某規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬gE和gB抗體的檢測(cè)與分析

摘要 [目的] 了解龍巖市某規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染狀況和免疫抗體水平。[方法] 采用ELISA法對(duì)2010～2013年該場(chǎng)采集的種豬和育肥豬群的血清樣品共1 217份進(jìn)行豬偽狂犬野毒（gE）抗體和免疫（gB）抗體檢測(cè)。[結(jié)果]種豬與育肥豬豬偽狂犬野毒總樣品陽(yáng)性率分別為13.5%和28.4%，其中60～100日齡的育肥豬總樣品陽(yáng)性率為5.2%，100～210日齡的總樣品陽(yáng)性率為42.1%;種豬偽狂犬免疫抗體總樣品陽(yáng)性率分別為92.2%，60～160日齡的育肥豬豬偽狂犬免疫抗體陽(yáng)性率呈波動(dòng)變化，血清樣品總陽(yáng)性率為50%。[結(jié)論]該豬場(chǎng)育肥豬群野毒感染率較種豬群高，且100日齡以后的育肥豬群野毒感染率較高，種豬群的免疫抗體水平高于育肥豬群，80～130日齡育肥豬免疫抗體水平較低。

關(guān)鍵詞 豬偽狂犬病;ELISA;gE/gB抗體

中圖分類號(hào) S852.4 "文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A "文章編號(hào) 0517-6611（2014）32-11324-02

Detection and Analysis of gE/gB Antibodies against Porcine Pseudorabies in a Largescale Pig Farm

DAI Ailing，LING Mingfa， HUANG Siqiong，YANG Xiaoyan* et al

（Fujian Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine and Biotechnology， College of Life Sciences of Longyan University ， Longyan，F(xiàn)ujian 364000）

Abstract [Objective] The purpose was to understand the infection situation of porcine pseudorabies virus and the level of immune antibody against pseudorbies virus in a largescale pig farm of Longyan. [Method] 1217 blood serum samples from breeding pigs and fatten pigs of the largescale pig farm were collected during 2010-2013. The level of gE and gB antibodies of porcine pseudorabies virus were detected by using ELISA. [Result] The positive rate of antibody against porcine pseudorabies virus in breeding pigs and fatten pigs were 13.5% and 28.4% respectively. The positive rate of antibody against porcine pseudorabies virus in 60-100 dayold fatten pigs was 5.2%， and the positive rate of antibody against porcine pseudorabies virus in 100-210 dayold fatten pigs was 42.1%. The positive rate of antibody against porcine pseudorabies virus in breeding pigs was 92.2%. The positive rate of antibody against porcine pseudorabies virus in 60-160 dayold fatten pigs showed waving changes and the total positive rate of serum samples was 50%. [Conclusion] The infection rate of porcine pseudorabies virus in fatten pigs was higher than that in breeding pigs. And the infection rate of porcine pseudorabies virus in fatten pigs above 100 dayold was higher. And the immune antibody level of breeding pigs was higher than that in fatten pigs. And the immune antibody level of 80-130 dayold breeding pigs was lower.

Key words Porcine pseudorabies; ELISA; gE/gB antibody

基金項(xiàng)目 福建省區(qū)域科技重大項(xiàng)目（2009N3013）;龍巖市科技項(xiàng)目（2013LY07）

作者簡(jiǎn)介 戴愛(ài)玲（1969- ），女，福建永定人，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，碩士，從事生豬疫病診斷與防制研究。

*通訊作者，教授，碩士生導(dǎo)師，從事預(yù)防獸醫(yī)方面的教學(xué)與科研工作。

收稿日期 20141008

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。種豬主要表現(xiàn)為繁殖障礙，母豬可產(chǎn)死胎、木乃伊胎和流產(chǎn);對(duì)仔豬危害最嚴(yán)重，死亡率可達(dá)100%;成年豬危害不嚴(yán)重，一般為隱形感染，主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)綜合癥狀，整體生產(chǎn)性能變差[1]。PRV感染會(huì)引起機(jī)體免疫抑制，而且豬體可長(zhǎng)期帶毒和排毒，容易并發(fā)感染其他疾病[1]。2012年7月，筆者所在研究所監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)福建省龍巖市某規(guī)模化豬場(chǎng)的育肥豬出現(xiàn)PR野毒明顯轉(zhuǎn)陽(yáng)的現(xiàn)象，為此，筆者對(duì)該豬場(chǎng)2010年～2013年送檢血清樣品的PR野毒抗體和免疫（gB）抗體的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，旨在掌握豬群偽狂犬野毒感染狀況和免疫抗體的水平，為該場(chǎng)豬偽狂犬病的有效防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 血清來(lái)源

