EGFR、HER2在胃癌中的狀態及臨床意義研究

摘要：目的 探討胃癌中EGFR信號傳導通路相關分子EGFR、HER2的表達情況及二者之間的相互關系，研究免疫組織化學方法（IHC）檢測胃癌HER2蛋白表達和熒光原位雜交技術（FISH）檢測HER2基因狀態的一致性。方法 隨機選取胃腺癌根治術后的切除標本58例和15例癌旁正常腺上皮組織，應用IHC法檢測EGFR的表達；IHC法及FISH法分別檢測HER2蛋白表達和HER2基因狀態，并進行對比分析。結果 EGFR在胃癌的表達明顯高于癌旁正常腺上皮（46.5%vs13.3%，P<0.05），HER2在胃癌表達率為24.1%，正常腺上皮不表達；EGFR與腫瘤浸潤深度、脈管累犯、淋巴結轉移正相關，HER2與腫瘤分化程度、浸潤深度正相關；HER2蛋白為陽性的患者中，HER2基因擴增符合率為71.4%（10/14）；HER2蛋白為陰性的患者中，HER2基因非擴增符合率為100%。兩種方法檢測結果比較差異無統計學意義（P>0.05）。結論 EGFR、HER2在胃癌中表達可能與其發生發展有關，并有可能成為靶向治療的靶點。IHC檢測HER2蛋白與FISH檢測HER2基因結果一致性較高。

關鍵詞：胃癌；免疫組化；熒光原位雜交

中圖分類號：R735.2 文獻標識碼：A

分子靶向治療是近年來在治療血液系統腫瘤和實體瘤中涌現出的新治療手段。隨著對胃癌發生、發展和轉移過程中分子生物學機制的研究，這種治療手段也逐步應用于胃癌治療的臨床實踐[1]。

EGFR、HER2屬于Ⅰ型跨膜酪氨酸激酶生長因子受體成員，是EGFR受體信號通路中的中的相關分子，研究顯示它們位于信號轉導的樞紐位置，成為有效的靶點[2]。本研究同時觀察EGFR和HER2在胃癌中的表達，分析其臨床意義，為胃癌的靶向治療提供進一步的依據。

目前國際公認的用于檢測HER2的方法有兩種：免疫組化法（IHC）和熒光原位雜交技術（FISH）。免疫組化法是目前臨床上常用的檢測HER2受體蛋白表達的方法，它針對HER2的特異性抗體來檢測細胞表面HER2的表達情況。FISH用于檢查17號染色體著絲粒和HER2基因擴增情況[3]。不少研究結果認為FISH的敏感性和特異性較高，應作為一線檢測方法。然而，IHC操作簡便、費用低廉，適于初篩，但多數IHC檢測方法并未最佳化，而且蛋白表達與基因擴增兩者本應具有一致性。本研究比較了FISH和IHC兩種方法的一致性，尋找兩者的最佳結合方式。

1資料與方法

1.1一般資料 隨機選取2010～2012年在我院胃遠端腺癌根治術后的切除標本58例，所有患者術前未進行任何放療、化療或其他抗癌治療。隨機選擇15例距腫瘤組織至少5 cm的正常組織標本作為對照。

1.2試劑 EGFR、HER2單克隆抗體、免疫組化MaxVisionTM試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術有限公司。HER2 DNA探針試劑盒購自Vysis PathVysion公司，內含GLP HER2/CSP17（CSP17為對照）探針。

1.3方法 IHC法：采用EnVision二步法，均以公司提供的已知標本為陽性對照，以0.01 mol/L PBS代替一抗作陰性對照。FISH法：標本預處理、雜交儀變性雜交、復染等操作程序嚴格按照說明書進行。

1.4結果判定 IHC結果判斷 以細胞膜出現棕黃色細顆粒為陽性細胞。按Hercep Test參考評分標準[4]：0 完全陰性，1+ 超過10%的癌細胞胞膜染色，2+ 超過10%的癌細胞胞膜弱到中度陽性，3+超過10%的癌細胞胞膜強陽性；0～1+判為陰性；2+為弱陽性，3+為強陽性。FISH結果判斷 選擇細胞核大小一致，胞核邊界完整、染色均一、細胞核無重疊、綠色CSP17信號清晰的細胞，隨機計數至少20個癌細胞核中雙色信號。判讀標準[5]：紅色信號總數與綠色信號總數比值<1.8提示無擴增；比值>2.2提示HER2基因擴增；若比值位于1.8～2.2，則需再計算20個細胞核中的信號或由另外一個分析者重新計數。

1.5統計學處理 采用SPSS16.0統計學軟件進行統計學分析：χ2檢驗比較差異性， Kappa檢驗評價IHC和FISH的一致性。

2結果

2.1 EGFR、HER2蛋白在胃癌組織中的表達 EGFR及HER2均表達于胃癌的細胞膜，陽性表達率分別為46.5%（27/58）、24.1%（14/58）；EGFR在胃的陽性率顯著高于正常胃粘膜，兩組間表達有統計學差異；HER2在正常黏膜不表達。

2.2 EGFR、HER2表達與胃癌患者臨床各病理特征間的關系 EGFR與患者年齡、性別、腫瘤分化無關，與腫瘤浸潤深度、脈管累犯、淋巴結轉移有關（P<0.05）；HER2與年齡、性別、脈管累犯、淋巴結轉移無關，與腫瘤分化、浸潤深度有關，見表1。

