疏肝健脾祛濕方對非酒精性脂肪肝的實驗研究

摘要：目的 觀察疏肝健脾祛濕方對非酒精性脂肪肝模型的影響。方法 雄性Wistar大鼠60只隨機分為三組（每組20只）：正常組喂養飼料用普通型，對于治療組和模型組則采用高脂飼料來進行喂養。開始試驗后，治療組要給予疏肝健脾祛濕方灌胃，與此同時用等量的飲用水來對正常組以及模型組來灌胃，最后在第8w末來將各組大鼠處死。HE染色觀察肝臟病理組織學改變， 測定肝組織膽固醇（TC）、甘油三酯（TG） 、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGFlα）含量及TXB2/6-Keto-PGFlα（T/PG 比值）。結果 治療組老鼠肝臟的脂肪變性問題得到了有效改善，HDL-C和6-Keto-PGFlα含量顯著高于模型組；TC、TG、LDL-C、TXB2和TXB2/6-Keto-PGFlα 比值明顯低于模型組。結論 疏肝健脾祛濕方能有效的改善肝臟脂肪變性問題，使HDL-C和6-Keto-PGFla含量升高，使TXB2/6-Keto-PGFlα比值以及TC、TXB2、TG、LDL-C含量明顯降低，這很有可能就是抗非酒精性脂肪肝的作用原理。

關鍵詞：疏肝健脾祛濕方；脂質；非酒精性脂肪肝；血栓素B2；6-酮-前列腺素F1α

非酒精性脂肪肝指的是一些沒有過度飲酒經歷的患者的肝細胞由脂肪變性繼續惡化引發炎癥并且纖維化的疾病。一些研究指出，當肝臟中的炎癥程度的加深，會引發前列環素的減少和血栓素）的增多，導致肝細胞一些功能性障礙。此外由于飲食中的脂肪含量過高會使得體內的脂肪代謝出現問題，從而大量堆積到肝臟進而形成脂肪肝。本實驗以大鼠為研究對象，通過對大鼠體內肝組織中的6-酮-前列腺素、F1α血栓素以及脂質的含量的測定，并用疏肝健脾祛濕方治療，來為讀者提供可參考的論據。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1動物 雄性Wistar大鼠60只，體重180～220g。

1.1.2試劑與儀器 膽固醇（TC） 、甘油三酯（TG） 試劑盒；高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒；血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGFlα）放免試劑盒；全自動生化分析儀（Olympus Aul00O）；γ放射免疫計數器；離心機。

1.1.3 藥物 疏肝健脾祛濕方（主要由蒼術、白術、厚樸、茯苓、陳皮、木香、莪術等組成）。

1.2方法

1.2.1分組 大鼠正常喂養1w后，按體重層次隨機分為三組，每組各20只，相應組別為：正常組、模型組、治療組。

1.2.2動物模型制備和藥物劑量 正常組喂普通飼料，模型組和治療組喂高脂飼料（85%普通飼料加2%膽固醇和13%的豬油）。實驗動物自由飲水，分籠飼養于18℃～22℃的動物實驗室內。每天早8：00～晚20：00為采光時間，早8：00～9：00，下午15：00～16：00喂食、給藥。實驗開始后，治療組以疏肝健脾祛濕方灌胃，2次/d，每周根據鼠重調整藥物劑量；正常組以及模型組通過等量的飲用水來灌胃，2次/d。持續12w。

1.2.3肝臟觀察 肝臟石蠟切片，HE染色，利用光鏡觀察大鼠肝臟的脂肪改變程度并同時來估計炎癥的程度。肝細胞的脂肪變性的程度評判標準是，脂滴肝細胞占肝細胞總數1/3為（+），1/3-2/3為（++），大于2/3為（+++），幾乎均呈脂滴肝細胞為（++++）。炎癥的程度計分：按碎屑壞死、橋接壞死、匯管區炎癥及小葉內炎癥這四項指標，再根據炎癥程度分別計為1、2、3、4分，考慮到BN、PN的嚴重度與病變活動度有一定的聯系，在計分時采取加倍。

1.2.4標本的采集以及測定方法 12w后全部處死大鼠，取出其肝臟置于4℃生理鹽水中反復漂洗，并通過研磨制得勻漿，離心10min后取上層組織液，在全自動生化分析儀上測定肝勻漿TC、TG、HDL-C和LDL-C；按6-Keto-PGF1α和TXB2放射免疫分析測定盒相關的操作步驟來測量6-Keto-PGF1α和TXB2的含量。

