)取臭菘各極性萃取膏25.6毫克，再加入適量DMSO，溶解后攪拌均勻，加入配制好濃度為0.08、0.32和1.28毫克/毫升超級(jí)水。環(huán)磷酰胺為陽(yáng)性對(duì)照組藥物，同上述配置四個(gè)濃度的梯度。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法[4]

1.3.1 復(fù)蘇細(xì)胞

1.3.2 細(xì)胞的傳代培養(yǎng) 首先，取出達(dá)到一定生長(zhǎng)密度的Caco-2后，去除培養(yǎng)液；然后用PBS緩沖溶液對(duì)其反復(fù)沖洗3次，再用胰酶細(xì)胞消化液對(duì)其反復(fù)沖洗2次后，將液體再次倒掉，這時(shí)再加入幾滴胰酶消化液，進(jìn)行消化1～2分，放在倒置的顯微鏡下觀察后，當(dāng)看到細(xì)胞呈現(xiàn)圓粒狀的時(shí)候，表示已消化完畢；再取出胰酶消化液，再次加入細(xì)胞培養(yǎng)液，待細(xì)胞充分均勻的分散后進(jìn)行分裝，然后放入到CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，以上操作都是在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下進(jìn)行的。

1.4 測(cè)定對(duì)Caco-2細(xì)胞給藥影響

實(shí)驗(yàn)組有5個(gè)以上的平行，然后分別設(shè)定24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)完成棄上層清液，再洗3次后棄除藥液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常溫培養(yǎng)4小時(shí)，棄除上清液并洗脫3次，再次加DMSO200升溶解MTT還原成甲臜沉淀，最后用波長(zhǎng)492納米來(lái)測(cè)定吸光度（A）值，并計(jì)算癌細(xì)胞的抑制率。

A：給藥劑組的吸光值 P：腫瘤細(xì)胞的抑制率 ACK：對(duì)照組的吸光值

2 結(jié)果與分析

比較試驗(yàn)結(jié)果可知，對(duì)照組明顯高于給藥組（吸光度A值），表明給藥組對(duì)Caco-2細(xì)胞有明顯抑制，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增大，對(duì)其抑制趨勢(shì)越強(qiáng)。同一濃度下氯仿的提取物，對(duì)Caco-2細(xì)胞抑制活性明顯高于其他極性提取物組和對(duì)照組。

3 結(jié)語(yǔ)

李艷鳳等人研究發(fā)現(xiàn)白附子乙酸乙酯萃取物對(duì)胃癌細(xì)胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究發(fā)現(xiàn)掌葉半夏提取物使子宮癌細(xì)胞Bcl-2和PCNA蛋白表達(dá)量遞減；本實(shí)驗(yàn)采用MTT法，研究臭菘不同極性提取物對(duì)Caco-2細(xì)胞的抑制作用，結(jié)果顯示，各極性提取物均有不同程度對(duì)癌細(xì)胞的抑制活性，同時(shí)隨著濃度增加，抑制率也呈上升趨勢(shì)，初步表明臭菘中含有細(xì)胞毒性成分，在實(shí)驗(yàn)中氯仿萃取物表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制癌細(xì)胞活性。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志（第十三卷第二分冊(cè)）[M].北京：科學(xué)出版社，1979，（9）：1-12.

[2] 伊廷雙，李德銖.天南星科分類(lèi)系統(tǒng)的沿革[J].武漢植物學(xué)研究，2002，20（1）：49-61.

[3] 喬恒，隋希英.吉林省重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄[J].吉林林業(yè)科技，2009，38（2）：24-41.

[4] 程鑫穎，包海鷹，丁燕.瓦寧木層孔菌中5個(gè)化合物的抗腫瘤活性篩選[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.

作者簡(jiǎn)介：魏麗，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，研究生，研究方向：植物藥。

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-4-8 13：17：49

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140408.1317.002.html

摘要：為了研究臭菘提取物對(duì)癌細(xì)胞的體外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同極性提取物，針對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞抑制作用，結(jié)果顯示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞抑制活性。

關(guān)鍵詞：臭菘；提取物；癌細(xì)胞；抑制活性

中圖分類(lèi)號(hào)： R979.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-06-21-1

臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]別名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘屬草本植物[1]。作為中草藥，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。許多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本實(shí)驗(yàn)研究臭菘抑制癌細(xì)胞活性，為對(duì)臭菘臨床等實(shí)驗(yàn)研究，提供有利依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料、設(shè)備與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 一是提取臭菘不同極性溶劑的提取物；二是人結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2（吉林大學(xué)動(dòng)植物實(shí)驗(yàn)室提供）。

1.1.2 試劑與儀器 SW-CJ-2D型超凈工作臺(tái) 蘇州技術(shù)有限公司；酶標(biāo)儀 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型細(xì)胞培養(yǎng)箱 SETECAT公司；Millex33mm 無(wú)菌高溫過(guò)濾器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球計(jì)數(shù) 上海通用儀器廠等。

環(huán)磷酰胺 山西藥業(yè)有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培養(yǎng)液 BICO公司；胎牛血清等。

