影響反相色譜法檢測有機弱堿鹽的幾個因素

摘要：目的 考察在反相色譜系統中，陰離子對試劑對有機弱堿鹽保留時間的影響。方法 選擇了三種陰離子對試劑，分析了它們對三種有機弱堿鹽保留時間的影響。結果 陰離子對試劑碳鏈長度越長，弱堿鹽的保留時間越長。合適的流動相pH值對于弱堿鹽的峰形有很好的改善作用。結論 實際工作中，應根據樣品的類型，選擇合適的離子對試劑及流動相pH值。

關鍵詞：反相色譜；陰離子對試劑；有機弱堿鹽；保留時間；pH值

在反相色譜系統中，有機弱堿鹽通常在固定相上的保留值很小，保留時間很短，為了改善有機弱堿鹽色譜峰的柱效，增加其在固定相上的保留值，通常會使用反相離子對色譜法分析有機弱堿鹽類化合物。

反相離子對色譜法是把離子對試劑添加到極性流動相中，被分析的樣品離子在流動相中與離子對試劑（反離子）生成不帶電的中性離子對，從而增加了樣品離子在非極性固定相中的溶解度，使分離系數增加，改善分離效果。

本文選擇了三種有機弱堿鹽：馬來酸氯苯那敏、馬來酸氨氯地平、氫溴酸東莨菪堿，分別用陰離子對試劑：庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉對三種有機弱堿鹽在反相系統中固定相上保留時間的影響進行了考察。

1儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀、Waters1525泵、Waters2487紫外可變波長檢測器；Waters Breeze工作站。AG135電子天平，奧立龍868型酸度計。

乙睛為色譜純，庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉（賽智科技（杭州）有限公司 色譜純）為離子對試劑，磷酸為分析純，水為純化水。

馬來酸氯苯那敏對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100047-200305），馬來酸氨氯地平對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100712-200401），氫溴酸東莨菪堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100049-200308）。

2方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Dikxna Cl8 （150mm×4.6 mm，5μm），流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；進樣量20μl。

2.2溶液的配制 稱取適量的馬來酸氯苯那敏、馬來酸氨氯地平、氫溴酸東莨菪堿對照品，分別用實驗用水配置成10ug/ml的對照品溶液。

2.3結果 馬來酸氯苯那敏、馬來酸氨氯地平、氫溴酸東莨菪堿均為弱堿鹽，在C18柱上幾乎不被保留，所以采用一般的HPLC對它們進行分析有一定的難度，采用離子對色譜法增強它們在固定相上的保留，將大大優化色譜條件。我們參考有關文獻[1-3]選擇合適的檢測波長及pH值條件，用三種不同的陰離子對試劑對以上三種弱堿鹽在反相色譜系統中保留值的影響進行了考察，見圖1～圖10，表1。

由以上色譜圖及表1可以看出，陰離子對試劑對三種弱堿鹽在反相色譜系統中的保留均是有貢獻的，離子對試劑的碳鏈長度不同，疏水性也不同，離子對試劑的碳鏈越長，與弱堿鹽所形成的離子對越易在固定相上保留；反之，碳鏈越短，離子對的保留值越小。

合適的流動相pH 值也是離子對色譜的重要條件，它將決定離子化合物的解離度。使化合物有最大程度的解離，獲得合適的保留與響應，但又不能超出硅膠基質的色譜柱所能承受的范圍。

3討論

流動相pH值、離子對試劑的碳鏈長度等因素對弱堿鹽在反相色譜系統中的保留值影響明顯，對弱堿類這些在水溶性溶液中易發生部分離子化的樣品進行分離時，最簡便的方法就是調節流動相的pH值，亦即對離子化過程進行促進，使得樣品離子化完全，樣品離子化完全后與流動相中的離子對試劑結合，從而增強樣品在反相色譜系統中的保留值。在實際工作中，我們應根據弱酸、弱堿鹽樣品的不同來選擇合適的離子對試劑與流動相pH值來改善樣品的峰形，增加它們在固定相上的保留值。

參考文獻：

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編輯/申磊