贊皇大棗黑腐病菌拮抗菌的室內(nèi)多重篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化

摘要：以贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao’）黑腐病主要病原菌莖點(diǎn)霉菌（Phoma sp.）為靶標(biāo)，對分離自土壤中的10株芽孢桿菌（Bacillus spp.）菌株進(jìn)行室內(nèi)多重篩選，并通過單因素試驗(yàn)對篩選獲得的目標(biāo)菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果表明，芽孢桿菌菌株B01對靶標(biāo)菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果；其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖

中圖分類：S476；S436.65 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）04-0809-05

In vitro Multiple Screening of Antagonistic Bacillus against Phoma sp. and Optimizing Its Fermentation Factors

LI Jing-hong，GAO Fen，WANG Jun-hong，WANG Meng-liang

（Institute of Applied Chemistry， Shanxi University， Taiyuan 030006，China）

贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao’）又名金絲大棗，是中國700多個棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個大、皮薄肉厚、可食率高、營養(yǎng)豐富，是天然的營養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實(shí)病害之一，近幾年來該病害發(fā)生日趨嚴(yán)重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達(dá)50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產(chǎn)量、果實(shí)品質(zhì)和商品價值。

贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對防治果實(shí)病害的農(nóng)藥使用具有較高的要求。生物農(nóng)藥相對于化學(xué)農(nóng)藥具有對環(huán)境、生態(tài)友好，對人類安全、無毒等優(yōu)點(diǎn)，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產(chǎn)物已成功應(yīng)用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經(jīng)濟(jì)和社會效益[4]。枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）GBO3（美國）、A213（澳大利亞）、RB-14（日本）、B916（中國）、B908（中國）等具有優(yōu)良性狀的菌株已經(jīng)應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐[5]；蠟質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus cereus）菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium）具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對外界環(huán)境有很強(qiáng)的適應(yīng)力和耐受性。目前有關(guān)棗黑腐病的生物防治報道較少，陳貽金等[7]將農(nóng)用鏈霉素（70～140 IU/mL）、DT（50%， 600倍稀釋液）、卡那霉素（140 IU/mL）和土霉素（210 IU/mL）等在棗黑腐病發(fā)病期內(nèi)混合使用，保果率在90% 以上；李志清等[8]將3%中生菌素（800倍稀釋液）、4%農(nóng)抗120（400倍稀釋液）和4%雙抗（400倍稀釋液）等與化學(xué)農(nóng)藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌（Bacillus spp.）開發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見報道。為尋找棗果實(shí)病害無公害防治的新途徑，本研究以莖點(diǎn)霉菌（Phoma sp.）為靶標(biāo)，對前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進(jìn)行了室內(nèi)多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗(yàn)，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 靶標(biāo)菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點(diǎn)霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學(xué)應(yīng)用化學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)室分離鑒定。

1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

1.2.1 病原菌培養(yǎng)

芽孢桿菌屬細(xì)菌，因具有生長速度快、營養(yǎng)需求簡單、有較強(qiáng)的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對人畜無害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點(diǎn)[13]而備受關(guān)注。一些芽孢桿菌菌株已經(jīng)開發(fā)成生物農(nóng)藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內(nèi)篩選中表現(xiàn)出了良好的抑菌效果，具有作為生物農(nóng)藥的潛力，但還需對其田間效果作進(jìn)一步試驗(yàn)研究。此外，還需對該菌株進(jìn)行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質(zhì)測定、劑型研制、安全性試驗(yàn)等方面的研究工作，為開發(fā)具有實(shí)際應(yīng)用價值的生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。

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