不同生長(zhǎng)年限川黨參多糖\\總黃酮含量的分析比較

摘要：在川黨參主要供應(yīng)地區(qū)獲取川黨參，從而具有一定代表性，通過(guò)嚴(yán)格反復(fù)實(shí)驗(yàn)分析出川黨參生長(zhǎng)年限對(duì)其多糖、總黃酮含量含量的影響，采用UV測(cè)定法檢測(cè)出總黃酮含量，并對(duì)其產(chǎn)生的差異進(jìn)行分析比較探討。總結(jié)出不同年限生長(zhǎng)川黨參錢(qián)3年均成遞增趨勢(shì)，然而4年生黨參卻減慢，得出結(jié)論從經(jīng)濟(jì)成本和藥用價(jià)值方面3年生川黨參比較適宜采摘。

關(guān)鍵詞：川黨參；生長(zhǎng)年限；多糖；總黃酮

1引言

黨參中川黨參占重要地位因其耐抗性、便于培植受到很多人歡迎，其產(chǎn)地大多在華南及東南亞地區(qū)。川黨參在保健行業(yè)更受歡迎，在部分鄉(xiāng)村區(qū)域人們把其作為地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重點(diǎn)項(xiàng)目來(lái)做并且受益很好，所以對(duì)于川黨參的研究很有價(jià)值。川黨參是多年生草本植物，所以其生長(zhǎng)年限及其生長(zhǎng)代謝產(chǎn)物含量變化不同所以其生藥質(zhì)量以及藥用價(jià)值也是有差異的。因此要獲得最大經(jīng)濟(jì)利益，川黨參的生長(zhǎng)年限尤為關(guān)鍵，在保證川黨參生藥質(zhì)量、藥用價(jià)值符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的前提下，考慮其生長(zhǎng)期的長(zhǎng)短對(duì)藥農(nóng)的生產(chǎn)投入所產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。本文對(duì)不同生長(zhǎng)年限川黨參的多糖和總黃酮含量嘲進(jìn)行分析比較，對(duì)川黨參生長(zhǎng)年限和采收做了初步的分析，可以作為川黨參種植采收的參考。

2實(shí)驗(yàn)部分

2．1儀器、試劑與材料UNlC0UV2000型紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海精科儀器有限公司）；xc-100型數(shù)控超聲清洗器(西安康明超聲波設(shè)備儀器有限公司)；R-1005 (鄭州長(zhǎng)城儀器有限公司)；XS205DU型分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。川黨參(采集于重慶市奉節(jié)縣，采集時(shí)間：2013年9月)。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(99．8％，批號(hào)0781-200610，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(99．8％，批號(hào)110833-200903，分析純，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、石油醚、無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮、氯仿，苯酚，實(shí)驗(yàn)所用試劑皆為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為自制蒸餾水[1]。

2．2實(shí)驗(yàn)方法

2．2．1供試品溶液制備準(zhǔn)確稱(chēng)取不同年份的黨參粉5份，每份約5．00g，用石油醚(60℃~90℃)水浴回流脫脂兩次(5h/次)。揮干殘?jiān)軇糜趫A底燒瓶，加70％乙醇40ml。浸泡20h，70°C下回流3h。過(guò)濾，另用少量85％乙醇多次洗滌濾渣，入提取液，轉(zhuǎn)入100ml。容量瓶，用85％乙醇定容，得測(cè)總黃酮的川黨參供試品液一。將提盡黃酮后的川黨參殘?jiān)糜趌oomL圓底燒瓶中，加80％乙醇50mI。超聲提取20min，以除去單糖及部分苷類(lèi)。揮干殘?jiān)掖迹铀?0ml。在75°C水浴下回流3次，2h/次，合并兩次提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至10ml左右，用水定容于100ml容量瓶申，即為測(cè)多糖的川黨參供試品液二。

2．2．2多糖含量的測(cè)定

2．2．2．1校準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確稱(chēng)取105°C干燥至恒重的葡萄糖20.00mg，置于100mL容量瓶中用水稀釋至刻度100，即得o．2mg／ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0．6、0．8、1．0mL分別置于10ml具塞試管中，依次加水補(bǔ)足到1.0ml。，分別在試管中加入5％的苯酚溶液1ml，搖勻后迅速加入濃硫酸5ml，并冰浴冷卻，然后置于100°C水浴鍋中加熱10min，自來(lái)水下冷卻后以蒸餾水補(bǔ)至刻度，于490nm處測(cè)定吸光度，繪制校準(zhǔn)曲線，以吸光度A對(duì)樣品濃度c作回歸分析，得到回歸方程后繪制校準(zhǔn)曲線如圖1。表明糖含量在。0~0.02mg／ml范圍內(nèi)具有線性特征。

2．2．2．2多糖含量的測(cè)定準(zhǔn)確吸取供試品液二0．5ml。按照2．2．2．1節(jié)的方法測(cè)定其吸光度，計(jì)算出不同年份川黨參多糖含量。

2．2．2．3精密度、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確吸取供試品液二1ml，分別吸取6份，按2．2．2．1節(jié)的方法測(cè)定其吸光度，求得RsD為3．42％。以其中一份作為參考對(duì)象，在0.5、1、2、4、12、24h時(shí)測(cè)定其吸光度，求得RSD為2．45％。

2．2．2．4加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確吸取4份黨參樣品液lmI。，分別加入0.2mg／mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0、0.5、1、1．5，按照2．2．2．1節(jié)方法，測(cè)得吸光度A，計(jì)算平均回收率為99．94％，RSD為4．27％。