1.3統計方法 計量相關資料用 （x±s）表示，組與組之間的比較用t檢驗，等級相關資料通過秩和檢驗。采用SPSS13.0統計軟件包來有效處理。P<0.05表示差別具有統計學特征，P<0.01表示差異非常顯著。

2 結果

2.1動物的一般情況 飲食普通的大鼠行動較為活躍，被毛整潔；高脂肪飲食飼養的大鼠的行動遲緩；模型組的大鼠比治療組的大鼠的被毛更加散亂被毛散亂且光澤度降低。

2.2肝組織學變化。

2.2.1形態特征 正常組大鼠的肝臟體色為紫紅色，質地柔軟，邊緣銳利，切面光潔；模型組大鼠的肝臟體積隨造模時間延長明顯增大，呈淺黃，邊緣飽滿，質地稍韌，與周圍組織嚴重粘連，不易分離；治療組大鼠肝臟輕度腫大，隨治療時間延長，部分肝臟接近正常，表面呈紫紅色，邊緣較銳利，質地較正常對照組略差。

2.2.2組織病理學改變 HE染色光鏡下觀察，正常組大鼠的肝小葉結構較為完整而且肝細胞一般呈多邊形，沒有異常的情況；模型組大鼠的肝組織彌漫性脂肪變，匯管區以及小葉內會發生不同程度的炎癥細胞浸潤和壞死；治療組大鼠的肝細胞仍然成現索條裝，且與模型組相比較其脂變程度顯著減輕，一些輕微型炎癥細胞未見壞死。模型組炎癥活動度計分明顯高于正常組，治療組炎癥活動也明顯減輕（見表1）。

2.2.3疏肝健脾祛濕方對非酒精性脂肪肝大鼠肝組織TC、HDL-C、TG、LDL-C、6-Keto-PGF1α和TXB2含量及其比值（T/PG 比值）的影響 模型組肝TXB2、LDL-C、TG、TC、T/PG比值比正常組高，6-Keto-PGFlα、HDL-C比正常組低。相比于模型組，治療組肝LDL-C、TC、TXB2、TG、T/PG比值明顯降低，6-Keto-PGFlα、HDL-C明顯升高。見表2、表3。

3 分析

非酒精性脂肪肝始為肝細胞脂肪變性，發展到炎癥，甚至進一步可惡化為肝硬化，最終導致肝功能急劇衰竭并引發肝癌。其病理相關生化基礎是在氧應激和脂質過氧化反應的基礎上誘導肝臟發生的炎癥反應。當前研究表明，非酒精性的脂肪肝的病例在逐年上升，且逐漸蔓延到低年齡人群。為此，它的防治已成為目前醫學界重點關注的問題。

TXB2以及6-K-PGF1a是體內重要的微循環調節體系，分別是血栓素A2（TXA2）和前列環素（PGI2）的代謝產物。TXB2增多、6-K-PGF1α減少可通過影響肝臟微循環導致肝細胞功能障礙，進而發生肝細胞發生變性壞死及纖維化。大量研究顯示TXB2/6-K-PGF1α失調可能參與非酒精性脂肪肝的發病，通過相關措施維持TXB2/6-K-PGF1α的動態平衡可能有助于該病的防治。

中醫認為，脂肪肝是由于過食肥甘厚味，傷食礙胃，或久臥久坐，體豐痰盛所致肝疏泄失職，脾運化無權，水濕內停，氣滯血瘀而形成。本方劑中蒼術、厚樸補氣健脾化濕；白術補氣健脾燥濕；茯苓有利水滲濕之功效；木香、陳皮有疏肝健脾之功效 ；莪術具有破血行氣消積止痛之功效。全方具有健脾祛濕，補氣活血等功效。本實驗研究結果表明，疏肝健脾祛濕方可降低肝組織中TC、TG、LDL-C、TXB2的含量，升高HDL-C和6-K-PGF1α的含量，減輕肝臟脂肪變性程度，其作用機制可能是通過調節肝臟脂質代謝，維持肝組織TXB2/6-Keto-PGFlα的平衡，改善肝臟微循環、減輕肝臟的炎癥程度等。因此，疏肝健脾祛濕方對非酒精性脂肪肝具有顯著的防治作用，同時在臨床上提供了防治該病的理論依據。

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編輯/哈濤