索林LIAISON XL化學發光免疫分析系統檢測乙肝兩對半的性能評價

摘要：目的 對索林LIAISON XL化學發光免疫分析系統主要性能進行評價。方法 以CLSI（美國臨床實驗室標準化委員會）制定的評價標準，通過一系列實驗設計，對索林LIAISON XL化學發光免疫分析系統乙肝兩對半檢測的精密度、線性范圍、符合率、分析靈敏度等進行評價。結果 LIAISON XL化學發光免疫分析系統進行乙肝兩對半檢測，批內不精密度CV在 1.56～3.07%，批間不精密度在2.64～5.44%，HBsAg、HBsAb、HBeAg的分析靈敏度分別為 0.03IU/ml 、5 mlU/ml、0.01PEIU/ml。結論 LIAISON XL化學發光免疫分析系統各方面性能良好，測定樣本快速，準確度精密度可靠，能適應醫院臨床樣本的檢測需要。

關鍵詞：乙肝血清標志物；化學發光免疫分析系統；性能評價

乙型肝炎（hepatitis B）是由HBV感染引起的傳染病，世界范圍內均有流行，我國則是乙型肝炎病毒感染的高發區[1]，所有乙肝患者中有15%～25%將死于慢性肝病（肝癌，肝硬化），因此，HBV感染是一個嚴重的公共衛生問題。及時準確的實驗室診斷方法對效控制HBV傳播顯得尤為重要。隨著對乙肝研究的深入和新的抗病毒藥物的問世，僅僅定性檢測己經滿足不了臨床需求。近年來，隨著定量免疫檢測技術平臺的完善和新的檢測技術化學發光技術的發展和成熟[2，4]，乙型肝炎定量檢測己經成為不少實驗室的選擇。隨著實驗室規范化建設的發展以及對檢驗質量的追求，對于實驗室檢測系統的性能評價己經越來越受到人們重視。我們對本科室目前新投入使用的LIAISON XL化學發光免疫分析系統及配套乙肝兩對半檢測試劑盒進行了初步性能評價，現報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 索林LIAISON XL化學發光免疫分析系統，乙肝兩對半檢測試劑盒及配套校準品，上海市臨床檢驗中心提供的室內質控物（批號1401）。

1.2標本來源 本院門診及住院患者血清以及各項目臨床異常高值標本。

1.3方法

1.3.1實驗準備 對儀器進行維護保養及校準，連續觀察儀器運行狀態一周，運行穩定且狀態良好，熟悉儀器操作及實驗步驟后進行各項性能評價。所有實驗運行均在儀器狀態良好，質控在控前提下進行。

1.3.2實驗設計

1.3.2.1 批內及批間不精密度 依據NCCLS-EP15A文件，將患者混合血清分別分裝5管放置于-20℃冷凍保存，每天解凍1管上機重復檢測4次，連續5d。

1.3.2.2 線性評價 按照NCCLS-EP6要求：各選取一份高值（H）和低值（L）患者標本（必須接近檢測高限和低限），用于線性范圍參數驗證實驗。樣本分別按H、4H+L、3H+2L、2H+3L、H+4L、L的比例進行稀釋，每個稀釋度重復測定2次，計算均值。

1.3.2.3分析靈敏度 使用接近檢測下限的患者標本， 將樣本上機后連續檢測20次，計算該濃度下光信號的檢測數據，統計平均值（mean）、標準偏差（SD）、變異系數（CV）。變異在20%內為可接受。

1.3.2.4符合率 按照NCCLS-EP12-A2文件要求，HBeAb、HBcAb的檢測結果是以index的形式表達定性結果，符合率采用陰陽性樣品各50份與原先使用的LIAISON發光分析儀檢測結果做比對。

1.3.2.5數據處理 所有數據均使用Microsoft office Excel 2003軟件處理。

2結果

2.1批內及批間不精密度評價 見表1所示，本實驗室檢測乙肝標志物所得CV均在廠家聲明的范圍之內，為可接受水平。

2.2 LIAISON X檢測乙肝標志物線性評價 將實測值與理論值作比較，計算 y=bx+a，驗證線性范圍。斜率b值在1±0.05范圍內，相關系數r≥0.975即線性符合要求。HBsAg線性測試結果分別見表2及圖1所示。用相同方法分別驗證HBsAb、 HBeAg、HBeAb、HBcAb檢測線性結果見表3。

2.3分析靈敏度驗證 廠家提供的HBsAg、HBsAb 、HBeAg的檢出下限分別為 0.03IU/ml、5 mlU/ml、0.01PEIU/ml。采用接近檢出下限的患者標本，連續檢測20次，得到該濃度下光信號的檢測數據，平均值（mean）分別為716.9、545.05、402.45；標準偏差（SD） 分別為72.2123、94.5696、52.1864；變異系數（CV） 分別為10.07%、17.35%、12.97%，變異系數均在20%以下，為可接受范圍。

