改良銀鹽染色法在幽門螺旋桿菌（HP）臨床檢驗中的應用價值探討

摘要：目的 介紹我院對傳統銀鹽染色法的改良方法及在幽門螺旋桿菌臨床檢驗中的應用效果與價值。方法 對我院收治的417例患者采用我院改良銀鹽染色法進行幽門螺旋桿菌的檢驗，同時與快速尿素酶試驗和14C-尿素呼氣試驗兩種檢驗方法進行對比。結果 我院改良銀鹽染色法對幽門螺旋桿菌的陽性檢出率、敏感度以及特異度均顯著高于其他兩種方法，比較均有統計學意義（P<0.05）。結論 我院改良銀鹽染色法在幽門螺旋桿菌臨床檢驗中不僅陽性檢出率、敏感度、特異度均令人滿意，而且較傳統銀鹽染色法在操作流程方面更為合理簡便，建議在臨床進一步推廣使用。

關鍵詞：幽門螺旋桿菌；檢驗；銀鹽染色法；改良

幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori，Hp）為一種微需氧的革蘭陰性螺旋狀細菌，其不僅是慢性活動性胃炎與消化性潰瘍的重要致病菌，而且也是萎縮性胃炎與腸上皮化生等癌前病變的促成因子之一，故國際衛生組織（WHO）已將其列為第一類致癌因子，并建議臨床應加強對Hp的檢驗工作[1]。但就其檢驗方法來看，銀鹽染色法（Warthin-Sharry，W-S）可謂是目前應用最為普遍同時效果也最為滿意的檢驗方法之一，但基于該方法在操作方面的復雜性，以至于在不同區域不同醫療機構中的具體開展流程時常存在有不同程度的差別，且多數均又存在不盡相同的不完善之處[2]。近些年內，我院在傳統W-S法基礎上進行了一定改良工作并在臨床實踐中獲得了頗為滿意的效果，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇于2012年5月～2014年6月因表現有不同程度消化系統癥狀并在我院接受胃鏡檢查的417例患者作為本研究對象，其中包括男255例，女162例；年齡18～71歲，平均（40.8±15.6）歲。所有患者均排除近1個月內有使用過任何抑酸藥物及抗Hp藥物者以及近1 w內有出現急性消化道出血者。

1.2方法 所有患者均在接受檢查前保持12 h以上的空腹，準備妥當后即在電子胃鏡輔助下于距幽門3 cm處取胃黏膜3塊待檢。其中2塊分別常規采用快速尿素酶試驗（RUT法）與14C-尿素呼氣試驗（14C-UBT法）進行檢驗[3]。另1塊則采用我院改良W-S法進行檢驗，具體方法為：首先對標本采用0.14 mol/L的甲醛水溶液進行固定處理，石蠟包埋切片（以4 um厚度為宜），接著采用二甲苯脫石蠟，之后再進行脫苯處理，采用各級乙醇過度到蒸餾水的程序進行刷洗，最后再將樣本在避光條件下置于維持溫度在60℃濃度為0.06 mol/L的AgNO3水溶液中進行1 h的侵染處理，完成染色后再次進行雙蒸餾水刷洗，接著將樣本置于顯影液中進行顯影，若在2～4 min內觀察到有出現組織變為棕褐色時即可結束顯影，同時傾倒出顯影液，并用自來水對切片適當涮洗，最后再將切片脫水處理至透明，采用光學樹脂封固后即可供醫生閱片診斷。

1.3陽性標準 RUT法中若標本在試劑中放置30 min內變為紅色即認為是陽性；14C-UBT法中最后的14C放射強度測定結果若>1.67 Bq則認定為陽性；改良W-S法中，若閱片時觀察到組織與細胞核分別呈金黃色與棕黑色，并在胃黏膜上皮觀察到呈短棒狀或S狀黑色影像則判定為陽性。

1.4統計學方法 對本次研究所得的數據通過SPSS 20.0統計學軟件處理，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為比較差異具有統計學意義。

2結果

2.1三種檢驗方法的陽性率比較 改良（W-S）法、RUT法以及14C-UBT法三種檢驗方法的陽性率分別為81.8%、66.7%與67.4%，比較以改良（W-S）法顯著更高，與其他兩種方法比較均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2三種檢驗方法的敏感度與特異度比較 改良（W-S）的敏感度與特異度分別達到了100.0%與96.4%，均顯著高于RUT法以與14C-UBT法（P<0.05）；同時RUT法與14C-UBT法的敏感度與特異度組間比較均無統計學意義（P>0.05），見表2。

3討論

相關資料顯示，在我國，一般人群的Hp感染率已經達到了50%以上[4]，在該種情況下，人們對Hp研究的關注愈發上升到了一個全新的高度，同時相關Hp感染的診斷學方法也成為了Hp研究領域的重要課題。這也在很大程度上促進多中檢驗方法的誕生，但基本上都尚存有某些不足之處。

就本研究所采用的3種檢驗方法來看，RUT法雖然具備廉價、操作簡便與反應快速的有點，但同時其檢測結果也很容易受到標本細菌密度與試劑靈敏度等因素的影響，以至于其陽性率與假陰性率均難以獲得很好控制，普遍認為不應將其單獨作為判定Hp感染的依據。而14C-UBT法雖然為目前比較普遍認可的非侵入性檢驗方法，但由于口咽部的尿素酶陽性細菌也很容易對尿素酶活性造成影響，故采用本法進行Hp檢驗時并不能達到非常理想的敏感度與特異度，而且在受到某些消化道雜菌或服藥與呼氣間隔時間等多種情況的影響，其檢驗結果也很容易出現假陰性。在次基礎上，在當前多種檢測侵入性Hp的方法當中，微生物培養法因其敏感性非常高而且特異度甚至可達到100%，故目前已有不少學者建議將此類方法作為診斷Hp感染的金標準，而W-S法即為此類方法中的重要成員之一。但傳統的W-S法因為操作步驟繁雜等原因常導致操作人員難以較好掌握，以至于可能致使最后檢驗結果出現著色不牢顯影不清等不足[5]。而經我院對W-S法進行改良后筆者認為已在以下3方面獲得了顯著進步：①將傳統的醋酸鹽緩沖液用雙蒸餾水替代，在很大程度上簡化了試劑配制；②顯影擺脫了傳統方法必須將溫度控制在40℃～50℃范圍的約束，本法在室溫下即可完成顯影故其過程也更為簡單；③將染色時間延長至2～4 min，大大提升了染色質量，診斷更為明確。

本研究結果顯示，我院所開展的改良W-S法較RUT法與14C-UBT法在陽性檢出率、敏感度以及特異度3方面效果均顯著更具優勢，同時也較傳統W-S法在操作流程方面更為合理簡便，建議在臨床進一步推廣使用。

參考文獻：

[1]金明哲.幽門螺桿菌檢測方法研究進展[J].檢驗醫學與臨床，2012，9（9）：1099-1101.

[2]劉莉，劉都禮，李佽，等.檢測胃幽門螺旋桿菌三種染色方法比較[J].華西醫學，2010，25（1）：80-81.

[3]姚曉燕，毛建英，嵇學仙.幽門螺旋桿菌感染4種檢測方法的評價[J].現代實用醫學，2010，22（10）：1123-1124.

[4]江南，劉泳冬.改良Giemsa法和硼酸美蘭法檢測幽門螺桿菌感染的臨床比較[J].中國實驗診斷學，2011，15（7）：1131-1132.

[5]黃培寧.幽門螺桿菌Warthin-Starry銀鹽染色方法的改進[J].廣西醫科大學學報，2005，20（2）：302.

編輯/肖慧