2.3 IHC與FISH檢測結果的符合情況 IHC檢測HER2蛋白表達（0）39例標本中，基因0例擴增；HER2表達（+）5例標本中；0例擴增；HER2表達（++）6例標本中，3例擴增（50%）；HER2表達（+++）8例標本中，7例擴增。HER2蛋白表達為（0-+）和（+++）時，基因擴增符合率分別為100%（39/39）、100%（5/5） 和87.5%（7/8），IHC和FISH兩種方法檢測結果總符合率為93.1%（54/58），兩種方法檢驗結果經χ2檢驗差異無統計學意義（P>0.05）；Kappa檢驗，κ=0.99，一致性相當好？

3討論

本研究顯EGFR在胃癌中的表達率為46.5%，與Lieto E報道的結果一 致[6]，并與腫瘤浸潤深度、脈管累犯、淋巴結轉移有關，提示EGFR促進腫瘤的形成、發展，并參與腫瘤的浸潤、轉移過程。因此，采用有效的靶向藥物抑制EGFR信號傳導通路將可以抑制胃癌的增殖、侵襲和轉移。目前，在肺癌、肝癌、大腸癌等惡性腫瘤中已廣泛應用針對EGFR的靶向治療的藥物。

HER2的過表達常常預示腫瘤患者預后不良[7]。相關研究提示胃癌組織中HER2的陽性表達率為38.9%，同樣與胃癌細胞的分化程度，腫瘤病灶的侵襲和其它部位的轉移密切相關[8]。說明HER2同樣可以促進胃癌的生長、侵襲和轉移，是胃癌預后的一項重要指標[9]。張杰等人通過對123例胃癌組織的研究認為HER2基因擴增或過表達與胃癌患者的預后有明顯關系，特別是有該基因擴增的患者，其術后死亡率高生存期短預后差[10]。本研究顯示HER2表達隨腫瘤分化越高表達越強，還顯示HER2陽性表達與胃癌的侵襲有關，和文獻基本一致。

關于在胃癌組織中FISH與IHC方法檢測HER2基因狀態的對比的大樣本實驗還比較少。Yano等[11]研究了200例手術切除標本，認為兩者符合率86.7%。Hofmann等分析了168個病例，IHC與FISH的一致性達93.5%。國內宋巖等[12]報道HER2蛋白過表達的病例中76%存在基因擴增？本研究結果顯示：兩種方法統計學上無差異，當IHC結果為陰性（0/+）和（+++），FISH檢測HER2基因非擴增和擴增時二者的一致性較好，IHC能夠作為HER2狀態初步篩查的方法；當IHC為（++）時，一致性有差別，這可能與本實驗食管鱗癌IHC、FISH檢測的HER2陽性率較低有關。兩種方法檢測果的差異，主要原因有組織固定和操作過程的不同、市面所售的抗體敏感性和特異性不同及觀察者間的評分標準的不同等？

本研究結果表明EGFR、HER2在胃癌中有較高的陽性表達率，為分子靶向藥物在胃癌綜合治療中的運用提供了理論依據。目前針對胃癌以EGFR、HER2作為治療靶點的分子靶向治療研究尚不成熟和完善，需要大量的臨床試驗以確定療效。相信不久的將來，有更多的患者可以因此受益。

參考文獻：

[1]鄧薇，沈琳.胃癌靶向藥物治療進展[J].中國醫學前沿雜志（電子版），2013，5（1）：29-41.

[2]趙坤，黃俊星.EGFR、Her-2在食管鱗癌中表達的研究進展[J].現代腫瘤醫學，2011，19（8）：1688-1690.

[3]劉學政，陳銘，張家均，等.IHC和FISH檢測胃癌Her-2蛋白表達及基因擴增的比較[J].世界華人消化雜志，2011，19（25）：2679-2683.

[4]WOLFF AC，HAMMOND ME，SCHWARTZ JN，et al.American society of clinical oncology/college of American pathologists guideline recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer[J].J Clin Oncol，2007，25（1）：118- 145.

[5]乳腺癌HER2檢測指南（2009版）編寫組.乳腺HER2檢測指南（2009版）[J].中華病理學雜志，2009，38（12）：836-840.

[6]Lieto E，Ferraraccio F，Orditura M.Expression of vascular endothelial growth factor（VEGF） and epidermal growth factor receptor（EGFR） is an independent prognostic indicator of worse outcome in gastric cancer patients [J].Ann Surg Oncol，2008，15（1）：69-79.

[7]Middleton LP，Price KM，Puig P，et al.Implementation of American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists HER2 Guideline Rec-ommendations in a tertiary care facility increases HER2 immunohistochemistry and fluorescence in situ hybridization concordance and decreases the number of inconclusive cases [J].Arch Pathol Lab Med.2009，133（5）：775-780.

[8]YANGJi-li，WANG Chang-hong，ZHANG-yue，et al.Expression of EGFR，HER2，VEGF in gastric cancer and analyse their related factorsChin J Lab Diagn [J].2011，15（2）：247-250.

[9]LIUWen-fen，YOUDong，GUO Xin，et al.Clinical significance of expression of EGFR and C-erbB-2 gene in gastric cancer [J].Ningxia Med J.2010，32（19）：774-775.

[10]張杰，舒維清，朱衛，等.胃癌中Her-2/neu 過表達與基因擴增及其意義[J].中華病理學雜志，2003，32（1）：52-53.

[11]Yano T，Ochiai A，Doi T，et al.Expression of HER2 in gastric cancer： comparison between pro-tein expression and gene ampli fi cation using a new commercial kit [J].J Clin Oncol 2004，22（14 Suppl）：4053.

[12]宋巖，黃鏡，王金萬.HER2/neu基因擴增和蛋白表達與晚期胃癌患者預后的關系[J].癌癥，2010，29（1）：76-81.

編輯/肖慧