兒童急性再生障礙性貧血TNF-α\\IL-12的變化

摘要：目的 為兒童急性再生障礙性貧血體內細胞因子濃度變化提供證據。方法 采再障組（42例）和對照組（40例）靜脈血，用酶聯免疫吸附法測定所取血樣標本中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-12（IL-12）的含量。分析兩組外周血中兩種細胞因子是否存在顯著性差異。結果 再障組患兒外周血TNF-α和IL-122的含量均高于對照組兒童。結論通過對TNF-α和INF-γ的監測，可以了解再障患兒疾病現狀，治療效果和預后情況。

關鍵詞：再生障礙性貧血；腫瘤壞死因子-α；白細胞介素-12

急性再生障礙性貧血在病程中伴有內臟出血、重癥感染，常危及生命，預后欠佳。但是現在大部分的病例被診斷為特發性免疫異常導致的再生障礙性[1]。細胞因子失調，包括腫瘤壞死因子（TNF-α），白細胞介素-12（IL-12），研究發現在再生障礙性貧血的發病機制中起到了重要的作用[2]。兒童再生障礙性貧血已經成為繼兒童白血病之后，兒童死亡率較高的一種血液系統疾病[3]。本次研究為了給臨床上提供更好的關于兒童急性再障體內細胞因子濃度變化的證據。

1資料與方法

1.1一般資料 2010年6月~2013年6月， 42例再生障礙性貧血患兒，符合我國小兒再生障礙性貧血的診斷及分型標準[4]。患兒均為急性再生障礙性貧血發作。其中男20例，女42例，中位年齡6.4（3～14）歲。對照組選取我院體檢中心正常兒童，共40例，男21例，女19例，中位年齡7.1（2～15）歲。兩組兒童的年齡比較和性別比例上無顯著性差異，P≥0.05。

1.2方法

1.2.1標本收集用肝素鈉抗凝管采集患者和對照組兒童的靜脈血5ml用于TNF-α，另5ml用于IL-12的測定。

1.2.2TNF-α含量的測定以鼠源性的抗TNF-α單抗以每孔400ng的量，在PH值為9的碳酸-碳酸鈉緩沖液中包被96孔板中，置4℃環境過夜。取出后洗滌3次，加入預先備好的待測樣本及標準的TNF-α(制作標準曲線用)。37℃孵育2h。用洗滌液洗滌3次，加入羊抗鼠TNF-α抗體，37℃孵育2h后，再洗滌3次，加入辣根過氧化物酶標記的兔抗羊IgG，37℃孵育2h后加入底物顯色。終止顯色后在自動酶標儀上測定濃度，并以標準曲線為基準求得TNF-α的含量。以Mean±SD ng/ml的形式表示結果。

1.2.3IL-12含量測定采用雙抗體夾心ELISA 測定。每個樣本全血以1000 r /min，離心10 min，吸取1mL 血漿置于－40°C 冰箱保存，集中測試，操作步驟參照ELISA 試劑盒說明書進行，基本步驟與測量干擾素的過程相同，結果由自動酶標儀測定，并以并以標準曲線為基準求得IL-12的含量。以Mean±SD ng/ml的形式表示結果。

1.3統計學方法應用SPSS1 12.0統計學軟件進行統計學分析，計量資料采用均x±s表示，結果分析采用獨立樣本的t 檢驗，以P＜0.05 為差異有顯著性。

2結果

2.1外周血TNF-α含量的對比結果再障組患兒外周血中TNF-α含量的平均值是：56.51±20.02 ng/ml，而對照組的患兒的平均值為（25.88±10.11） ng/ml。通過獨立樣本t檢驗分析，P=0.008＜0.05，差異具有顯著性。

2.2外周血IL-12含量的對比結果通過獨立樣本t檢驗分析得到結果為，再障組患兒外周中的IL-12平均含量與對照組患兒外周血中的平均含量的差異具有顯著性，P=0.012＜0.05。再障組患兒IL-12含量平均為：（32.54±16.06）pg/ml，對照組患兒外周血中IL-12含量平均為：（20.02±4.40）pg/ml。

3討論

近年來，已經有不少學者從細胞因子水平方面研究再生障礙性貧血［5］。到目前為止雖然再生障礙性貧血精確的發病機制還沒有被完全的闡明，但是大量證據表明Ｔ細胞介導的免疫調節異常在再障的發病機理中發揮了重要的作用。Th1功能失調被認為是再障發病的一個重要原因，Th1功能活躍導致TNF-α和INF-γ過表達成為了再障炎癥改變的基礎[6]。

腫瘤壞死因子，是單核-巨噬細胞分泌的單核細胞刺激因子，在炎癥和免疫反應中起著重要的作用。人的TNF具有兩種形式TNF-α和TNF-β。由于TNF-β又稱為淋巴毒素只限于局限分泌，而TNF-α則被廣泛分泌到外周血循環中。所以在關于機體免疫功能的研究中，一般都是檢測TNF-α的含量。研究表明，再障患者體內TNF的含量有明顯增加[7]。最初的研究認為，TNF是造血祖細胞的負調節因子，能夠抑制粒紅細胞集落形成單位、粒單細胞集落形成單位、紅系爆式集落形成單位及紅系集落形成單位的形成[8]。但后期證實，TNF對正常造血細胞具有雙向調節作用[9]。在正常情況下，TNF-α濃度較低，適量的TNF-α對機體有保護作用，在疾病的病理改變下，TNF-α大量分泌，以致對機體產生損害作用。最近的研究證實，TNF升高是由于患兒存在自身免疫功能缺陷，特別是組織免疫受到抑制，過量的TNF-α刺激單核-巨噬細胞從而分泌更多的結果。是否還有其它因素影響，尚待進一步探討[10]。本研究結果為再障兒童體內外周血TNF-α含量顯著高于正常兒童含量提供了臨床依據。

IL-12是啟動Th1細胞的重要因子。而IL-12協同其他的細胞因子組成的細胞因子網可以決定機體免疫應答的類型。本次研究的結果顯示再障患兒外周血IL-12的含量明顯高于對照組正常兒童的含量。提示IL-12在再生障礙性貧血的發生、發展的過程中具有一定的作用。已經有研究證實，IL-12可以誘導Th1細胞分泌INF-γ[11]。所以在再障患兒的診斷和治療的過程中，關注IL-2可以有效的了解再障的病情進展。但是本次研究只是做了再障患兒與正常兒童IL-2的差別的研究，并沒有研究IL-2含量的高低與病情嚴重程度的關系。要得到這方面的結果，需在今后的研究中進行急慢性再障患兒細胞因子的對比和相關性研究。

綜上所述，在再生障礙貧血的發展過程中，通過對TNF-α和IL-12兩種細胞因子的監測，可以有效地了解疾病的現狀、治療效果和預后，具有較重要的意義。本研究為再障的新治療 提供較新的研究思路，有助于進一步研究兒童再生障礙性貧血。

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