ELISA法檢測抗—HIV實(shí)驗(yàn)中灰區(qū)設(shè)置的探討

摘要：目的 通過回顧性分析，對(duì)ELISA法檢測抗-HIV結(jié)果判斷時(shí)灰區(qū)設(shè)置的必要性進(jìn)行探討。方法 對(duì)本站近7年ELISA法檢測抗-HIV資料進(jìn)行分析。結(jié)果 分析發(fā)現(xiàn)，灰區(qū)的設(shè)置增加了假陽性的標(biāo)本數(shù)，經(jīng)經(jīng)確證試驗(yàn)為HIV感染的標(biāo)本均不是灰區(qū)范圍內(nèi)的標(biāo)本。結(jié)論 ELISA法檢測抗-HIV時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按試劑說明書判斷陰、陽性，無需另設(shè)置灰區(qū)。

關(guān)鍵詞：ELISA法檢測；HIV；灰區(qū)設(shè)置

人類免疫缺陷病毒（HIV）感染標(biāo)志物的檢測是采供機(jī)構(gòu)對(duì)獻(xiàn)血標(biāo)本進(jìn)行血液篩查的法定項(xiàng)目之一，通過篩查把合格的血液用于臨床是阻斷經(jīng)血轉(zhuǎn)播HIV的重要手段。ELISA方法檢測HIV感染標(biāo)志物則是采供血機(jī)構(gòu)檢測抗-HIV的重要方法。在用ELISA方法測定HIV抗體時(shí)，是根據(jù)臨界值（Cut-Off值）來判斷是否有反應(yīng)性，并決定相應(yīng)的血液是否能用于臨床。在計(jì)算臨界值時(shí)，常設(shè)置灰區(qū)，希望以此提高試劑的敏感度，淘汰處在弱陽性甚至\"窗口期\"的標(biāo)本，而灰區(qū)設(shè)置的范圍并沒有統(tǒng)一的設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)，各實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)置。那么設(shè)置灰區(qū)是否能提高對(duì)抗-HIV檢測的敏感度？我們對(duì)此進(jìn)行了探討。筆者對(duì)本站從2007年～2013年2月抗-HIV檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果報(bào)告如下：

1資料與方法

1.1一般資料 本站2007年～2013年2月本單位無償獻(xiàn)血標(biāo)本115766份。

1.2試劑與儀器 抗-HIV檢測試劑分別使用了廈門新創(chuàng)、珠海珠和法國伯樂生產(chǎn)的試劑盒，所有試劑均批批檢合格。所用儀器有瑞士Tecan公司加樣儀和德國BEPⅢ，sunrise酶標(biāo)儀等。

1.3標(biāo)本試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算和判定 按試劑說明書計(jì)算臨界值（CO），初、復(fù)檢及重復(fù)試驗(yàn)吸光度值（OD）大于CO×80%的均判定為有反應(yīng)性，即S/CO值在0.8～1.0之間的標(biāo)本設(shè)置為灰區(qū)的標(biāo)本。在初檢和復(fù)檢過程中所有有反應(yīng)性的標(biāo)本送本市疾病控制中心，采用蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WB法）進(jìn)行確證。最后陽性及不確定的結(jié)果以疾病控制中心（CDC）確證實(shí)驗(yàn)為準(zhǔn)。

2結(jié)果

陰、陽性及灰區(qū)的標(biāo)本分布：在115766標(biāo)本中，篩查為陰性的標(biāo)本115766份，陽性及灰區(qū)的標(biāo)本820份。820份中在灰區(qū)的標(biāo)本為78份，占9.5%。將這些標(biāo)本送本市CDC進(jìn)行確證，見表1。

3討論

HIV是1種可經(jīng)輸血傳播的嚴(yán)重的傳染病，采供血機(jī)構(gòu)對(duì)無償獻(xiàn)血的血液標(biāo)本進(jìn)行抗-HIV篩查，是阻斷HIV傳播的重要手段。

