乳鐵蛋白在宮頸癌組織中的表達方式分析

摘要：目的 探討宮頸癌組織中乳鐵蛋白（LF）基因及蛋白的表達情況。 方法 采用免疫組化法和實時熒光定量PCR技術分別對40例子宮頸癌組織與20例正常宮頸組織中的LF蛋白和基因進行檢測，對比分析LF蛋白及基因在兩種組織中的表達情況差異。結果 免疫組化結果顯示乳鐵蛋白主要定位于細胞漿，在宮頸癌組織中的陽性細胞數為：15.1±0.2，明顯低于正常宮頸組織陽性細胞數：59.3±0.5，兩者比較P<0.05，差異具有統計學意義；實時熒光定量PCR結果顯示乳鐵蛋白基因在宮頸癌組織中的相對表達量為：0.003±0.001，明顯低于正常宮頸組織中乳鐵蛋白基因的表達量：0.105±0.032，兩者比較P<0.05，差異具有統計學意義。結論 乳鐵蛋白基因及蛋白表達情況在宮頸癌組織中及正常宮頸組織中存在顯著差異。

關鍵詞：乳鐵蛋白；宮頸癌

宮頸癌是常見的婦科腫瘤之一，嚴重威脅女性健康[1]。隨著人們對健康重視度的提高以及宮頸癌飾查的逐漸普及，對于宮頸癌的早期診斷和治療有了很大的進步。找到一種新型的檢測宮頸癌的標志對于提高宮頸癌檢測顯得很有意義。乳鐵蛋白是一種具有廣譜抗菌，調節機體免疫力的蛋白[2]。我們的研究正是通過研究40例子宮頸癌組織與20例正常宮頸組織中的LF蛋白和基因的表達情況，來探尋宮頸癌組織中乳鐵蛋白（LF）基因及蛋白的表達情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取40例已經確診宮頸癌患者的宮頸組織，以及20例正常婦女宮頸組織。其中40例宮頸癌患者的病理分期均為2期，病理分型均為中分化。

1.2 方法

1.2.1免疫組織化學檢測LF蛋白在組織中表達情況 將各組織切片按常規制作成為石蠟切片然后依次脫蠟，抗原修復，消除組織中粒細胞等存在的內源性過氧化物酶的活性，然后使用小牛血清封閉。加入按1：100稀釋的LF一抗150μl，在4℃過夜，第2d上午用PBS沖洗3次，10min/次，隨后每張切片加入150μl羊抗兔二抗（工作濃度為1：300），室溫濕盒中放置120 min。洗滌3次后加入ABC試劑，孵育120min，然后再次在PBS中洗滌3次，用DAB顯色。鏡下觀察顯色結果并控制顯色吋間，陽性部位出現現特異性顯色而背景無著色時，以PBS沖洗中止顯色反應。然后使用蘇木素復染，最后脫水封片鏡下觀察。

1.2.2實時定量PCR檢測LF表達情況 首先設計出LF所需引物序列，并由上海生工生物公司合成。然后提取待檢組織中總的RNA，并使用分光光度計檢測所提取RNA純度。然后合成cDNA，并利用PCR系統，進行實時定量PCR最后進行PCR結果分析。

1.3 統計學分析 采用SPSS 14.0統計軟件包，對各組數據的統計結果進行統計學分析。計量資料采用（x±s）來表示，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1在正常組織及宮頸癌組織中乳鐵蛋白的表達情況 宮頸癌組經過免疫組化染色后出現陽性細胞數為15.1±0.2，正常宮頸組經過免疫組化染色后出現陽性細胞數為59.3±0.5。兩組標本陽性細胞數存在顯著差異（P<0.05）。見表1。

2.2在正常組織及宮頸癌組織中乳鐵蛋白基因的表達情況 宮頸癌組標本經過實時定量PCR檢測后得到結果發現LF mRNA為0.003±0.001，正常宮頸組標本經過實時定量PCR檢測后得到結果發現LF mRNA為0.105±0.032。兩組標本陽性細胞數存在顯著差異（P<0.05）。見表2。

3 討論

宮頸癌是一種常見的婦科腫瘤嚴重影響廣大婦女健康，其發生于高危型HPV感染相關性較高[3]。隨著社會發展，及人們對于健康的重視度加強，人們進行體檢的次數越來越多，如何找到一種簡單迅速而又特異性高的檢測方法顯得尤為重要。乳鐵蛋白LF是一種多功能蛋白，是一種產生于胞漿中的蛋白，它不僅參與鐵的轉運，還調節機體免疫力，并具有廣譜抗菌的效果[4]。有文獻報道[5]LF蛋白對于多種病毒有抑制其復制抗炎癥的作用，并且LF蛋白還在多種腫瘤組織中表達明顯減低。不僅如此，還有文獻報道LF蛋白具有抑制腫瘤細胞分裂的作用。而我們的研究也再次證明LF蛋白在宮頸癌組織中的表達水平也相對于正常組織有差異。但是我們的研究沒有分析不同病理分型，臨床分期的宮頸癌組織中LF的表達水平。我們希望在接下來的研究中繼續上述課題。

參考文獻：

[1]Goodman MT， McDuffie K，Hernandez BY， et al. The influence of multiple human papillomavirus types on the risk of genotype-concordant incident infections of the anus and cervix： the Hawaii HPV cohort study[J]. J Infect Dis，2011，203（3）：335-340.

[2]Sukasem C，Pairoj W，Saekang N，et al. Molecular epidemiology of human papillomavirus genotype in women with high-grade squamous intraepithelial lesion and cervical cancer： will a quadrivalent vaccine be necessary in Thailand[J]. J Med Virol，2011，83（1）：119-126.

[3]聶鑫. 乳清乳鐵蛋白治療56例兒童缺鐵性貧血臨床體會[J]. 大家健康（學術版）. 2013（20）：19-20

[4]Zhang D，Zhang Q，Zhou L，et al. Comparison of prevalence， viral load，physical status and expression of human papillomavirus-16， -18 and -58 in esophageal and cervical cancer： a case-control study[J]. BMC Cancer， 2010，10：650.

[5]葉秋容，馬健.天然免疫分子乳鐵蛋白的抗炎機制[J]. 生命的化學. 2013（03）：155

6 Davis C，Williams P，Parle M，et al.Assessing the support needs of women with early breast cancer in Australia[J]. Cancer Nursing，2004，27（2）：169-174.

編輯/許言