淫羊藿苷對小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究？

摘要：目的 探討淫羊藿苷（ICA）對東莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的保護(hù)作用。方法 40只小鼠隨機(jī)分為4組（對照組，模型組，ICA低、高劑量組）。連續(xù)給藥10d，通過自主活動、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測學(xué)習(xí)記憶能力的改變。結(jié)果 ICA可以改善記憶障礙小鼠的自主活動次數(shù)、空間探索能力以及定位航行能力，縮短小鼠在空間探索及定位航行實(shí)驗(yàn)的潛伏期。結(jié)論 淫羊藿苷可改善東莨菪堿所致小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙。

關(guān)鍵詞：淫羊藿苷；東莨菪堿；學(xué)習(xí)記憶障礙；保護(hù)作用

阿爾茨海默?。?Alzheimer's disease，AD） 是一種以認(rèn)知功能障礙為主要特征的漸進(jìn)性神經(jīng)退行性疾病，隨著社會老齡化，阿爾茨海默病發(fā)病率逐年增高，嚴(yán)重影響老年人的生活質(zhì)量。因此探尋該病的病因和治療具有深遠(yuǎn)的臨床意義和社會意義。目前，臨床治療癡呆多選用膽堿酯酶抑制劑。為尋找有效治療藥物，經(jīng)查閱大量的文獻(xiàn)資料，小檗科淫羊?qū)僦参镆蜣剑℉erba Epimedii），其主要有效成分為淫羊藿苷（icariin）[1-2]。可提高腦內(nèi)胺類遞質(zhì)水平，對氧自由基有較強(qiáng)的清除能力，具有抗氧化、延緩衰老的作用，還可提高免疫功能，抑制血管平滑肌細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流，降低腦血管阻力，改善腦缺血的癥狀，抑制血栓形成。本研究旨在探討淫羊藿苷對東莨菪堿所致鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響及其作用機(jī)制，為其進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)藥理學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動物 BALB-C小鼠，♀♂兼半，體重（24g±2）g，由河南科技大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 藥物與試劑 淫羊藿苷（西安昊軒生物科技有限公司，批號20140218，純度：98%）；注射用丁溴東莨菪堿（成都天臺山制藥有限公司，批號120701）；氯化鈉注射液0.9%（河南科倫藥業(yè)有限公司，批號B14012004-2）；膽堿酯酶試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3 儀器 冷凍高速離心機(jī)（TGL-16G，上海安亭科學(xué)儀器廠）；722S分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；FA1004B（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；Morris水迷宮（成都泰盟有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組 BALB-C小鼠40只，隨機(jī)分為4組：對照組（生理鹽水，0.1ml/10g，ip）、模型組（東莨菪堿，0.1ml/10g，ip）、淫羊藿苷高、低劑量組（在模型組基礎(chǔ)上給淫羊藿苷75mg/kg、25mg/kg，ig）。

2.2 自主活動實(shí)驗(yàn) 給藥10d后進(jìn)行自主活動實(shí)驗(yàn)，讓小鼠在活動盒（4×6個格，每格8.5cm×8.5cm）內(nèi)進(jìn)行自主活動，記錄小鼠在5min內(nèi)所走的格子數(shù)。

2.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 各組于給藥第11d進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。平臺放置于其中的一個象限中間，水池水面高出平臺2cm，水溫控制在（25±2）℃。在池中注水并放入適量牛奶使水呈乳白色，每只小鼠身上帶有黃色標(biāo)記，第一天進(jìn)行定位航行，訓(xùn)練1次，60s未找到平臺者，隨將其放置平臺上10s進(jìn)行引導(dǎo)，記錄潛伏期和有效運(yùn)動距離。第2、3、4d重復(fù)進(jìn)行。第5d進(jìn)行空間探索測試，撤除平臺，在同樣的入水點(diǎn)將小鼠放入水中，讓小鼠在水中游泳60s，記錄有效運(yùn)動時間和有效運(yùn)動距離[3-4]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用x±s表示。

3 結(jié)果

3.1 自主活動實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與對照組相比，模型組自主活動次數(shù)明顯減少；與模型組相比，淫羊藿苷組自主活動明顯增加（P<0.05），見表1。

3.2 Morrois水迷宮實(shí)驗(yàn)

3.2.1藥物對小鼠定位航行能力的影響如圖1～4。

與對照組相比，模型組的潛伏期長（P<0.05），有效運(yùn)動距離短，表明模型組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力差，造模成功；與模型組相比，淫羊藿苷2個劑量組的潛伏期短，有效運(yùn)動距離長，表明淫羊藿苷對小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力具有改善作用（見表2）。

3.2.2 藥物對小鼠空間探索能力的影響 ICA對空間搜索能力的影響：與對照組相比，模型組的空間搜索能力下降，在平臺象限停留的時間顯著縮短（P<0.05）；有效區(qū)域運(yùn)動距離顯著減少（P<0.05）。ICA組小鼠的探索能力明顯提高（見表3）。

由表3及探索軌跡圖像可見：模型組搜索距離明顯延長，在原安全島所在象限的搜索時間明顯減少。淫羊藿苷組均可縮短小鼠的逃避潛伏期及搜索距離，明顯延長在原安全島所在象限的搜索時間，增加游泳距離。

4 討論

隨著老齡人的增加，老年癡呆發(fā)病率呈上升趨勢，老年性癡呆是以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病，學(xué)習(xí)記憶障礙是其主要表現(xiàn)。老年斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)和神經(jīng)元丟失為其特征，眾多學(xué)說如中樞膽堿能低下、鈣穩(wěn)態(tài)失衡、細(xì)胞凋亡、缺氧能量代謝障礙等為其發(fā)病機(jī)制，因此，目前對其治療采用綜合方法，臨床治療的一線藥物多是用擬膽堿藥、擴(kuò)腦血管藥以及抗氧化藥等[5-6]。

本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射東莨菪堿，較好的建立了癡呆小鼠模型。在傳統(tǒng)西藥治療的基礎(chǔ)上，中草藥的開發(fā)利用將為其治療保全增效，淫羊藿性味辛甘、溫，有補(bǔ)腎壯陽、祛風(fēng)除濕的功效。還具有強(qiáng)心、降血壓、抗心律失常、增加腦血流量、抑菌、抗病毒、抗炎、降血脂、抗腫瘤等多種作用，具有較高的藥用和保健價值。其有效成分淫羊藿苷能增加心腦血管血流量、促進(jìn)造血功能、免疫功能及骨代謝，具有補(bǔ)腎壯陽、抗衰老、抗腫瘤等功效[7-8]。通過本實(shí)驗(yàn)研究可見淫羊藿苷明顯縮短到達(dá)平臺的潛伏期，有效距離明顯延長等，ICA改善學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。為其今后的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)，至于其作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步的探討。

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