生活飲用水中菌落總數的測定分析

摘要：目的 探討生活飲用水中菌落總數的測定方法。方法 用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基在保證無菌的環境下，采取生活飲用水的樣品，利用培養基制作平板。對生活飲用水用平板菌落技術測定菌落總數從而判斷生活飲用水是否符合國家標準，是否受到污染。結果 生活飲用水中菌落平均數為35，在國家飲用水標準范圍之內。結論 本實驗的成敗在于滅菌、無菌操作技術、培養基的溫度等方面是否操作正確，因此接種過程務必防止雜菌的侵入。

關鍵詞：生活飲用水；菌落總數

在飲用水處理中，出廠水加氯消毒后進人管網，部分存活的微生物和管網中生物膜中的微生物會利用管網水中的微量生物降解有機物進行再生長［1］。水質的好壞對人們生活起著至關重要的作用，而判斷水質的標準，微生物在水中的數量、種類是必不可少的。生活飲用水的微生物學指標檢驗，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時也是評價水質狀況的重要指標。我國生活飲用水衛生標準（GB 5749-2006）規定水樣在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基即營養瓊脂上有氧條件下37℃培養48h后，所得1ml水樣所含菌落的總數不得大于100。

長期以來，國內多采用異養菌平板計數法和最大或然數計數法來測定飲用水中的活菌數．但由于飲用水中的貧營養環境有別于傳統培養基提供的富營養環境，大多數在顯微鏡下觀察到的細菌不能在傳統培養基中生長，致使活菌計數結果偏低．近些年來，國外先后應用吖啶橙染色直接計數、活菌直接計數等方法對飲用水中的菌落總數及活菌數進行快速、直接的鏡檢計數．一些新的染色方法，如采用5一氰基一2，3一聯甲苯四唑鹽酸鹽、核酸探針等對活細菌計數，都取得了很好地效果，國內這方面的研究卻未見報道。

因平板計數法相對簡單，本實驗即采用本方法，用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基在保證無菌的環境下，采取生活飲用水的樣品，利用培養基制作平板。

1資料與方法

1.1 本實驗于在昌吉州疾控中心實驗樓微生物實驗室完成。`

1.2 材料

1.2.1實驗材料生活飲用水

1.2.2實驗試劑牛肉膏蛋白胨NaCl1mol/LNaOH1mol/LHCl 蒸餾水

1.2.3實驗儀器高壓蒸氣滅菌鍋培養皿三角燒瓶天平量筒玻璃棒電爐 藥匙pH試紙（pH5.5-9.0） 溫度計

1.3實驗方法

1.3.1滅菌

1.3.1.1首先將內鍋層取出，再向外鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

1.3.1.2放回內鍋層，并加入用報紙包好的培養皿、三角燒瓶、吸管。

1.3.1.3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺旋，使螺旋松緊一致，勿使漏氣。

1.3.1.4用電爐加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷氣。待冷空氣完全排盡后，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸氣壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力上升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用0.1MPa，121℃，20min滅菌。

1.3.1.5滅菌時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至\"0\"時打開排氣閥，旋松螺旋，打開蓋子，取出滅菌物品。

1.3.2水樣的采取放開水龍頭使水流5min后，用已滅菌的三角燒瓶接取水樣，以待分析。

1.3.3制備牛肉膏蛋白胨培養基

1.3.3.1稱量 按培養基配方依次準確的稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。

1.3.3.2溶化 在上述燒杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒攪勻，然后，在石棉網上加熱使其溶解，將稱好的瓊脂放入已溶的藥品中，再加熱溶化，最后補足所損失的水分。

1.3.3.3調pH 在未調pH前，先用精密pH試紙測量培養基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH，直至pH達7.6。反之，用1mol/L HCl進行調節。

1.3.4菌落總數測定

1.3.4.1滅菌吸管吸取1mL水樣，注入其中一套滅菌的培養皿中。共做兩個平皿。

1.3.4.2分別傾注溶化并冷卻到45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養基，培養基的量為培養基高度的1/3，并立即在桌上作平面旋搖，使生活飲用水和培養基混勻。

1.3.4.3另取一空的滅菌培養皿，傾注肉膏蛋白胨瓊脂培養基，培養基的量為培養基高度的1/3，作空白對照。

1.3.4.4待培養基凝固后，倒置于37℃溫箱中，培養48h，進行菌落計數。兩個平板的平均菌落數即為1mL生活飲用水的菌落總數。

2結果

見表1。

生活飲用水中細菌總為（83+75）/2-44=35；實驗中對照組的菌落數為44，可見培養基和培養過程中造成了雜菌污染。處理上表中數據知，該生活飲用水中細菌平均數為35，在國家飲用水標準范圍之內。

3討論

在本實驗中的空白對照培養基上長了細菌菌落，說明此培養基被污染了，雜菌來源可能是由于培養皿、三角燒瓶、吸管等儀器滅菌不充分；滅菌后在空氣中放置又落入雜菌；配置培養基時反復升降溫，使一些雜菌產生抗性等。因此，在制作培養基及培養的過程中要嚴格殺菌，并嚴格按照實驗步驟認真操作，從而使得結果更加精確。

由于水中細菌種類繁多，它們對營養和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖，因此，以某種培養基平板升生長出來的水中菌落總數僅是近似值。

本實驗的成敗在于滅菌、無菌操作技術、培養基的溫度等方面是否操作正確，因此接種過程務必防止雜菌的侵入。

參考文獻：

［1］沈萍，范秀容，等.微生物學實驗（第四版）.北京：高等教育出版社，2007 .

編輯/許言