1.1.3 配置培養(yǎng)基和溶液 MTT溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)量MTT1克，然后加入200毫升的PBS緩沖溶液，將其攪拌溶解除菌過(guò)濾，得到濃度為0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。

PBS緩沖溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超純水1000毫升， pH值調(diào)節(jié)至7.4，高壓滅菌之后常溫保存。

胰酶細(xì)胞消化液：準(zhǔn)確稱(chēng)量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。

DMEM培養(yǎng)液：稱(chēng)取DMEM粉末溶于700毫升超純水，溶解后進(jìn)行除菌，再加入10%的胎牛血清和已經(jīng)配好的1%谷氨酰胺溶液。

1.2 受試的藥品配制

稱(chēng)取臭菘各極性萃取膏25.6毫克，再加入適量DMSO，溶解后攪拌均勻，加入配制好濃度為0.08、0.32和1.28毫克/毫升超級(jí)水。環(huán)磷酰胺為陽(yáng)性對(duì)照組藥物，同上述配置四個(gè)濃度的梯度。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法[4]

1.3.1 復(fù)蘇細(xì)胞

1.3.2 細(xì)胞的傳代培養(yǎng) 首先，取出達(dá)到一定生長(zhǎng)密度的Caco-2后，去除培養(yǎng)液；然后用PBS緩沖溶液對(duì)其反復(fù)沖洗3次，再用胰酶細(xì)胞消化液對(duì)其反復(fù)沖洗2次后，將液體再次倒掉，這時(shí)再加入幾滴胰酶消化液，進(jìn)行消化1～2分，放在倒置的顯微鏡下觀察后，當(dāng)看到細(xì)胞呈現(xiàn)圓粒狀的時(shí)候，表示已消化完畢；再取出胰酶消化液，再次加入細(xì)胞培養(yǎng)液，待細(xì)胞充分均勻的分散后進(jìn)行分裝，然后放入到CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，以上操作都是在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下進(jìn)行的。

1.4 測(cè)定對(duì)Caco-2細(xì)胞給藥影響

實(shí)驗(yàn)組有5個(gè)以上的平行，然后分別設(shè)定24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)完成棄上層清液，再洗3次后棄除藥液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常溫培養(yǎng)4小時(shí)，棄除上清液并洗脫3次，再次加DMSO200升溶解MTT還原成甲臜沉淀，最后用波長(zhǎng)492納米來(lái)測(cè)定吸光度（A）值，并計(jì)算癌細(xì)胞的抑制率。

A：給藥劑組的吸光值 P：腫瘤細(xì)胞的抑制率 ACK：對(duì)照組的吸光值

2 結(jié)果與分析

比較試驗(yàn)結(jié)果可知，對(duì)照組明顯高于給藥組（吸光度A值），表明給藥組對(duì)Caco-2細(xì)胞有明顯抑制，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增大，對(duì)其抑制趨勢(shì)越強(qiáng)。同一濃度下氯仿的提取物，對(duì)Caco-2細(xì)胞抑制活性明顯高于其他極性提取物組和對(duì)照組。

3 結(jié)語(yǔ)

李艷鳳等人研究發(fā)現(xiàn)白附子乙酸乙酯萃取物對(duì)胃癌細(xì)胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究發(fā)現(xiàn)掌葉半夏提取物使子宮癌細(xì)胞Bcl-2和PCNA蛋白表達(dá)量遞減；本實(shí)驗(yàn)采用MTT法，研究臭菘不同極性提取物對(duì)Caco-2細(xì)胞的抑制作用，結(jié)果顯示，各極性提取物均有不同程度對(duì)癌細(xì)胞的抑制活性，同時(shí)隨著濃度增加，抑制率也呈上升趨勢(shì)，初步表明臭菘中含有細(xì)胞毒性成分，在實(shí)驗(yàn)中氯仿萃取物表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制癌細(xì)胞活性。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志（第十三卷第二分冊(cè)）[M].北京：科學(xué)出版社，1979，（9）：1-12.

[2] 伊廷雙，李德銖.天南星科分類(lèi)系統(tǒng)的沿革[J].武漢植物學(xué)研究，2002，20（1）：49-61.

[3] 喬恒，隋希英.吉林省重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄[J].吉林林業(yè)科技，2009，38（2）：24-41.

[4] 程鑫穎，包海鷹，丁燕.瓦寧木層孔菌中5個(gè)化合物的抗腫瘤活性篩選[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.

