消渴湯對大鼠類胰升血糖素肽—1和胰島素分泌的調控作用

摘要：目的 研究消渴湯對NIDDM鼠GLP-1和胰島素的調控作用。方法 用酶聯免疫對正常和NIDDM鼠，在給消渴湯后GLP-1和胰島素變化檢測。結果 消渴湯對正常鼠GLP-1和胰島素分泌無影響；可使NIDDM鼠口服葡萄糖后GLP-1和胰島素分泌水平增高。結論 消渴湯可增強NIDDM鼠GLP-1和胰島素分泌。

關鍵詞：消渴湯；Ⅱ型糖尿病大鼠；類胰升血糖素肽-1；胰島素

Ⅱ型糖尿病（NIDDM）是中老年人常見病，隨著生活水平提高，發病率逐年上升。

類胰升血糖素肽-1（Glucagon-like peptide-1，GLP-1）是作用最強腸促胰島素[1]，其作用有很強糖依賴性，可以增加胰島素前體轉錄和刺激胰島素合成，是最安全降血糖物質。本實驗用具有降糖作用消渴湯為處理因素。通過酶聯免疫對正常及Ⅱ型糖尿病大鼠在給消渴湯后空腹及口服葡萄糖后GLP-1和胰島素進行研究。為臨床進行GLP-1治療糖尿病提供新思路并為后續研究奠定基礎。

1資料與方法

1.1實驗動物及主要試劑

1.1.1健康3個月齡Wistar雄性大鼠30只，體重200～250 g（佳木斯大學動物中心）。

1.1.2消渴湯（天花粉、山藥等）購于佳木斯大學附屬一院，鏈尿佐菌素（STZ，Sigma公司），GLP-1和胰島素酶聯免疫測定盒（北京301放射免疫研究所）。

1.2動物模型建立及成功判定標準 大鼠30只，隨機分成兩組。一組20只有尾靜脈注射25 mg/Kg STZ。2 w后測糖耐量，選15只異常者喂高脂、高糖、高熱量飼料，為Ⅱ型糖尿病模型組[2]。另一組10只大鼠不注射STZ，正常飲食，為正常對照組。實驗第8 w模型組與正常組動物分別靜脈取血測空腹甘油三酯與膽固醇含量，并進行葡萄糖耐量實驗。以模型組中體重變化顯著，糖耐量異常，葡萄糖負荷后2 h血糖值≥11.1 mmol/L，甘油三酯、膽固醇濃度升高，與正常組存在顯著差異者為成功模型。

1.3藥物處理 模型組隨機分為二組：模型給藥組（A組）、模型對照組（B組）；正常組隨機分為二組：正常對照組（C組）、正常給藥組（D組）。A、D組給予消渴湯3～5 mL/Kg/d；B、C組每日按照同樣計算方法以蒸餾水灌胃；20 d后測定空腹、口服葡萄糖后30、60、120 min GLP-1和胰島素水平。

1.4標本采集及測定 將1.5 mL試管預置0℃冰水中。乙醚淺麻醉，尾靜脈取血1.2 mL加入裝有40000 u/mL抑肽酶20 μL試管中混勻，4℃下4000 rpm離心10 min，分離血清，-80℃保存。

利用生物素和抗生物素蛋白高度結合后顯色原理進行GLP-1（7-36）-amide和胰島素的濃度檢測。

1.5統計學分析 采用SPSS10.0進行統計學分析，在進行組間兩兩比較時使用q檢驗；在進行多組比較時采用單因素方差分析；在進行兩組比較時采用t檢驗。檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1尾靜脈注射STZ制作NIDDM大鼠動物模型 模型組體重與正常組體重、血清甘油三酯、膽固醇水平比較有顯著差異（P<0.05）。

2.2消渴湯對模型組和正常組大鼠空腹及口服葡萄糖后GLP-1和胰島素的影響。A、B組空腹GLP-1和胰島素濃度無顯著差異（P>0.05）；口服葡萄糖后30 min、60 min、120 min GLP-1和胰島素差異顯著（分別為P<0.05，P<0.01，P<0.01）。C、D組在空腹及口服葡萄糖后GLP-1和胰島素水平無顯著差異（P>0.05），見表2。

3討論

GLP-1釋放的調節機制非常復雜，在食物攝入初期，遠端L細胞快速釋放GLP-1的機制還未確定[3]，在此環路中最有可能發揮調節作用的物質是抑胃肽（GIP）和胃泌素釋放肽（GRP）。GLP-1能增強葡萄糖誘導的胰島素分泌，增強并且刺激胰島素基因表達與合成，GLP-1作用模式表明它可能用于糖尿病的治療。本實驗中，模型給藥組較對照組表現為GLP-1和胰島素分泌增強。

消渴湯中天花粉[4]具有負向免疫調節作用，在體外抑制淋巴細胞對可溶性抗原的增殖，抑制PHA誘發淋巴細胞增殖；山藥能降低糖尿病小鼠組織內過氧化脂質含量，糖尿病小鼠體內過氧化脂質含量增高，反映小鼠體內自由基大量產生和堆積使多器官遭到傷害。自由基對機體組織，尤其是對心臟、肝臟、胰臟和腎臟等器官損害，這可能是糖尿病并發癥重要原因。麥冬多糖可減弱四氧嘧啶對胰島B細胞損傷和改善受損傷的B細胞功能；藥理研究證實，人參總皂甙刺激動物釋放胰島素作用；枸杞能提高體內超氧化物歧化酶（SOD）活性及免疫機能，對抗氧化損傷。

消渴湯可能通過神經、內分泌、免疫反應調節等改善機體的糖代謝紊亂狀態，并可能通過非營養因素調節提高GLP-1和胰島素水平，具有雙向調節作用。

參考文獻：

[1]Goke R， Fehmann HC， Goke B. Glucagon-like peotide （7-36） amide is a new incretin.Eur J Clin Invest，2009，21：135.

[2]于德民，吳銳，尹濰，等.實驗性鏈脲佐菌素糖尿病動物模型的研究[J].中國糖尿病雜志，1995，3（2）：105.

[3]Komats R， Matsuyama T， Namba M， et al. Glucagonostatic and insulinotropic action of glucagon-like peptide-1（7-36）amide[J].Diabetes，1989，38：902.

[4]王筠默，姜名瑛.中藥藥理學[M].上海：上?？茖W技術出版社，1983∶105-108.

編輯/張燕