血清全部來(lái)源于龍巖市某存欄400多頭母豬的規(guī)模化豬場(chǎng)，被檢血清均為隨機(jī)采集，種豬為能繁母豬和公豬，育肥豬為60～210日齡，該豬場(chǎng)豬群均免疫過(guò)PRVgE基因缺失疫苗，種豬用某品牌進(jìn)口疫苗每年免疫3～4次，肌注2頭份/頭，育肥豬在65～70日齡免疫，肌注1頭份/頭。

1.2 豬偽狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒

HerdChek PRVgE和HerdChek PRVgB抗體檢測(cè)試劑盒，由美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)，購(gòu)自北京愛(ài)德士生物科技有限公司。

1.3 主要器材

Thermo Scientific Varioskan Flash酶標(biāo)儀、Thermo Scientific Heraeus Pico 17離心機(jī)、Thermo Scientific Finnpipette F1 單道移液器（HH39997，20～200 μl;HH39905，100～1 000 μl）、Thermo Scientific Finnpipette F1 多通道移液器（5～50 μl）等。

1.4 檢測(cè)方法

豬偽狂犬PRVgI和PRVgB抗體檢測(cè)的具體操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，PRVgB抗體的檢測(cè)只針對(duì)PRVgI抗體陰性的豬。

1.5 結(jié)果判定

當(dāng)陰性對(duì)照OD650值減去陽(yáng)性對(duì)照OD650的平均值大于或等于0.3才有效。S/N值小于或等于0.6，樣品判定為陽(yáng)性;S/N值介于0.6與0.7之間，判定為可疑，需要重新檢測(cè);S/N值大于0.7，判定為陰性。S/N值=樣品的OD650/陰性對(duì)照的平均OD650值。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬偽狂犬野毒抗體檢測(cè)情況

2.1.1 種豬PRV野毒抗體檢測(cè)結(jié)果。

由表1可知，該豬場(chǎng)2010年種豬PR野毒感染較為嚴(yán)重，第三季度的感染率升至44.8%。2011年至2012年上半年豬群野毒感染控制較好，陽(yáng)性率控制在0.9%～8.0%。2012第三季度和2013年第二季度豬群野毒感染率有所上升，分別為23.1%和10.1%。

表1 不同時(shí)間種豬PRV野毒抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)時(shí)間樣品總數(shù)∥份陽(yáng)性樣品數(shù)∥份gE抗體陽(yáng)

性率∥%

2010年第一季度31619.4

2010年第二季度671320.9

2010年第三季度291344.8

2011年第一季度6534.6

2011年第二季度2528.0

2011年第三季度6845.9

2012年第一季度10610.9

2012年第三季度1212823.1

2013年第二季度30310.0

合計(jì)5427313.5

2.1.2 育肥豬PRV野毒抗體檢測(cè)結(jié)果。

由表2可知，2010年和2011年該豬場(chǎng)育肥豬群野毒感染率較低，而2012年第三季度開(kāi)始豬群野毒感染率明顯上升，特別是第四季度感染率達(dá)到89.8%，感染壓力大，而2013年開(kāi)始野毒感染率出現(xiàn)下降，第一季度和第二季度的野毒感染率分別為9.2%和17.3%。

表2 不同時(shí)間育肥豬PRV野毒抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)時(shí)間樣品總數(shù)∥份陽(yáng)性樣品數(shù)∥份gE抗體陽(yáng)

性率∥%

2010年第三季度7145.6

2011年第三季度8500

2012年第三季度1892513.2

2012年第四季度15714189.8

2013年第一季度9899.2

2013年第二季度751317.3

合計(jì)67519228.4

由表3可知，2010～2013年60～100日齡的育肥豬群PRV野毒感染率分別為5.5%、0%、0%和9.3%，而100～210日齡的育肥豬群PRV野毒感染率分別為5.7%、0%、57.2%和20%。由此可見(jiàn)，100～210日齡豬群野毒感染率高于60～100日齡的豬群。

