脂蛋白相關磷脂酶A2與心血管疾病關系的研究進展和實驗室檢測

目前心腦血管疾病是造成人類死亡的主要疾病。預防、檢測和治療心腦血管疾病一直是全世界醫學工作者努力不懈的目標。而心腦血管疾病的病理基礎就是動脈粥樣硬化。動脈粥樣硬化是一種炎性反應性疾病，炎性細胞及其釋放的產物已經被認為是最主要的促動脈粥樣硬化的因素，故在粥樣斑塊形成、進展和最終破裂的過程中均有炎性反應介質的參與。目前，動脈粥樣硬化相關指標有很多種，包括各種血液生化，包括脂類，心肌酶譜，CRP，Lp-PLA2等，而國際上已經把脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-PLA2）作為一種新的炎性反應標志物。

1 Lp-PLA2 分子結構及生物學活性 Lp-PLA2被發現于1980年，是一種非鈣離子依賴性磷脂酶[1]。Lp-PLA2由PLA2G7基因編碼，又被稱為血小板活化因子乙酰水解酶（platelet activating factor-AH，PAF-AH），是一種非鈣離子依賴性磷脂酶[2]。盡管相對于其他磷脂酶它表現出不同的特性，但它仍然屬于磷脂酶家族一員，Lp-PLA2具體作用于PAF或其他氧化脂肪酸殘基而其它磷脂酶則具體作用于具有兩個長鏈酰基的磷脂[3]。盡管其在細胞內外表現為常見類型，但它具有多種不同亞型。細胞內Lp-PLA2具有兩種類型，I型 和II型，而腦組織則表達為另一種亞型：Lp-PLA2-Ib [4]。Lp-PLA2II型由含有40k堿基的多肽鏈組成，它和抗氧化性相關[5]。細胞外Lp-PLA2存在于血漿當中，絕大多數結合在LDL上（80%～85%），很少結合在HDL上（15%～20%），其活性與膽固醇濃度相關[6，7]。現在已經從人血漿，紅細胞，牛腦，肝和精漿，豚鼠腹膜透析液和血漿，小鼠血漿和血小板，培養的大鼠枯否細胞和肝細胞中提取出Lp-PLA2，并受炎性介質的調節，如γ干擾素和脂多糖抑制其分泌，血小板活化因子（platelet-activating factor，PAF）促進其分泌[8-10]。

2 Lp-PLA2的實驗室檢測

2.1檢測方法 2010年美國一家公司首先推出ELISA試劑盒，其原理是：已知Lp-PLA2濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Lp-PLA2和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Lp-PLA2的濃度呈比例關系。此方法敏感度：1.0ug/L，板內、板間變異系數均小于10%。而諾爾曼公司最近又推出了一種新的檢測方法，免疫增強比濁法其檢測原理是樣本中的LP-PLA2在磷酸鹽緩沖系統中與試劑中鼠抗人LP-PLA2 單克隆抗體的致敏乳膠顆粒發生抗原抗體反應，在促聚劑聚乙二醇作用下產生凝集以使濁度上升，在546 nm 波長檢測反應液吸光度的變化，其變化程度與樣本中的LP-PLA2含量成正比。此方法靈敏度：在546nm處，光徑1cm時，當樣本中LP-PLA2含量在116nm時5min內的吸光度變化為：0.010-0.055。變異系數小于8%.

2.2參考值范圍 研究顯示，研究對Lp-PLA2水平的影響很小。尚未見不同種族人群Lp-PLA2水平及其差異的報到。諾爾曼公司給出的血清，血漿，全血的參考范圍均是<175ng/ml。

3 Lp-PLA2與臨床疾病的關系

3.1 Lp-PLA2與AS Lp-PLA2是一種與突發心血管事件相關的新穎標志物，Lp-PLA2的生物學特性已得到廣泛研究.它被描述為血小板激活因子乙酰水解酶（PAF-AH），由于Lp-PLA2能水解PAF，而PAF是一種炎癥因子，所以過去曾被認為具有抗動脈粥樣硬化效應[11，12]。但現在研究認為其能促進AS的形成，在人體中Lp-PLA2主要與低密度脂蛋白膽固醇顆粒（LDL-C）相結合，其在LDL-C氧化前，一直處于無活性狀態，LDL-C氧化后，Lp-PLA2立即將氧化型磷脂酰膽堿分解為溶血型磷脂酰膽堿和氧化型游離脂肪酸這兩種生物活性化合物后二者是強烈的致炎因子，它們可以促進動脈粥樣硬化，引發單核細胞聚集，巨噬細胞增殖，平滑肌增生，內皮細胞粘附分子表達升高以及內皮細胞功能紊亂[13-16]。正因如此，Lp-PLA2被認為可直接導致動脈粥樣硬化。Kolodgie等[17]研究表明Lp-PLA2明顯表達于受損或破裂粥樣斑塊壞死中心或周圍的巨噬細胞，從而促進AS的形成。