灰區(qū)設(shè)置就是將臨界值（CO值）下調(diào)一定的值，在這個(gè)范圍內(nèi)的標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測，如果仍在灰區(qū)即報(bào)陽性。設(shè)置的范圍一般有兩種，一種是根據(jù)室內(nèi)質(zhì)控的CV，一般在15～20%之間，另一種是根據(jù)室內(nèi)質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)差。本站是將臨界值（CO）與CO×80%范圍的OD值設(shè)為灰區(qū)范圍，即S/CO值在0.8～1.0之間的標(biāo)本設(shè)置為灰區(qū)的標(biāo)本。

筆者對(duì)近6年的抗-HIV篩查進(jìn)行回顧性分析，發(fā)現(xiàn)在有反應(yīng)性的標(biāo)本中，經(jīng)確證實(shí)驗(yàn)（WB法）確證為抗-HIV陽性的標(biāo)本，在ELISA方法檢測時(shí)S/CO值明顯增高，而且兩種試劑均有反應(yīng)性，S/CO的值均大于7以上。S/CO值在1.0～5.4之間的標(biāo)本，經(jīng)本市CDC確證，均為陰性或不確定，其中不確定的20份，其余均為陰性。在灰區(qū)范圍的標(biāo)本，即S/CO值在0.8～1.0之間的標(biāo)本，有2份為不確定，其余均為陰性。對(duì)結(jié)果為不確定的獻(xiàn)血者經(jīng)電話跟蹤隨訪6個(gè)月以上，無1例陽性，說明并不是真正的HIV感染者。可以說在灰區(qū)范圍內(nèi)的標(biāo)本均是假陽性。在有反應(yīng)性的標(biāo)本中，最后確證為陽性的標(biāo)本與陰性的標(biāo)本有明顯的界限，灰區(qū)范圍內(nèi)的標(biāo)本均是假陽性，因此，筆者認(rèn)為，設(shè)置灰區(qū)沒有實(shí)際意義，沒有必需設(shè)置。

ELISA方法受到很多因素的影響，有試劑、標(biāo)本、設(shè)備、人員操作及環(huán)境等因素。假陽性和假陰性都有可能，其中試劑的敏感度在血液篩查中無疑是最關(guān)鍵的因素[1]。如果試劑的敏感度不夠，不論是否設(shè)置灰區(qū)，都存在漏檢的可能。反之，如果選擇了高敏感度的試劑，由于ELISA方法檢測的是抗體，雖然第四代試劑也能同時(shí)檢測抗原，但方法學(xué)決定了\"窗口期\"是不可避免的，這是由ELISA方法學(xué)的本身的局限性決定的，因此存在漏檢的可能，但企圖通過設(shè)置灰區(qū)來防止漏檢顯然是不現(xiàn)實(shí)的，在抗-HIV篩查實(shí)驗(yàn)中灰區(qū)的設(shè)置并不象抗-HCV檢測和乙肝表面抗原檢測中能起到防止漏檢的作用[2]。《血站技術(shù)操作規(guī)程》2012版中4.8.3規(guī)定，判定試驗(yàn)有效后，按照試劑說明書的要求計(jì)算臨界值和灰區(qū)，根據(jù)標(biāo)本檢測值與臨界值的比較結(jié)果，判定為標(biāo)本檢測結(jié)論為無反應(yīng)性、有反應(yīng)性或不確定。同時(shí)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）》也沒有提到灰區(qū)設(shè)置的概念。因此建議規(guī)范灰區(qū)設(shè)定范圍，嚴(yán)格按試劑說明書設(shè)置，而不是各試驗(yàn)室各自憑經(jīng)驗(yàn)設(shè)置，試劑說明書中如果沒有要求設(shè)置灰區(qū)，建議不要人為設(shè)置灰區(qū)。同時(shí)建立質(zhì)量體系，提高檢測的精密度，并在此基礎(chǔ)上，提高對(duì)HIV的檢出率，防止漏檢，或者用更敏感的方法，如核酸檢測等，而不要人為地設(shè)置灰區(qū)。

參考文獻(xiàn)：

[1]溫秀明，鄔旭群，劉永梅，等.深圳市志愿無償獻(xiàn)血者HIV感染狀況分析[J].中國輸血雜志，2012，25（8）：769-770.

[2]張軍，楊潔.獻(xiàn)血者血液抗-HIV初篩與確證試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比[J].中國輸血雜志，2012，25（4）：385.

編輯/孫杰