表3 不同日齡育肥豬PRV野毒感染率

%

年份60～100日齡100～210日齡

2010年5.5（2/36）5.7（2/35）

2011年0（0/40）0（0/45）

2012年0（0/56）57.2（166/290）

2013年9.3（11/118）20（11/55）

合計(jì)5.2（13/250）42.1（179/425）

2.2 豬偽狂犬免疫抗體檢測(cè)情況

2.2.1 種豬PRV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果。

由表4可知，2012年2月和4月檢測(cè)的種豬群PRV免疫抗體陽(yáng)性率達(dá)到100.0%，而7月免疫抗體降低至77.5%。2013年2月和5月抽檢，PRV免疫抗體陽(yáng)性率為100.0%和78.9%。

2.2.2 不同日齡育肥豬群PRV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果。

由表5可知，隨著日齡的增大，2012～2013年育肥豬群PRV免疫抗體陽(yáng)性率從60日齡的62.5%下降到90～100日齡的31.6%，而120～130日齡免疫抗體陽(yáng)性率由33.3%上升至130～160日齡的72.7%。

表4 種豬PRV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)時(shí)間樣品數(shù)∥份陽(yáng)性樣品數(shù)∥份gB抗體陽(yáng)性率∥%

2012-026161100.0

2012-044545100.0

2012-07403177.5

2013-023535100.0

2013-05383078.9

合計(jì)21920292.2

表5 不同日齡育肥豬PRV免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

日齡∥d樣品數(shù)∥份陽(yáng)性樣品數(shù)∥份gB抗體陽(yáng)性率∥%

608562.5

70～80161062.5

80～90401537.5

90～10019631.6

120～13012433.3

130～160332472.7

合計(jì)1286450.0

3 結(jié)論與討論

目前，我國(guó)用于預(yù)防PRV的疫苗主要是gE基因缺失的疫苗，這種疫苗的使用可以通過(guò)血清學(xué)方法區(qū)分免疫豬和自然感染豬[2]。配套使用PRV gI抗體檢測(cè)試劑盒能夠快速、方便、準(zhǔn)確檢測(cè)PR野毒抗體，從而評(píng)估豬群PR野毒感染狀況。Herdchek豬偽狂犬病gB抗體檢測(cè)試劑盒也是一種極其敏感的PRV全抗體檢測(cè)方法，非常微量的抗體水平就能夠產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果。此次檢測(cè)的Herdchek豬偽狂犬病gB抗體豬群均為PR野毒抗體陰性豬群，因此gB抗體水平能夠反映疫苗免疫效果。

PR野毒感染檢測(cè)結(jié)果表明，該規(guī)模化豬場(chǎng)種豬群野毒感染狀況呈波動(dòng)變化，在2010年野毒感染比較嚴(yán)重，2010年第一、二、三季度PR野毒感染率分別為19.4%、20.9%和44.8%。豬場(chǎng)采取加強(qiáng)免疫與淘汰帶毒豬等措施后，野毒感染狀況明顯好轉(zhuǎn)，2011年種豬群野毒感染率均在8 %以下。但是，2012年第三季度檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)野毒感染率明顯上升，種豬PR野毒感染率達(dá)到23.1%;2013年出現(xiàn)下降，第一季度和第二季度PR野毒感染率分別為9.2%和17.3%。同時(shí)檢測(cè)育肥豬的PR野毒感染情況發(fā)現(xiàn)2012年第三季度、第四季度感染率分別為13.2%和89.8%。2010年～2013年不同日齡育肥豬PR野毒感染檢測(cè)結(jié)果表明100～210 日齡豬群的野毒感染率要明顯高于60～100 日齡。

偽狂犬免疫（gB）抗體檢測(cè)表明種豬群的抗體陽(yáng)性率明顯要高于育肥豬，種豬抗體陽(yáng)性率為77.5%～100.0%;育肥豬免疫抗體陽(yáng)性率出現(xiàn)較為明顯的波動(dòng)，60～80日齡的陽(yáng)性率為62.5%，80～130日齡的陽(yáng)性率為30.0%～40.0%，130～160日齡的免疫抗體陽(yáng)性率為72.7%，可能與該豬場(chǎng)在65～70日齡采取免疫某進(jìn)口豬偽狂犬病疫苗有關(guān)。種豬由于采取每年3～4次普免豬偽狂犬病疫苗，免疫抗體水平較高，同時(shí)野毒感染率也較低，但是育肥豬在80～130日齡免疫抗