3.2幾種冠心病預測因子之間的相互關系 Lp-PLA2，CRP，纖維蛋白原和白細胞計數均被評估為冠心病事件的風險因子，CRP水平與白細胞計數和纖維蛋白原水平顯著相關，白細胞計數和纖維蛋白原水平之間也顯示強正相關性。與CRP顯著相關的其它風險因子包括：年齡，收縮壓，血漿甘油三酯，LDL，HDL。白細胞計數與血漿甘油三脂正相關，與HDL負相關。在吸煙者中CRP，纖維蛋白原和白細胞計數顯著增高。Lp-PLA2與纖維蛋白原呈弱正相關，與CRP，白細胞計數基本無關。此外Lp-PLA2不受患者吸煙狀況影響。

4 結語

Lp-PLA2是一種血管特異性炎癥酶，其與臨床疾病的關系倍受關注，與其他炎性因子如CRP等相比，其優點是與其他危險因素的相關性非常小，Lp-PLA2與CRP二者相聯合可以更好地預測心腦血管事件的血清學指標，對Lp-PLA2水平的檢測可以識別心腦血管病高危個體。此外由于各試劑公司的檢測方法，參考值不同，因而Lp-PLA2檢測的標準化，確定診斷不同病因的心血管疾病的最佳臨界值也是今后應予解決的課題。

參考文獻：

[1]O'Flaherty JT， Wykle RL.Biology and biochemistry of platelet-activating factor[J].Clin Rev Allergy，2003，1：353-367.

[2]Macmanus LM， Pinckard RN： PAF， aputative mediator of oral inflammation[J].Crit Rev Oral Biol Med，2010， 11（2）：240-258.

[3]Chen J， Yang L， Foulks JM， et al. Intracellular PAF catabolism by PAF acetylhydrolase counteracts continual PAF syntesis[J].J Lipid Res，2007，48（11）：2365-2376.

[4]Karabina SA， Ninio E.Plasma PAF-acetylhydrolase： an unfulfilled promise[J].Biochim Biophys Acta，2006， 1761：1351-1358.

[5]Venable ME， Zimmerman GA， McIntyre TM， et al.Platelet-activating factor： a phospholipid autacoids with diverse actions[J].J Lipid Res，1993，34（5）：691-702.

[6]Snyder F.Platelet-activating factor and its analogs： metabolic pathways and related intracellular processes[J].Biochim Biophys Acta，1995， 1254（3）：231-249.

[7]Blank ML， Lee T， Fitzgerald V， Snyder F.A specific acetylhydrolase for 1- alkyl-2- acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine （a hypotensive and plateletactivating lipid）[J]. J Biol Chem，1981， 256：175-178.

[8]Dennis EA.The growing phospholipase A2 superfamily of signal transduction enzymes[J]. Trends Biochem Sci，1997， 22：1-2.

[9]Stremler KE，Stafforini DM，PrescottSM，et al.Human Plasma Platelet-activating factor aceylhydrolase[J].J Biol Chem，1991， 266（17）：11095-11103.

[10]Chakraborti S： Phospholipase A2 isoforms： a perspective[J].Cell Signal，2003，15：637-665.

[11] Prescott SM， Zimmerman GA， Stafforini DM， et al.Plateletactivating factor and related lipidmediators[J].Annu Rev Biochem，2000， 69：419-45.

[12]Rizos E， Tambaki AP， Gazi I， et al.Lipoprotein-associated PAF-acetylhydrolase activity in subjects with the metabolic syndrome[J].Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids，2012， 72：203-209.

[13]Tselepis AD， Chapmam MJ.Inflammation， bioactive lipids and atherosclerosis： potential roles of a lipoprotein-associated phospholipase A2， platelet activating factor acetylhydrolase[J]. Atherosclerosis，2012， 3：57-68.

[14]Chroni A， Mavri-Vavayanni M.Characterization of a platelet activating factor acetylhydrolase from rat adipocyte[J]. Life Sci，2000， 67：2807-2825.

[15]Manya H， Aoki J， Kato H， et al.Biochemical characterization of various catalytic complexes of the brain plateletactivating factor acetylhydrolase[J]. J Biol Chem，1999， 274（45）：31827-31832.

[16]Stafforini DM， McIntyre TM， Zimmerman GA， et al.Platelet activating factor acetylhydrolases[J].J Biol Chem，1997， 272（29）：17895-17898

[17]Toth PP， Simko RJ， Palli SR， et al.The impact of serum lipids on risk for microangiopathy in patients with type 2 diabetes mellitus[J].Cardiovasc Diabetol，2012， 11：109.

編輯/哈濤