作者簡(jiǎn)介：魏麗，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，研究生，研究方向：植物藥。

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網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140408.1317.002.html

摘要：為了研究臭菘提取物對(duì)癌細(xì)胞的體外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同極性提取物，針對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞抑制作用，結(jié)果顯示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞抑制活性。

關(guān)鍵詞：臭菘；提取物；癌細(xì)胞；抑制活性

中圖分類(lèi)號(hào)： R979.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-06-21-1

臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]別名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘屬草本植物[1]。作為中草藥，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。許多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本實(shí)驗(yàn)研究臭菘抑制癌細(xì)胞活性，為對(duì)臭菘臨床等實(shí)驗(yàn)研究，提供有利依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料、設(shè)備與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 一是提取臭菘不同極性溶劑的提取物；二是人結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2（吉林大學(xué)動(dòng)植物實(shí)驗(yàn)室提供）。

1.1.2 試劑與儀器 SW-CJ-2D型超凈工作臺(tái) 蘇州技術(shù)有限公司；酶標(biāo)儀 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型細(xì)胞培養(yǎng)箱 SETECAT公司；Millex33mm 無(wú)菌高溫過(guò)濾器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球計(jì)數(shù) 上海通用儀器廠等。

環(huán)磷酰胺 山西藥業(yè)有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培養(yǎng)液 BICO公司；胎牛血清等。

1.1.3 配置培養(yǎng)基和溶液 MTT溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)量MTT1克，然后加入200毫升的PBS緩沖溶液，將其攪拌溶解除菌過(guò)濾，得到濃度為0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。

PBS緩沖溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超純水1000毫升， pH值調(diào)節(jié)至7.4，高壓滅菌之后常溫保存。

胰酶細(xì)胞消化液：準(zhǔn)確稱(chēng)量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。

DMEM培養(yǎng)液：稱(chēng)取DMEM粉末溶于700毫升超純水，溶解后進(jìn)行除菌，再加入10%的胎牛血清和已經(jīng)配好的1%谷氨酰胺溶液。

1.2 受試的藥品配制

稱(chēng)取臭菘各極性萃取膏25.6毫克，再加入適量DMSO，溶解后攪拌均勻，加入配制好濃度為0.08、0.32和1.28毫克/毫升超級(jí)水。環(huán)磷酰胺為陽(yáng)性對(duì)照組藥物，同上述配置四個(gè)濃度的梯度。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法[4]

1.3.1 復(fù)蘇細(xì)胞

1.3.2 細(xì)胞的傳代培養(yǎng) 首先，取出達(dá)到一定生長(zhǎng)密度的Caco-2后，去除培養(yǎng)液；然后用PBS緩沖溶液對(duì)其反復(fù)沖洗3次，再用胰酶細(xì)胞消化液對(duì)其反復(fù)沖洗2次后，將液體再次倒掉，這時(shí)再加入幾滴胰酶消化液，進(jìn)行消化1～2分，放在倒置的顯微鏡下觀察后，當(dāng)看到細(xì)胞呈現(xiàn)圓粒狀的時(shí)候，表示已消化完畢；再取出胰酶消化液，再次加入細(xì)胞培養(yǎng)液，待細(xì)胞充分均勻的分散后進(jìn)行分裝，然后放入到CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，以上操作都是在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下進(jìn)行的。

1.4 測(cè)定對(duì)Caco-2細(xì)胞給藥影響

實(shí)驗(yàn)組有5個(gè)以上的平行，然后分別設(shè)定24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)完成棄上層清液，再洗3次后棄除藥液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常溫培養(yǎng)4小時(shí)，棄除上清液并洗脫3次，再次加DMSO200升溶解MTT還原成甲臜沉淀，最后用波長(zhǎng)492納米來(lái)測(cè)定吸光度（A）值，并計(jì)算癌細(xì)胞的抑制率。

A：給藥劑組的吸光值 P：腫瘤細(xì)胞的抑制率 ACK：對(duì)照組的吸光值

2 結(jié)果與分析

比較試驗(yàn)結(jié)果可知，對(duì)照組明顯高于給藥組（吸光度A值），表明給藥組對(duì)Caco-2細(xì)胞有明顯抑制，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增大，對(duì)其抑制趨勢(shì)越強(qiáng)。同一濃度下氯仿的提取物，對(duì)Caco-2細(xì)胞抑制活性明顯高于其他極性提取物組和對(duì)照組。

3 結(jié)語(yǔ)

李艷鳳等人研究發(fā)現(xiàn)白附子乙酸乙酯萃取物對(duì)胃癌細(xì)胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究發(fā)現(xiàn)掌葉半夏提取物使子宮癌細(xì)胞Bcl-2和PCNA蛋白表達(dá)量遞減；本實(shí)驗(yàn)采用MTT法，研究臭菘不同極性提取物對(duì)Caco-2細(xì)胞的抑制作用，結(jié)果顯示，各極性提取物均有不同程度對(duì)癌細(xì)胞的抑制活性，同時(shí)隨著濃度增加，抑制率也呈上升趨勢(shì)，初步表明臭菘中含有細(xì)胞毒性成分，在實(shí)驗(yàn)中氯仿萃取物表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制癌細(xì)胞活性。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志（第十三卷第二分冊(cè)）[M].北京：科學(xué)出版社，1979，（9）：1-12.

[2] 伊廷雙，李德銖.天南星科分類(lèi)系統(tǒng)的沿革[J].武漢植物學(xué)研究，2002，20（1）：49-61.

[3] 喬恒，隋希英.吉林省重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄[J].吉林林業(yè)科技，2009，38（2）：24-41.

[4] 程鑫穎，包海鷹，丁燕.瓦寧木層孔菌中5個(gè)化合物的抗腫瘤活性篩選[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.

作者簡(jiǎn)介：魏麗，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，研究生，研究方向：植物藥。

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-4-8 13：17：49

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