2.4符合率 用患者血清樣本對兩測試系統進行方法學比對， HBeAb、HBcAb的檢測結果是以index的形式表達定性結果，符合率采用陰陽性樣品各50份與原先使用的LIAISON發光分析儀檢測結果做比對。兩種測試結果完全相同，符合率100%，即敏感性和特異性均為100%，敏感性差值（D）=0%；特異性差值（D）=0%。兩個系統檢測結果有很好地一致性（Kappa值=1）。

3討論

HBV血清標志物的檢測方法包括酶聯免疫分析法（EIA）、放射免疫分析法（RIA）、微球酶免分析法（MEIA）、以及化學發光免疫分析法等。全自動化學發光免疫分析方法極大地改善了HBV標志物檢測的靈敏度和特異性。然而，由于免疫分析方法難以標準化，導致不同免疫分析系統測定結果之間存在差異，因此為保證檢驗結果的準確可靠，對全自動免疫分析系統進行客觀的性能評估非常重要[3-5]。

檢測結果的重復性對乙肝標志物檢測非常重要，可用精密度來評價結果的重復性。本文依據NCCLS-EP15A文件[6]，將患者混合血清分別分裝5管放置于-20℃冷凍保存，每天解凍1管上機重復檢測4次，連續5d。結果表明LIAISON XL化學發光免疫分析系統進行乙肝兩對半檢測時很好的重復性，，批內不精密度CV在 1.56～3.07%，總不精密度在2.64～5.44%。

檢測患者標本時，當標本中乙肝標志物濃度在檢測系統的線性范圍時，檢測結果更接近于被測物的真值，此謂檢測結果的可靠性。對于LIAISON XL檢測乙肝標志物的線性范圍，未見有文獻進行相關評價，廠家提供的申明認為線性斜率b值在1±0.05范圍內，相關系數r≥0.975即線性符合要求。本驗證試驗所得HBsAg、 HBsAb、 HBeAg、HBeAb、HBcAb均有良好的線性范圍（斜率b在0.9608～1.0190 之間， r2 為0.9963～0.9998），能夠確保高值樣在稀釋的條件下，得到較高可信度的檢測結果。使用接近檢測下限的患者標本， 將樣本上機后連續檢測20次，得到該濃度下光信號的檢測數據，計算變異系數（CV）均在20%以下，表明該檢測系統的分析靈敏度符合廠家的申明。

目前，國內乙肝標志物的檢測主要采用ELISA法和各種化學發光法。檢測試劑、儀器、操作人員等的差異，同一檢測標本在不同實驗室、不同檢測方法、不同檢測系統之間檢測結果的一致性難以得到保證。LIAISON XL化學發光免疫分析系統是LIAISON升級版，反應倉位增加，加樣的獨立性及一次性使用的吸樣頭避免了交叉污染的可能。按照NCCLS-EP12-A2文件要求[7]，HBeAb、HBcAb的檢測結果是以index的形式表達定性結果，本研究采用陰陽性樣品各50份與原先使用的LIAISON發光分析儀檢測結果作比對，計算符合率，兩者測試結果完全相同，符合率100%，確保了檢測結果的一致性。

隨著實驗室規范化建設的發展以及對檢驗質量的追求，對于實驗室檢測系統的性能評價己經越來越受到人們重視。綜合本研究對LIAISON XL化學發光免疫分析系統檢測乙肝標志物HBsAg、 HBsAb、 HBeAg、HBeAb、HBcAb精密度、線性范圍、符合率、分析靈敏度等的系統評價，表明該系統測定樣本快速，各方面性能良好，能適應醫院臨床樣本的檢測需要。

參考文獻：

[1]中華醫學會肝病學分會中華醫學會感染病分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年更新版）[J/CD].中華實驗和臨床感染病雜志：電子版，2011，5（1）：79-100.

[2]Xu W，Yan L，Wang M，et al. Comparison of two immunoassys for determining hepatitis B virus serum markers [J]. Clin Chem Lab Med， 2011， 49（10）：1621-1632.

[3]Cheng LM，Guan Q，Zhang JX， et al.Discrepancies between automated immunoassay systems in determining hepatitis B virus makers in serum samples with concomitant presence of antigens and antibodies[J].Ann Clin Lab Sci，2010，40（1）：49-52.

[4]Park Y，Duck JH，Saeam S， et al. Performance evaluation of new automated hepatitis B viral markers in clinical Laboratory [J]. Am J Clin Pathol， 2012， 137：770-777.

[5]Choi SJ，Payk Y，Kim S，et al. Performance evaluation of LUMIPULSE G1200 auto immunoanalyzer for the detection of serum hepatitis B virus markers [J]. J Clin Lab Anal， 2013， 27（3）：204-6.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.User demon-stration of performance for precision and accuracy[J].EP15-A2.2004.

[7] Clinical and Laboratory Standards Institute.Userprotocol for evaluation of qualitative test performance；approved guideline[J].EP12-A2，CLSI.2008.編輯/申磊