四種結核分枝桿菌檢測方法的臨床應用綜合評析

摘要：目的 探究培養、涂片、PCR和增菌PCR四種方法檢測結核分枝桿菌的臨床作用。方法 在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結核患者、35例疑似肺結核患者、35例非肺結核患者提取痰液分別進行培養、涂片、PCR、增菌PCR檢測，統計結果后進行比對。結果 臨床確診的35例肺結核患者的培養、涂片、PCR、增菌PCR（4d）、增菌PCR（7d）的四種檢測結果陽性率為25.7%、34.3%、54.3%、74.3%、88.6%；35例疑似肺結核患者的陽性率為14.3%、20.0%、34.4%、42.9%、51.4%。兩組數據均具有數學統計學差異（P<0.05）。35例非肺結核患者的痰標本培養、涂片檢測結果均為陰性，PCR和增菌PCR均出現2例（5.71%）假陽性（P<0.05）。結論 增菌PCR檢測法對于結核分枝桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性，可有效輔助診斷肺結核病。

關鍵詞：肺結核；PCR；涂片；培養

肺結核是肺部；受到結核桿菌影響而引起的肺部感染性疾病，已對人類健康造成重大威脅。傳播途徑為呼吸道，傳染源為肺結核患者。感染肺結核桿菌的健康人群不一定會發病，當其免疫力降低的時候才可能發病。根據每年的世界衛生組織的統計可知，每年世界上約會發生結核病800～1000萬，大約會死亡300萬，已經成為單一傳染病中死亡率最高的[1]。對于肺結核病而言，只要發現早治療合適還是可以治愈的，因此對肺結核的診斷尤為重要，本文對培養、涂片、PCR和增菌PCR四種方法檢測結核分枝桿菌的臨床作用進行對比分析，發現增菌PCR對結核桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性，現詳細報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結核患者、35例疑似肺結核患者、35例非肺結核患者提取痰液分別進行培養、涂片、PCR、增液PCR四種方法進行檢測。臨床確診的患者均經過確診；疑似結核病患者均為我院門診及住院患者；非肺結核病患者均為肺炎、肺癌、慢性支氣管炎患者等。

1.2 方法

1.2.1培養和培養 參照（結核病細菌學檢驗規程）[2]利用NaOH液化痰標本，用PBS離心處理2次，取出沉淀后用PBS溶解，隨后分別吸取0.1ml進行培養、涂片、PCR、增菌PCR檢測。

1.2.2 PCR擴增 參照標準步驟進行操作。設置條件為94℃變性5min，94℃1min；68℃1min；72℃1min；35次循環；72℃延伸5min。利用PCR-ELISA對擴增物進行鑒定[3]。

1.2.3增菌PCR 取上述經液化、離心洗滌處理后的標本沉淀物0.1ml接種在1ml液體培養基上，在37℃溫度下培養4d和7d，參照PCR方法進行檢查。

1.3統計學標準 本文數據均采用SPSS16.0軟件處理，用例數、百分數（n，%）進行數據表示，組間數據用χ2檢驗計數資料，P<0.05具有統計學意義。

2 結果

四種檢測方法的結果，臨床確診的35例肺結核患者的培養、涂片、PCR、增菌PCR（4d）、增液PCR（7d）的四種檢測結果陽性率為23.1%、33.4%、56.1%、66.3%、88.3%；35例疑似肺結核患者的陽性率為14.3%、19.3%、29.1%、38.3%、53.4%。兩組數據均具有數學統計學差異（P<0.05）。35例非肺結核患者的痰標本培養、涂片檢測結果均為陰性，PCR和增菌PCR均出現2例（5.71%）假陽性（P<0.05）。見表1。

3 討論

治療結核病最重要的便是提早診斷盡早治療。因此結核病的細菌學檢查在診斷早期具有重要意義。現在全球范圍內使用最廣泛最基本的細菌學檢查方法是痰涂片抗酸染色檢查，具有簡便快捷、價廉的優點，但是敏感性低、特異性差。細菌培養法靈敏度高于痰涂片法，檢查整體耗時長，約4～8w[4]。因此PCR就以其高靈敏度高特異性的優點成為了最有價值的診斷手段。本文為探究PCR的臨床診斷價值，在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結核患者、35例疑似肺結核患者、35例非肺結核患者提取痰液分別進行培養、涂片、PCR、增液PCR四種方法進行檢測，統計結果后進行比對發現：臨床確診的35例肺結核患者的培養、涂片、PCR、增菌PCR（4d）、增菌PCR（7d）的四種檢測結果陽性率為25.7%、34.3%、54.3%、74.3%、88.6%；35例疑似肺結核患者的陽性率為14.3%、20.0%、34.4%、42.9%、51.4%。兩組數據均具有數學統計學差異（P<0.05）。35例非肺結核患者的痰標本培養、涂片檢測結果均為陰性，PCR和增菌PCR均出現2例（5.71%）假陽性（P<0.05）。可得出結論：增菌PCR檢測法對于肺結核桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性，可有效輔助診斷肺結核病。

參考文獻：

[1]張翊，盧建平，葉淼.四種結核分枝桿菌檢測方法的臨床應用評價[J].中國防癆雜志，2006，12（01）：14-17.

[2]康麗軍，洪峰，馮建兵，等.結核/非結核分枝桿菌核酸快速檢測方法臨床應用價值[J].中國防癆雜志，2011，21（05）：263-266.

[3]袁凱.酶聯免疫斑點試驗在脊柱結核輔助診斷中的應用研究[D].南方醫科大學，2013：235-236.

[4]王華鈞，孫小軍，金法祥，諸雪萍.4種結核分枝桿菌檢測方法的比較[J].中華醫院感染學雜志，2012，11（7）：2472-2474.

編輯/哈濤