2．2．3總黃酮含量的測(cè)定

2．2．3．1校準(zhǔn)曲線的繪制在120°C準(zhǔn)確稱(chēng)取減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照樣品20mg，將60％乙醇用于溶劑溶解并定容至1000mI，制得0．02mg／ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別用滴管吸取蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0ml置于不同10mL的容量瓶中，加5％亞硝酸鈉溶液lmL并搖勻后放置10min，加1mL硝酸鋁溶液(10％)后搖勻并放置10min，加入1．0ml的氫氧化鈉（5％）。加60％乙醇至刻度后搖勻且靜置20min。以第一管為空白對(duì)照，于波長(zhǎng)510nm掃描，測(cè)定吸光度。繪制吸光度一濃度曲線，求得回歸方程為A=1．43°C+0.0292，r=0．9995。圖2為其校準(zhǔn)曲線。說(shuō)明在0~0.01mg／mI范圍內(nèi)吸光度成正相關(guān)且非常穩(wěn)定。

圖1多糖校準(zhǔn)曲線

圖2總黃酮校準(zhǔn)曲線

2．2．3．2總黃酮含量的測(cè)定準(zhǔn)確吸取供試品液lml，按照2．3．1節(jié)的方法測(cè)定其吸光度，計(jì)算出不同年份川黨參總黃酮含量。

2．2．3．3精密度、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確吸取供試品液一1ml，共吸取6份，按2．2．3．1節(jié)的方法測(cè)定其吸光度，求其RSD為2．07％。以其中一份作為參考對(duì)象，在0.5、l、2、4、12、24h時(shí)測(cè)定其吸光度，求得RSD為4．88％。

2．2．3．4加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)分別量取藏黨參的樣品液1mI．，共4份，置于10ml容量瓶里。準(zhǔn)確加入0.02mg／mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液0、0.4、0.8、1．0ml，再加入80％的乙醇溶液補(bǔ)足至10mL，照2．2．3．1節(jié)方法，進(jìn)行吸光度測(cè)定，求得回歸方程、平均回收率為114．53％，RSD4．50％。

3結(jié)果與討論

3．1不同生長(zhǎng)年限川黨參多糖含量（見(jiàn)表1）。

由表1可知，川黨參生長(zhǎng)曲線為駝峰型，并非隨年限增長(zhǎng)而無(wú)限制增加代謝物含量，第2年相對(duì)增長(zhǎng)率為20．74％左右，第3年相對(duì)增長(zhǎng)率為86．53％左右，第4年卻出現(xiàn)相對(duì)負(fù)增長(zhǎng)20．62％。其中3年生川黨參增長(zhǎng)率及多糖含量最高。得出結(jié)論川黨參生長(zhǎng)期3年內(nèi)均為多糖積累階段，而3年積累最為迅速含量最高。多糖積累但不儲(chǔ)存，所做實(shí)驗(yàn)為川黨參采摘作出指導(dǎo)作用

3．2不同生長(zhǎng)年限川黨參總黃酮含量（見(jiàn)表2）。

根據(jù)表2可知，在川黨參種植過(guò)程中，總黃酮含量是根據(jù)生長(zhǎng)年限的增加而增長(zhǎng)的。第2年的增長(zhǎng)率是83．33％，第3年的增長(zhǎng)率是48．48％，第4年的增長(zhǎng)率是21．09％。第2年的增長(zhǎng)率最高，第3年也保持較高的增長(zhǎng)速度，在這個(gè)時(shí)期，總黃酮含量都是以一個(gè)較為快速的速度增長(zhǎng)的，到第4年時(shí)增長(zhǎng)率降低，可見(jiàn)增長(zhǎng)速度在放緩[2]。如果僅以總黃酮含量作為指標(biāo)進(jìn)行考察，選收4年生的川黨參總黃酮含量最高，但是考慮到第4年總黃酮增長(zhǎng)速度在下降，加之多1年的生長(zhǎng)，成本陪護(hù)費(fèi)用也相應(yīng)增加，綜合表1和表2，結(jié)合多糖含量、總黃酮含量進(jìn)行考察，應(yīng)該選擇采收3年生川黨參，既保證了生藥質(zhì)量，又節(jié)約了種植成本。因此，采收3年生川黨參是較為合適的。

3．3結(jié)果分析經(jīng)過(guò)調(diào)查，在渝產(chǎn)川黨參種植區(qū)，由于各方面因素，大多數(shù)藥農(nóng)采挖移植2年后的川黨參作為藥材，可能導(dǎo)致部分川黨參藥材的生藥品質(zhì)并未達(dá)到最佳。因此，綜合藥農(nóng)的生產(chǎn)成本、種植年限和生藥品質(zhì)，可以選擇采挖3年生川黨參作為藥材，這樣可以保證其藥用效果。

4結(jié)論

黨參為補(bǔ)中益氣、健脾益肺大宗藥材，其藥用含量豐富，許多有效成分有待發(fā)掘，然而其糖類(lèi)與總黃酮含量豐富已毋庸置疑，在提取糖類(lèi)與總黃酮方面川黨參有點(diǎn)突出作為藥用種植最為合適。多糖是植物最為普遍的代謝產(chǎn)物，藥理實(shí)驗(yàn)證明其具有增加機(jī)體免疫力，增加脾臟造血功能等功效。黃酮具有抗炎抗病毒等廣譜的生理活性和藥理作用。川黨參多糖黃酮的藥理研究也從一個(gè)側(cè)面印證了黨參補(bǔ)中益氣、健脾益肺的功效。多糖的測(cè)定有苯酚一硫酸法和蒽酮一硫酸法，蒽酮不便保存，所以苯酚溶液更容易保存，故而選用苯酚一硫酸法[3]。UV法是總黃酮含量測(cè)定的較為經(jīng)典的方法，操作簡(jiǎn)便。可以作為川黨參采收的參考。

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編輯/蘇小梅